鐘寶元

大腸癌（結(jié)直腸癌）是我國常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率有逐年增高的趨勢。由于大腸癌的早期癥狀常不典型且不易被發(fā)現(xiàn)，確診時病程已到中晚期。因此，通過研究大腸癌的發(fā)生、發(fā)展機理，為其治療提供更多的有效手段就尤為重要。本研究分析與探討大腸癌中STAT3、Twist的表達及與EMT的關(guān)系，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2005-2011年本院結(jié)直腸癌、癌旁組織標本80例，經(jīng)常規(guī)石蠟包埋與10%中性甲醛固定標本。其中男45例，女35例，年齡為32~79歲，平均（51.2±10.5）歲，組織學(xué)分級：高中分化30例，低分化50例；44例腫瘤直徑未超過5 cm，36例腫瘤直徑超過5 cm。

1.2 方法 選用由北京博奧森公司生產(chǎn)的STAT3、Twist及EMT兔抗人多克隆抗體，DAB顯色試劑盒、SABC（鏈霉親和素-生物素復(fù)合物）試劑盒，采用免疫組化方法，切片常規(guī)石蠟，并脫蠟至水。用3%的雙氧水進行10 min的室溫封閉，3次蒸餾水洗，10 min抗原修復(fù)。每5分鐘PBS洗3次，再加入適量山羊血清封閉液，20 min的室溫封閉，多與液體取出，滴加一抗，并在4 ℃環(huán)境下過夜。每1分鐘PBS洗3次，并適量加入生物素化二抗，室溫（37 ℃）封閉20 min，每2分鐘PBC洗3次。DAB顯色，水洗蒸餾，鹽酸乙醇分化，蘇木精1 min復(fù)染。

1.3 抗體陽性判斷標準 STAT3、Twist以細胞漿和/或細胞核呈棕黃色者為陽性細胞，EMT陽性表達為棕褐色，具體在細胞膜上定位，或者線形圍繞細胞膜[1-2]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行處理，計數(shù)資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 STAT3、Twist及EMT的表達對比 大腸癌中Twist蛋白陽性率為57.5%（46/80），癌旁組織陽性率26.3%（21/80）；大腸癌中STAT3蛋白陽性率63.7%（51/80），癌旁組織陽性率17.5%（14/80）；大腸癌中EMT陽性率為17.5%（14/80），癌旁陽性率62.5%（50/80），兩組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（ 字2=50.00、75.21、66.58，P<0.05），見表 1。

表1 大腸癌及癌旁組織中STAT3、Twist及EMT的表達對比 例

2.2 STAT3、Twist表 達 與 EMT的 關(guān) 系 STAT3、Twist的表達和EMT呈現(xiàn)正相關(guān)性（r’s=0.262、0.243，P<0.05），見表 2。

表2 STAT3、Twist的表達與EMT的關(guān)系 例

3 討論

STAT3是在1994年作為白細胞介素-6信號傳遞中的急性期反應(yīng)因子被純化的，是酸化激活酪氨酸磷的一個STAT 家族成員[3]。其異常表達與EMT現(xiàn)象在大腸癌中的關(guān)系，目前在國內(nèi)外尚未見相關(guān)報道，而且有關(guān)STAT3蛋白的異常表達與EMT現(xiàn)象的作用機制的研究尚處于空白。很多實踐研究表明，作為JAK/STAT的關(guān)鍵性信號分子，持續(xù)性激活STAT3和人體細胞惡性轉(zhuǎn)化進程存在相關(guān)性[4-5]。在大腸癌的研究中發(fā)現(xiàn)，STAT3的異常激活在結(jié)直腸腫瘤中起了重要的作用[6-7]。

