王鑫 吉亞君

肺癌是目前影響人類健康和生命安全的重要疾病, 由于此類疾病的潛伏期較長(zhǎng), 前期癥狀不典型等特點(diǎn), 在肺癌患者初診、確診時(shí)往往已經(jīng)是中晚期, 即使進(jìn)行手術(shù)治療3年生存率也較低, 因此對(duì)于肺癌的機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步的研究和了解, 提高早期診斷率是控制此類疾病, 改善肺癌患者生存期和生活質(zhì)量的關(guān)鍵。CD44是位于染色體11p13上的單一基因編碼的糖蛋白, 本次試驗(yàn)應(yīng)用免疫組化法進(jìn)行CD44在非小細(xì)胞肺癌和正常肺組織中表達(dá)的檢測(cè), 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年1月～2012年12月之間來(lái)本院確診并進(jìn)行手術(shù)治療的40例非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者,包括男27例, 女13例, 年齡24～77歲, 平均年齡(62.5±4.9)歲。病理組織分型包括鱗癌20例, 腺癌20例, 術(shù)中取肺癌組織作為研究材料, 同時(shí)選取其他開(kāi)胸手術(shù)治療的20例患者正常肺組織為對(duì)照組。

1.2 方法 采用免疫組化法進(jìn)行兩組CD44表達(dá)的檢驗(yàn),步驟如下：① 脫蠟, 水化組織切片；②預(yù)處理組織切片；③PBS沖洗, 2 min/次, 共沖洗3次；④一抗孵育30 min或60 min； ⑤ PBS沖洗 , 2 min/次 , 共沖洗 3次 ； ⑥ PicTure-Plus液孵育15～30 min；⑦PBS沖洗, 2 min/次, 共沖洗3次；⑧DAB染色, 光鏡下控制時(shí)間； ⑨蒸餾水漂洗；⑩復(fù)染及封片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

CD44表達(dá)部位在細(xì)胞膜或細(xì)胞漿, 陽(yáng)性細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)棕黃色顆粒狀物質(zhì), 顆粒狀、不均勻分布, 400倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)視野, 每個(gè)視野可見(jiàn)100個(gè)腫瘤細(xì)胞, 將染色陽(yáng)性細(xì)胞總和除以500得到該例細(xì)胞陽(yáng)性率, 以10%為界限, 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%則視為陽(yáng)性表達(dá)。本次研究中CD44蛋白在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為65.0%(26/40), 在正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為20.0%(4/20), 在肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于正常組織, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

Dall等人曾指出CD44在細(xì)胞間質(zhì)相互作用、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)以及腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中都有著重要的作用, 但缺乏必要的臨床依據(jù)加以證明, 直至CD44與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的相關(guān)性被Nawa等［1］人證實(shí), 他們的研究發(fā)現(xiàn)含變異體的v6僅在高度轉(zhuǎn)移性的大鼠癌細(xì)胞中表達(dá), 在非轉(zhuǎn)移性的癌細(xì)胞中不表達(dá), 而針對(duì)CD44變異體的抗體則能夠有效的抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移, 從而證實(shí)了這一點(diǎn)。Sasaki等［2］人采用免疫印跡法對(duì)肺癌細(xì)胞中的CD44表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè), 發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)率為71.43%, 而陽(yáng)性表達(dá)均為非小細(xì)胞肺癌, 9例小細(xì)胞肺癌中無(wú)一例陽(yáng)性表達(dá)。區(qū)景松等人采用免疫組化法檢測(cè)CD44與NSCLC的關(guān)系中發(fā)現(xiàn), CD44的高低和患者的發(fā)病時(shí)間存在一定相關(guān)性, 原發(fā)灶的表達(dá)率要顯著高于轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)率。

在本次研究中發(fā)現(xiàn), CD44在非小細(xì)胞肺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到65.0%, 這個(gè)數(shù)值遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組的20.0%,兩者對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 這說(shuō)明CD44在肺癌組織中的表達(dá)顯著提高。有文獻(xiàn)研究顯示［3］, CD44的表達(dá)和患者年齡、性別、腫瘤分化程度以及組織學(xué)類型均無(wú)明顯相關(guān), 但與是否轉(zhuǎn)移、臨床分期和患者生存期存在顯著相關(guān), 考慮原因主要是由于：①腫瘤細(xì)胞能夠通過(guò)CD44與其他細(xì)胞建立聯(lián)系, 通過(guò)CD44黏附到透明質(zhì)酸上更加利于克??；②CD44能夠?qū)τ跁?huì)刺激腫瘤細(xì)胞增殖的配體進(jìn)行識(shí)別；③CD44會(huì)參與透明質(zhì)酸的降解, 加速了腫瘤細(xì)胞的侵入。

對(duì)于CD44在小細(xì)胞肺癌中的低表達(dá), 有學(xué)者［4］認(rèn)為可能是由于CD44在腫瘤各個(gè)階段的表達(dá)不同, 或是表達(dá)過(guò)度導(dǎo)致細(xì)胞-基質(zhì)相互作用造成表達(dá)的下調(diào)。Finke等人的研究發(fā)現(xiàn)CD44在結(jié)腸癌中的表達(dá)增強(qiáng)存在一定的階段性, 在發(fā)展早期存在高度表達(dá), 而發(fā)生轉(zhuǎn)移后表達(dá)降低, 在非小細(xì)胞肺癌中是否存在這樣的現(xiàn)象仍需進(jìn)一步的研究證實(shí)。但從目前來(lái)看CD44蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)對(duì)于臨床診斷是有一定的幫助的, 能夠作為非小細(xì)胞肺癌臨床診斷的標(biāo)志物。

［1］Nawa A, Sawada H, TohY, et al.Tumormetastas is- associated human CD44 gene: Effects of antisense oligonucleotides on cell growth.Intern JMed Biol Environ, 2000, 28(1): 33- 39.

［2］Sasaki H, Moriyama S, Nakashima Y, et al.Expression of the CD44 in advanced lung cancer .Lung Cancel, 2002, 35(2):149-154.

［3］Thome M, Schneider P, Hofmann K, et al.Viral FLICE inhibitoryproteins(CD44) prevent apoptosis induced by death receptors.Nature, 1997, 386(6624) : 517- 521.

［4］車國(guó)軍, 周清華, 唐夢(mèng)琳, 等.肺癌中的血管生成及其臨床意義探討 .中國(guó)腫瘤臨床雜志, 2002, 29( 9): 609 - 612.