陳玉時

膿毒血癥是嚴重創(chuàng)傷、感染、燒傷、休克、重癥胰腺炎、重大手術(shù)等臨床危重患者最為常見的嚴重并發(fā)癥之一，是導(dǎo)致多器官功能障礙綜合癥（MODS）及膿毒性休克的發(fā)生的重要病因[1]。已有研究表明，過度的炎癥反應(yīng)和凝血系統(tǒng)功能紊亂在膿毒血癥病情加重、惡化過程及MODS發(fā)生、發(fā)展中起了重要作用，而血小板活化是凝血系統(tǒng)激活的啟動因素之一，同時還是連接炎癥反應(yīng)和凝血系統(tǒng)之間的橋梁[2-3]。本研究通過測定膿毒血癥患者血小板各參數(shù)及血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P的表達水平，探討膿毒血癥患者血小板各參數(shù)與血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P的表達水平的關(guān)系，以尋求精確判斷血小板功能狀態(tài)的辦法?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年2月-2014年1月于本院住院治療的膿毒癥患者48例為病例組，均符合2001年國際膿毒血癥定義會議提出的膿毒癥的新診斷標準[4]，其中男29例，女19例；年齡19~67歲，平均（41.86±11.76）歲；排除合并血液系統(tǒng)疾病、免疫性疾病、惡性腫瘤、器官移植、肝腎功能異常、妊娠者、近2周內(nèi)應(yīng)用阿司匹林等可能影響血小板功能的藥物者及臨床病例資料不全者。另選取本院健康體檢者32例作為對照組，其中男21例，女11例；年齡20~69歲，平均（42.14±11.57）歲。兩組研究對象的性別、年齡等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準，所有入選試驗對象均簽署知情同意書。

1.2 檢測指標和方法

1.2.1 血小板參數(shù)檢測 病例組患者于確診次日、對照組健康體檢者于體檢當天清晨空腹應(yīng)用負壓采血針抽取肘靜脈血2 mL，以質(zhì)量分數(shù)為2%，比例為1：10的乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝管抗凝，輕輕混勻后于2 h內(nèi)采用全自動血細胞分析儀，采用電阻抗法進行測定，測得血小板計數(shù)（PC）、血小板平均體積（MPV）、血小板分布寬度（PDW）。

1.2.2 血小板膜糖蛋白檢測 病例患者于確診次日、對照組健康體檢者于體檢當天清晨空腹應(yīng)用負壓采血針抽取肘靜脈血2 mL，以質(zhì)量分數(shù)為2%，比例為1：9的乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝管抗凝，輕輕混勻后30 min內(nèi)送檢，靜置取上清液，加入終濃度為1%的多聚甲醛1 mL，輕輕混勻，室溫下固定15 min，取富含血小板血漿層，加入TEN緩沖液調(diào)整血小板濃度為300×109/L，將20 μL異硫氰酸熒光素標記的血小板膜糖蛋白GP b/a復(fù)合物單克隆抗體（PAC-1）及藻紅素標記的血小板a-顆粒膜蛋白抗P-選擇素單克隆抗體（CD62P）（均購自美國Becton-Dickson公司）加入至100 μL用多聚甲醛固定的血小板中，混勻后于室溫暗處靜置15 min，采用流式細胞儀進行檢測，測定10 000個血小板，計算PAC-1、CD62P的百分含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（±s）表示，比較應(yīng)用t檢驗，計數(shù)資料采用 字2檢驗，血小板參數(shù)與血小板膜糖蛋白的相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血小板參數(shù)的比較 病例組PC顯著下降，而MPV、PDW均顯著升高，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 兩組血小板參數(shù)的比較（±s）

表1 兩組血小板參數(shù)的比較（±s）

組別 PC（×109/L） MPV（L） PDW（L）病例組（n=48） 211.45±77.67 14.43±0.82 17.68±1.71對照組（n=32） 273.58±34.24 9.51±0.63 14.30±1.46 t值 5.82 4.75 4.59 P值 <0.05 <0.05 <0.05

