孫慕白，金 竺

（1.東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)院，哈爾濱 150040;2.長(zhǎng)春市中醫(yī)院，長(zhǎng)春 130022）

紅參炮制工藝及質(zhì)量研究

孫慕白1，金 竺2*

（1.東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)院，哈爾濱 150040;2.長(zhǎng)春市中醫(yī)院，長(zhǎng)春 130022）

目的 細(xì)化紅參的炮制工藝參數(shù)，為紅參的炮制規(guī)范提出參考性建議，完善紅參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用單因素考察的方法細(xì)化紅參的炮制時(shí)間和溫度，利用薄層色譜法建立紅參的特征指紋譜，采用紫外分光光度法測(cè)定紅參中總皂苷的含量。結(jié)果 確定紅參的炮制時(shí)間為3 h，炮制溫度為100℃;紅參特征指紋譜Rf值范圍為0.5～0.9;紅參中總皂苷含量不低于1.97%。結(jié)論 從外觀評(píng)價(jià)與薄層色譜細(xì)化了紅參的炮制工藝，完善了紅參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為紅參的開發(fā)提供了依據(jù)。

紅參;炮制工藝;指紋圖譜;含量測(cè)定

通過人參與紅參藥理作用的比較可以看出［1-3］，人參經(jīng)加工炮制后不但使成分發(fā)生變化，產(chǎn)生了新的成分，而且某些成分間的含量比例也隨之發(fā)生改變，從而直接造成了紅參的某些藥理作用的性質(zhì)和強(qiáng)度和人參形成差別。紅參皂苷成分的研究晚于人參皂苷成分的研究。近年來，對(duì)其加工方法的探討很多，認(rèn)為紅參較之人參有防蟲蛀、防腐、易于保存、保持藥效等優(yōu)點(diǎn)。相反，目前市場(chǎng)上流通的紅參卻并沒有嚴(yán)格的炮制規(guī)范，產(chǎn)地、外觀、含量等均有不同程度的差異，這無疑對(duì)紅參的療效有著很大的影響。因此，本文從紅參的炮制方法研究入手，通過對(duì)時(shí)間、溫度等不同條件的摸索，細(xì)化紅參的炮制工藝參數(shù)，為紅參的炮制方法提出參考性建議，同時(shí)增加了紅參薄層色譜鑒別及總皂苷含量測(cè)定項(xiàng)，為控制紅參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，填補(bǔ)了有關(guān)紅參質(zhì)量研究的空白。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材 鮮參藥材，購(gòu)于靖宇縣海源中藥材飲片有限公司，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)鑒定為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.（Panax schinseng Nees）的根，符合《中國(guó)藥典》（2005年一部）人參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 儀器與試藥 蒸參箱（上海南陽(yáng)儀器有限公司）;50探頭型紫外可見分光光度計(jì)（美國(guó)Varian公司）;DZF-6050K型真空干燥箱（上海橫科科技有限公司）。人參 Re、Rb1、Rg1、Rg2 對(duì)照品（批號(hào):111846-201001，供含量測(cè)定用，規(guī)格:20 mg，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所）;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 炮制工藝考察 從檢索文獻(xiàn)［4-6］得出紅參的炮制過程可分為凈制、蒸制、烘干、晾曬、二次烘干5個(gè)過程，在此基礎(chǔ)上，實(shí)驗(yàn)又針對(duì)不同因素影響紅參炮制工藝進(jìn)行了考察，包括時(shí)間及溫度。

2.1.1 時(shí)間因素的考察 首先取3分人參放入帶有屜布的蒸參箱內(nèi)，將溫度設(shè)置為100℃，分別蒸制1，3，5 h。將蒸制好的人參取出，放涼，切片，放入50℃真空干燥箱內(nèi)至參片完全干燥，此過程約需要48 h。

2.1.2 溫度因素的考察 再取等量3分人參，分別放入帶有屜布的蒸參箱中，將蒸參箱分別設(shè)為80，100，120℃，蒸制3 h。將蒸制好的人參取出，放涼，切片，放入50℃真空干燥箱內(nèi)至參片完全干燥，此過程約需要48 h。

2.2 紅參的質(zhì)量研究

2.2.1 薄層色譜鑒別［6］

2.2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 取人參皂苷Re對(duì)照品，加甲醇制成1 mL含2 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。

