徐崢嶸，賀奮義

（甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州 730000）

氣候環(huán)境因素對(duì)種公牛精液品質(zhì)的影響不可低估，我國西北較南方氣溫偏低，種公牛適宜在環(huán)境溫度較低的環(huán)境下生產(chǎn)，但在相對(duì)較高或較低的溫度條件下對(duì)種公牛的生產(chǎn)是極為不利的［1］，據(jù)報(bào)道夏季高溫環(huán)境下，熱應(yīng)激會(huì)引起公牛睪丸變性、性欲減退［2］，原精活力、精子密度、活精子百分?jǐn)?shù)、頂體完整率均處于最低水平，極顯著低于春、秋、冬非熱應(yīng)激季節(jié)，精子畸形率在熱應(yīng)激期處于最高水平，極顯著高于非熱應(yīng)激期［3］。本實(shí)驗(yàn)通過最冷和最熱季節(jié)對(duì)比進(jìn)行分析研究，試驗(yàn)如下：

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)、動(dòng)物和時(shí)間

從甘肅省家畜繁育中心種公牛站隨機(jī)選取5頭種公牛。試驗(yàn)時(shí)間為2011年1月～2012年10月，2011年、2012年年均最高溫度為都在7月，最低溫度在1月。武威地區(qū)2011年～2012年月平均氣溫曲線圖：

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

圖1 溫度變化曲線圖

隨機(jī)從甘肅省家畜繁育中心種公牛站抽取5頭牛進(jìn)行試驗(yàn)。2011、2012年7月的平均溫度為25℃、24.6℃，1月溫度為－11.2℃、－9.5℃，4月溫度為12℃、13.2℃，9月份溫度為14.4℃、16℃。將4月份或9月份分生產(chǎn)數(shù)據(jù)作為對(duì)照組，本試驗(yàn)選取2011年4月份為對(duì)照組，2011年1月和7月份的生產(chǎn)數(shù)據(jù)作為試驗(yàn)組一和試驗(yàn)組二進(jìn)行分析研究。

1.3 內(nèi)容和方法

1.3.1 精液的采集 所用的器械事先要進(jìn)行沖洗，消毒；玻璃器皿洗凈后送入干燥箱（160℃，30min），假陰道和其他器械等用75%酒精棉球擦拭消毒，假陰道安裝好套上保護(hù)套，消毒后的假陰道只能使用一次。假陰道內(nèi)注水溫度在40℃左右，注水量約在300ml，恒溫箱內(nèi)溫度控制在40℃～42℃，采精時(shí)的內(nèi)胎溫度保持在38℃～40℃之間［4］，內(nèi)胎溫度可根據(jù)不同的牛做適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，最高不可超過43℃。潤(rùn)滑劑均勻涂抹在假陰道內(nèi)胎的前2／3，潤(rùn)滑劑用白凡士林與液態(tài)石蠟油按1∶1比例調(diào)制［5］。假陰道的內(nèi)胎壓力（采精前從假陰道活塞孔打氣）以假陰道口呈三角形為宜。臺(tái)牛要健壯、性情溫順、無疫病，外陰、臀部清洗干凈。公牛采精時(shí)采取引誘、被爬跨、反復(fù)空爬等方法刺激公牛興奮［6］。還可更換采精地點(diǎn)，更換臺(tái)牛等方法增加種公牛的興奮度［7］。采精場(chǎng)地應(yīng)保持安靜，地面清潔并鋪設(shè)防滑墊，以免公牛采精時(shí)滑倒。當(dāng)公牛性欲旺盛時(shí)采精，采精員右手持假陰道，站在公牛右后方，當(dāng)公牛起跳，前肢爬上臺(tái)牛后迅速向前托著公牛包皮，右手持假陰道與臺(tái)牛成40度角，假陰道口斜向下方，左右手配合將公牛陰莖自然地引入假陰道內(nèi)，公牛向前一沖即完成射精動(dòng)作，待公牛前肢落地，緩慢地把假陰道脫出［8］。打開活塞放氣，小心取下集精管，迅速轉(zhuǎn)移至精液檢測(cè)室進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 精液的檢查 先對(duì)所采得的精液進(jìn)行感官評(píng)定，新鮮精液應(yīng)呈乳白稍帶黃色或奶油色不透明液體，雜質(zhì)太多的精液要廢棄，精液呈現(xiàn)紅的顏色，常常是生殖道出血，而呈現(xiàn)綠色通常是生殖道或副性腺某些部分感染化膿所致。褐色的精液多由陳舊的血液或糞便污染引起［9］。取一滴原精液加蓋玻片后在400倍的恒溫（37℃）可視顯微鏡下觀察呈直線運(yùn)動(dòng)精子的百分?jǐn)?shù)，活率≥65%可進(jìn)行稀釋封裝（GB 4143－2008）。精液密度的測(cè)定目前常用精子密度測(cè)定儀（法國MIV公司生產(chǎn)），密度測(cè)定儀根據(jù)分光光度計(jì)測(cè)定原理和計(jì)算功能，能迅速測(cè)定出每毫升精液中精子密度，并且可以提供相關(guān)的數(shù)據(jù)如應(yīng)加的稀釋液量、可封裝細(xì)管量等［10］。

1.3.3 精液的稀釋 目前普遍采用的是進(jìn)口稀釋液（德國minitube公司生產(chǎn)），一步稀釋法，認(rèn)為對(duì)精液冷凍后活力影響不大［11］。將稀釋液按照1∶4的比例進(jìn)行稀釋，加稀釋液要緩慢、輕輕搖勻，稀釋液溫度與精液溫度要等溫。凡是精液一降溫、平衡，其溫度不允許再回升［12］。