2.2 兩組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P水平的比較 病例組PAC-1、CD62P表達水平均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 膿毒血癥患者血小板參數(shù)與血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P的相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，膿毒血癥患者的MPV與PAC-1、CD62P表達水平均呈明顯正相關(guān)（r=0.377、0.306，P<0.05），PV、PDW與PAC-1、CD62P表達水平之間無明顯相關(guān)性（P>0.05）。

表2 兩組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P水平的比較（±s） %

表2 兩組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P水平的比較（±s） %

組別 PAC-1 CD62P病例組（n=48） 42.13±8.66 7.59±1.62對照組（n=32） 21.04±3.50 1.43±0.47 t值 8.94 8.67 P值 <0.05 <0.05

3 討論

膿毒血癥是臨床急危重患者常見的嚴重并發(fā)癥之一，其誘發(fā)的膿毒性休克、MODS是目前危重疾病患者死亡的主要病理生理因素，已成為重癥監(jiān)護病房患者死亡的主要原因之一[5]。已有多項研究表明，膿毒血癥患者血小板功能出現(xiàn)異常，且隨著病程加重和惡化，血小板功能障礙程度加重[6-8]。過度的炎癥反應(yīng)和凝血系統(tǒng)功能紊亂在膿毒血癥病情加重、惡化過程及MODS發(fā)病機制中起了重要作用，而血小板活化是啟動凝血系統(tǒng)激活及連接炎癥反應(yīng)和凝血系統(tǒng)之間的橋梁。

在人體正常血液循環(huán)中，血小板處于靜止狀態(tài)，而當機體受到生理或病理刺激因子作用，導(dǎo)致血管內(nèi)皮受損后，血小板立即粘附于受損血管處暴露的內(nèi)皮組織，形成血小板栓子并被內(nèi)皮下組織或局部形成的凝血酶激活?；罨难“蹇芍苯俞尫拍?、V因子、Ⅷ因子、纖維蛋白原等凝血因子，也可同時釋放大量二磷酸腺苷、血小板活化因子等產(chǎn)物，反饋引起血小板持續(xù)活化。血小板還可釋放血管活性物質(zhì)、細胞因子等，促使中性粒細胞及白細胞聚集、活化，導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷和炎性反應(yīng)加重，引起器官功能障礙的發(fā)生[9-11]。血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P在血小板黏附、聚集及活化反應(yīng)中起重要作用，均為血小板活化特異性標志物[12]。本研究結(jié)果顯示病例組患者PAC-1、CD62P表達水平上調(diào)，表明膿毒血癥患者體內(nèi)存在血小板活化。

已有許多研究證實，PC、MPV、PDW等血小板參數(shù)與膿毒血癥患者病情嚴重程度密切相關(guān)[13]。本研究結(jié)果顯示，膿毒癥患者PC明顯下降，而MPV、PDW明顯升高，與國內(nèi)相關(guān)研究報道相符[14]。PC下降可能與高凝狀態(tài)下消耗增多、血液稀釋、細菌毒素破壞及藥物的繼發(fā)作用等有關(guān)，而MPV、PDW升高則可能與PC下降后引發(fā)骨髓代償增生，導(dǎo)致大量體積更大的不成熟血小板產(chǎn)生有關(guān)[15]。另外，本研究對血小板參數(shù)與PAC-1、CD62P的相關(guān)性進行分析，發(fā)現(xiàn)MPV與PAC-1、CD62P之間均存在顯著正相關(guān)關(guān)系，表明PAC-1、CD62P均可作為血小板活化的特異性標志物的同時，MPV也可作為判斷膿毒血癥患者體內(nèi)是否存在血小板活化的參考數(shù)值。

綜上所述，膿毒癥患者體內(nèi)存在血小板明顯活化，血小板參數(shù)與血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P共同參與血小板活化過程。MPV與PAC-1、CD62P之間均呈顯著正相關(guān)，為患者機體血小板活化狀態(tài)的評估及指導(dǎo)臨床預(yù)防、診治、評估膿毒血癥提供了簡便、可行的依據(jù)。

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