2.2.1.2 供試品溶液的制備 取不同炮制條件下干燥后的紅參片，粉碎，過40目篩，分別取本品粉末1 g，置圓底燒瓶中，加入三氯甲烷40 mL，加熱回流1 h。棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加水0.5 mL攪拌濕潤(rùn)，加水飽和正丁醇10 mL，超聲處理30 min，吸取上清液加三倍量氨試液（配制方法依藥典附錄:濃氨水400 mL加水至1 000 mL），搖勻，放置分層，取上層置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状? mL，使溶解，作為供試品溶液。

2.2.1.3 展開 以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。

2.2.1.4 檢視 噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光燈及紫外燈（365 nm）下檢視。

2.2.1.5 結(jié)果 100℃條件下蒸制1，3，5 h以及Re對(duì)照品。展開劑為三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）下層溶液。由此薄層板可以看出，溫度不變的條件下，蒸制3 h與蒸制5 h斑點(diǎn)顏色較深，說明皂苷含量相對(duì)較多，且二者的皂苷種類也多于蒸制1 h的紅參。說明在溫度不變的情況下蒸制3 h與蒸制5 h為較優(yōu)炮制工藝。

炮制3 h條件下，80，100，120℃以及Re對(duì)照品，展開劑為三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）下層溶液。由此薄層板可以看出，在時(shí)間不變的條件下，溫度在100℃時(shí)人參皂苷Re的斑點(diǎn)較清晰，含量較多，其皂苷種類也多于80℃的炮制品。而在120℃相對(duì)于其他2種條件某些斑點(diǎn)顏色很淺而某些斑點(diǎn)顏色很深，說明某些成分發(fā)生了轉(zhuǎn)移。

2.2.2 紅參總皂苷含量測(cè)定原理及方法［7-8］分光光度法是通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。常用的波長(zhǎng)范圍為:1）200～400 nm的紫外光區(qū);2）400～760 nm的可見光區(qū);3）2.5～25 μm的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)。單色光輻射穿過被測(cè)的物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度成正比，其關(guān)系如下:A=ECL，式中A為吸收度，T為透光率，E為吸收系數(shù)，采用的表示方法是（E1%1 cm），即吸收度換算成溶液濃度為1%（g/mL），液層厚度為1 cm的數(shù)值;C為100 mL溶液中所含被測(cè)物質(zhì)的重量，g按干燥品或無水物計(jì)算;L為液層厚度，單位為cm。

測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。

2.2.3 方法學(xué)考察［9］

2.2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取人參皂苷Re對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成濃度1.012 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.3.2 供試品溶液的制備 取樣品粉末（過4號(hào)篩）約0.5 g，精密稱定，置離心管中，加甲醇約20 mL，超聲（功率250 W，頻率20 kHz）提取3次，20 min/次，離心，分離甲醇并蒸干，殘?jiān)?0 mL水超聲溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加水飽和正丁醇振搖提取3次，20 mL/次，合并正丁醇液，移至分液漏斗中，加入氨試液洗滌2次，每次20 mL，棄去氨試液，分取正丁醇提取液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶?jī)?nèi)，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.2.3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 精密吸取人參皂苷Re對(duì)照品，供試品溶液適量，置10 mL具塞試管中，水浴揮干溶劑，精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，再精密加入高氯酸溶液0.8 mL混勻，置60℃水浴中15 min取出，立即放入冰水浴中2 min，精密加入冰醋酸5 mL混勻，消除氣泡后置紫外掃描儀器上，結(jié)果表明，人參皂苷Re對(duì)照品溶液和供試品溶液在547 nm處有最大吸收，確定547 nm為紅參總皂苷的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密稱取干燥恒重的人參皂苷Re對(duì)照品5.0 mg，置25 mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分別置于 10 mL 容量瓶中，并各加乙醇1.0 mL，然后精密加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。同時(shí)取乙醇1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，作為空白對(duì)照。于547 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以對(duì)照品溶液濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)（X），吸光度A為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程A=32.65C－0.000 2，r=0.998 9。結(jié)果顯示，人參皂苷 Re對(duì)照品在0.041 2～0.202 3 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3.5 精密度試驗(yàn) 依法精密稱取同一供試品按上述方法連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算供試品含量，以考察本方法的重現(xiàn)性。求得平均吸收度0.4186，RSD為1.17%。

2.2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取6分紅參各0.5 g，精密稱定，按供試品項(xiàng)下操作，制得供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算求得平均含量為2.46%，RSD為1.51%。