在腫瘤進展中，EMT是其關(guān)鍵過程之一，EMT的主要特征在于上皮細胞間質(zhì)特性的獲得與上皮細胞極性的喪失，和腫瘤細胞遠處轉(zhuǎn)移及原位侵襲具有相關(guān)性[8]。用于對EMT進行驗證的分子學(xué)標志物有：上皮標志物E-cad和Cytok表達降低以及間質(zhì)標志物N-cadherin和Vimentin達的增加[9-11]。EMT表型標志有三維侵襲、遷移性、增強抗凋亡能力，主要機制是在調(diào)控因子作用下造成E-cad表達降低與β-cat核定位，導(dǎo)致癌細胞膜上具有粘連作用的β-cat與E-cad降低，引發(fā)癌細胞的極性變化、粘連消失及形態(tài)改變，從而參與腫瘤轉(zhuǎn)移與侵襲全過程[12-15]。本研究顯示，大腸癌中，Twist蛋白的陽性率為57.5%，癌旁組織陽性率26.3%。STAT3蛋白陽性率63.7%，癌旁組織陽性率17.5%，大腸癌中，Twist與STAT3蛋白陽性率高于癌旁組織陽性率（P<0.05），EMT陽性率為17.5%，比癌旁陽性率62.5%低（P<0.05），STAT3、Twist的表達和EMT呈現(xiàn)正相關(guān)性（P<0.05）。

綜上所述，大腸癌中SATA3與Twist表達和腫瘤生物學(xué)特征存在相關(guān)性，而激活SATA3可能會提升Twist與EMT的表達，對STAT3、Twist及EMT的檢測有助于預(yù)測腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移與判斷預(yù)后。

[1] Gong W，Wang L，Yao J C，et a1.Expression of activated sisnal transducer and activator of transeription 3 predicts expression of vascular endothelial growth factor in and angiogenic phenotype of human gastric cancer[J].Clin Cancer Res，2005，11（4）：1386-1393.

[2] Kissebah A H，Sonnenberg G E，Myklebust J，et a1.Quantitative trait locion chromosomes 3 and 17 influence phenotypes of the metabolic syndrome[J].Proc Natl Acad Sci USA，2000，97（26）：14 478-14 483.

[3]陸娜娜，尹玉，李昊，等.大腸癌中STATS和VEGF的表達及相關(guān)性研究[J].中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志，2012，21（2）：122-123.

[4]李珊珊.消化系統(tǒng)腫瘤中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究進展[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2010，26（6）：650-651.

[5] Wei D，Le X，Zheng L，et a1.STAT3 activation regu1ates the expression of vascular endothelial growth factor and human pancreatic cancer angiogenesis and metastasis[J].Oneogene，2003，22（3）：319-329.

[6] Hsieh F C，Cheng G，Lin J.Evaluation of potential Stat3-regulated genes in human breast cancer[J].Biochem Biophys Res Commum，2005，335（2）：292-299.

[7]陳麗，李靜，孫海波，等.大腸癌組織中STAT3及其相關(guān)生長調(diào)控基因的檢測與分析[J].中國老年學(xué)雜志，2009，29（6）：704-705.

[8]王雅娟，胡潔，趙海燕，等.EMT與非EMT細胞在大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，34（9）：1166-1167.

[9] Sullivan N J，Sasser A K，Axel A E，et al.Interleukin-6 induces an epithelial mesenchymal transition phenotype in human breast cancer cells[J].Oncogene，2009，28（33）：148-149.

[10]楊建輝，張建國，李國華.反義核苷酸在惡性腫瘤研究中的現(xiàn)狀和展望[J].腫瘤防治研究，2004，31（3）：182-184.

[11] Mertens A E，Roovers R C，Collard J G.Regulation of Tiam 1-Rac signalling[J].FEBS Lett，2003，546（1）：6-11.

[12]宮奇林，林梅青，時昌文，等.Twist基因檢測對大腸癌臨床病理診斷價值的探討[J].中華腫瘤防治雜志，2008，15（16）：1259-1260.

[13] Srikala S，David H，Lilian L，et al.Raf kinase as a target for anticancer therapeutics[J].Mol Cancer Ther，2005，4（4）：667-685.

[14] Kang Y，Massague J.Epithelial-Mesenchymal Transitions： twist In development and metastasis[J].Cell， 2004，118（3）：277-279.

[15]張娟，魏君，王士杰，等.Twist ARF和E-cadherin 在大腸癌組織中的表達及臨床意義[J].中國腫瘤臨床，2011，38（3）：143-144.