1.3.4 精液的分裝 使用細(xì)管精液分裝機(jī)（法國IMV卡蘇公司生產(chǎn)），是一套在完成灌裝與封口后即可進(jìn)行噴墨印字的一體化設(shè)備，工作程序在盡可能不被外界污染的情況下完成，對(duì)細(xì)管精液衛(wèi)生質(zhì)量保證極為有利［13］。細(xì)管的容量為0.25mL。

1.3.5 精液的平衡 平衡是稀釋后精子在降溫和在低溫下的一個(gè)適應(yīng)過程，是精細(xì)胞重建離子平衡變化的過程［14］，這個(gè)過程是必須的，不能省略。將分裝完畢的細(xì)管精液碼放在平衡架上，放入4℃的平衡柜中降溫平衡。平衡的時(shí)間一般為2h～4h。

1.3.6 精液的冷凍 精子冷凍采用精液冷凍儀（法國IMV卡蘇公司生產(chǎn)），是由計(jì)算機(jī)控制的全自動(dòng)冷凍容器，其理論依據(jù)是在冷凍降溫的過程中，因?yàn)榫?xì)胞內(nèi)的冰晶的形成，使細(xì)胞內(nèi)外發(fā)生一系列的物理變化［15］，不同程度損害精細(xì)胞，因此需要這個(gè)降溫冷凍必須快速越過冰晶危險(xiǎn)區(qū)域（－0℃～－60℃）進(jìn)入玻璃化狀態(tài)（－130℃以下）［16］這時(shí)可是一種非結(jié)晶的固態(tài)，其性質(zhì)更接近于液態(tài)使精細(xì)胞免受冰結(jié)晶凍害。公牛精液冷凍過程降溫如表1［17］：

表1 精液冷凍過程一覽表

2 結(jié)果與分析

2.1 不同月份種公牛精子質(zhì)量參數(shù)比較

根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求，5頭種公牛采精后，對(duì)精液量等精子質(zhì)量品質(zhì)評(píng)價(jià)和隨機(jī)抽取細(xì)管凍精活率進(jìn)行檢查，檢查結(jié)果如下，2011年1月采精檢測(cè)表（表2），2011年4月采精檢測(cè)表（表3）2011年7月采精檢測(cè)記錄表，詳見表4。

表2 2011年1月采精檢測(cè)表

表3 2011年4月采精檢測(cè)表

表4 2011年7月采精檢測(cè)記錄表

圖2

表5 不同季節(jié)種公牛精液評(píng)定

2.2 數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用excel計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行一維方差分析。試驗(yàn)按照牛冷凍精液生產(chǎn)規(guī)則進(jìn)行生產(chǎn)，由上表可以看出，在環(huán)境溫度在－11.2℃時(shí)5頭種公牛的精液量平均為5.7mL，原精活率66.8%，精液密度13.3億／mL，凍后活率37.4%，生產(chǎn)凍精數(shù)為275.8劑，精子畸形率17.8%。當(dāng)環(huán)境溫度在25℃時(shí)5頭種公牛的平均精液量為5.88mL，原精活率67.2%，精液密度16.64億／mL，凍后活率33.8%，生產(chǎn)凍精數(shù)143.4劑，精子畸形率23%。對(duì)照組即在環(huán)境溫度12℃時(shí)精液量為6.6mL，原精活率73.2%，精液密度16.92億／mL，凍后活率41.8%，生產(chǎn)凍精數(shù)404.4劑，精子畸形率12.6%。按照國標(biāo)（GB 4143－2008）牛冷凍精液要求原精活率≥65%，精子密度≥6×108個(gè)／mL，凍后精子畸形率≤18%，凍后活率≥35%。精液量之間差異顯著（P＜0.05），原精活率之間差異顯著（P＜0.05），精子畸形率之間差異顯著（P＜0.05）。

3 小結(jié)與討論

環(huán)境溫度過高或者過低都會(huì)影響精液品質(zhì)，種公牛在適宜的溫度下生產(chǎn)的精液品質(zhì)也會(huì)更加優(yōu)良，種公牛在溫度較高的條件下生產(chǎn)精液品質(zhì)比在低溫條件下還要差，種公牛最適宜的生產(chǎn)溫度為12℃～16℃，溫度越高（7月份的日最高溫度達(dá)到42℃）對(duì)種公牛的精液品質(zhì)影響越大，使種公牛的精液量下降，密度降低，精子畸形率明顯升高，精子的復(fù)蘇率也有較大的影響，所以有條件的情況下，可以對(duì)種公牛采取，淋浴將溫或加裝降溫設(shè)備，比如空調(diào)等，采精時(shí)可安排在早晚比較涼爽的時(shí)間進(jìn)行，過于極端的天氣種公牛的下丘腦分泌促性腺激素釋放激素減少，使垂體分泌的促卵泡素、促黃體素減少，睪丸分泌的雄性激素下降，使種公牛出現(xiàn)繁殖機(jī)能下降，甚至導(dǎo)致不育。此外，環(huán)境影響的直接作用于睪丸，影響睪丸的支持細(xì)胞和精子發(fā)生過程，造成可恢復(fù)性或永久性的生殖障礙。所以對(duì)環(huán)境的調(diào)控可極大提高種公牛的生產(chǎn)性能及精液的品質(zhì)，相反在低溫環(huán)境下，對(duì)牛舍或采精廳可采取供暖和保溫等措施，保證種公牛在適宜溫度下生產(chǎn)，使優(yōu)秀的種公牛的優(yōu)良基因能更大限度的發(fā)揮，增加黃牛改良的進(jìn)程。

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