2.2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取紅參供試品溶液分別在0，0.5，1，1.5，2，2.5，3 h 進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算平均吸收度0.515 2，RSD為1.03%。結(jié)果表明樣品在3 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.3.8 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收率試驗(yàn)法，精密稱定已知含量的供試品置100 mL容量瓶中，按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，并依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為98.05%，RSD為2.07%。

2.2.4 樣品中總皂苷含量測(cè)定結(jié)果 分別將上述選定的2種炮制品分別制成供試品溶液，按上述方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 總皂苷含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 小結(jié)

本文為紅參的炮制規(guī)范提供了數(shù)據(jù)支持，建議在今后的紅參炮制中可依據(jù)不同人群的不同需求采用不同的炮制方法，達(dá)到充分利用紅參或達(dá)到最大藥效發(fā)揮的目的。也可為紅參提供更廣闊的市場(chǎng)需求，使消費(fèi)者更明確的購(gòu)買到所需紅參品種。建議在今后的藥典中可加入紅參炮制規(guī)范的相關(guān)內(nèi)容以及紅參薄層色譜的特殊鑒別，使紅參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更加全面。

紅參炮制過程中蒸制時(shí)間對(duì)人參皂苷含量有顯著影響，而提溫時(shí)間對(duì)人參皂苷含量影響不大。但是提溫時(shí)間明顯決定著紅參的外觀。溫度過高，紅參失水過快而導(dǎo)致許多縱皺紋，而溫度過高容易使紅參顏色過暗。

通過對(duì)紅參不同炮制工藝的考察，對(duì)比了在不同炮制條件下紅參中總皂苷的含量差異，說明了在不同溫度，不同時(shí)間下紅參中總皂苷含量雖無明顯差異，但皂苷的種類仍然是有差異的，說明在《中國(guó)藥典》2005年版中紅參的薄層鑒別僅以人參為參考是不全面的。

:

［1］竇德強(qiáng)，任杰，陳穎，等.商品人參根的化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2003，28（6）:522-524.

［2］劉丹，濮社班，錢士輝，等.中國(guó)紅參化學(xué)成分的研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2011，36（4）:462-464.

［3］鄭重，宋鳳瑞，劉淑瑩，等.人參、紅參皂苷類成分指紋圖譜研究［J］.質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2012，33（6）:327-333.

［4］張穎，郝穎，楊立曼，等.不同蒸制工藝對(duì)紅參中人參皂苷類成分的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（21）:16-20.

［5］李卓艷，李德坤，周大錚，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選紅參加工工藝［J］.中成藥，2011，33（6）:1005-1007.

［6］畢建云，靳光乾，王亮，等.市售紅參飲片質(zhì)量分析［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（2）:70-73.

［7］楊凱，石瑩，李鎬，等.微米紅參的制備及含量測(cè)定［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（14）:17-19.

［8］黃曉巍，初洪波，位鴻，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選參紅補(bǔ)血顆粒提取工藝［J］.吉林中醫(yī)藥，2012，32（11）:1152-1153.

［9］張浩，許世泉，張瑞，等.紅參中外源糖含量的測(cè)定［J］.特產(chǎn)研究，2011，33（4）:56-59.

Processing technology and quality of red ginseng

SUN Mubai1，JIN Zhu2*
（1.Northeast University of Forestry，Biological Science，Haerbin 150040，China;2.Changchun Hospital of TCM，Changchun 130022，China）

ObjectiveThrough the refinement of processing technology parameters of red ginseng，referential suggestions are made for standards of red ginseng processing to improve its quality standard.MethodsThrough single factor investigation，researchers classify the time and temperature in red ginseng's processing.Thin layer chromatography is used to establish the dactylogram for red ginseng's characteristics;ultraviolet spectrophotometry is used to examine the amount of saponins in red ginseng.ResultsThe processing time of red ginseng is 3 hours and the processing temperature 100 ℃.In the dactylogram for red ginseng's characteristics，its Rf value was 0.5 ～0.9 and the volume of saponin in red ginseng is no less than 1.97%.ConclusionThrough the evaluation on its appearance and refinement of its processing technology，the research improved the quality standards for red ginsen and provided the basis for the development of red ginseng.

red ginseng;processing technology;dactylogram;quantity examination

R283.4

A

2095－6258（2014）04－0611－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.04.018

吉林省科技廳計(jì)劃項(xiàng)目（20110908）。

孫慕白（1992－），女，大學(xué)本科。研究方向:生物科學(xué)。

金 竺，女，碩士，電話:18743062321，電子信箱:584673587@qq.com。

2014－04－08）