時(shí)梅林 白津 梅鵬金 鄭駿年

腦腫瘤中膠質(zhì)瘤發(fā)病率最高，在國(guó)內(nèi)約占原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤的40%~50%，由于腫瘤呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，手術(shù)、化療及放療效果均不理想，5年生存率不到3%[1]。BRG1是SWI/SNF染色質(zhì)重塑復(fù)合物家族重要組成成分，含有一個(gè)具有ATP酶活性的類(lèi)解旋酶亞基，通過(guò)ATP水解提供動(dòng)力從而實(shí)現(xiàn)染色質(zhì)重組[2]。BRG1已被證明在調(diào)節(jié)基因表達(dá)、細(xì)胞周期以及腫瘤發(fā)生發(fā)展上具有重要意義[3]。早期研究發(fā)現(xiàn)，BRG1在乳腺癌、膀胱癌、肺癌、卵巢癌等組織和細(xì)胞系中表達(dá)減少或缺失[4-5]。但是近來(lái)研究卻發(fā)現(xiàn)，BRG1在黑色素瘤、前列腺癌和胃癌中表達(dá)升高，并且與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)[6-8]。BRG1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道，為了解BRG1是否參與了膠質(zhì)瘤的形成過(guò)程，筆者采用組織芯片和免疫組化技術(shù)檢測(cè)了BRG1在190例膠質(zhì)瘤組織、8例癌旁組織以及8例正常腦組織中的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床資料分析其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2008年1月-2011年12月膠質(zhì)瘤手術(shù)標(biāo)本190例，所有標(biāo)本經(jīng)病理確診。參照WHO膠質(zhì)瘤組織分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)。將Ⅰ~Ⅱ級(jí)歸為良性組、Ⅲ~Ⅳ級(jí)歸為惡性組，其中良性膠質(zhì)瘤組織120例，惡性70例（病理類(lèi)型為：星形細(xì)胞瘤127例、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤38例、少突星形細(xì)胞瘤14例、室管膜瘤11例）。患者術(shù)前均未接受放療、化療及生物治療，年齡10~73歲，平均47歲，男118例，女72例。另取正常腦組織和癌旁組織各8例作為對(duì)照。

1.2 方法

1.2.1 組織芯片構(gòu)建 所有標(biāo)本均經(jīng)福爾馬林溶液固定、石蠟包埋、4 μm厚連續(xù)切片，用于HE及免疫組化染色。根據(jù)HE染色切片確定具有代表性病變的部位，直徑取1.0 mm，組織芯片間距1.0 mm。

1.2.2 免疫組化法檢測(cè)BRG1表達(dá) 組織芯片脫蠟至水，抗原修復(fù)后，分別加入3% H2O2和10%正常山羊血清，孵育30 min后加入兔抗人BRG1單克隆抗體（美國(guó)Santa Cruz公司）或PBS替代一抗作為陰性對(duì)照，4 ℃過(guò)夜，最后分別加入二抗和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素，用DAB顯色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水封片。免疫組化超敏試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)買(mǎi)于北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.2.3 結(jié)果判斷 BRG1染色陽(yáng)性細(xì)胞為胞核呈棕黃色至深褐色，部分胞質(zhì)同時(shí)呈淡黃色，若只有胞質(zhì)著色則視為陰性。以免疫反應(yīng)得分（IRS）評(píng)估組織陽(yáng)性程度，IRS=SI（染色強(qiáng)度）×PP（陽(yáng)性細(xì)胞百分率）。SI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分，陰性；1分，弱陽(yáng)性；2分，中等陽(yáng)性；3分，強(qiáng)陽(yáng)性。PP評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：1分，陽(yáng)性細(xì)胞0%~10%；2分，陽(yáng)性細(xì)胞11%~50%；3分，陽(yáng)性細(xì)胞>50%。高倍鏡下隨即取5個(gè)不同的視野，其IRS平均值≥3分即判定為免疫反應(yīng)陽(yáng)性（+）。實(shí)驗(yàn)均在雙盲法下完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BRG1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)升高 BRG1在惡性膠質(zhì)瘤組織（Ⅲ~Ⅳ級(jí)）、良性膠質(zhì)組織（Ⅰ~Ⅱ級(jí)）、癌旁組織及正常腦組織中均表達(dá)于細(xì)胞核，呈棕黃色至深褐色，部分細(xì)胞質(zhì)同時(shí)為黃色（圖1）。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖2所示，BRG1在惡性膠質(zhì)瘤組織中陽(yáng)性表達(dá)率為82.9%（58/70），在良性膠質(zhì)瘤中陽(yáng)性表達(dá)率為80.8%（97/120）、在癌旁組織中陽(yáng)性表達(dá)率為25%（2/8），在正常腦組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為25%（2/8）。BRG1的表達(dá)在癌旁組織與良性膠質(zhì)瘤之間、癌旁組織與惡性膠質(zhì)瘤之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），但是在良性和惡性之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.847）。

圖1 BRG1在膠質(zhì)瘤組織中免疫組化染色情況

2.2 BRG1的表達(dá)與各臨床病理特征之間的相關(guān)性 筆者發(fā)現(xiàn)，BRG1的表達(dá)與患者年齡、性別、WHO分級(jí)及病理類(lèi)型均沒(méi)有顯著相關(guān)性，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。雖然WHO分級(jí)和病理類(lèi)型是膠質(zhì)瘤預(yù)后重要的指標(biāo)，但是筆者沒(méi)有發(fā)現(xiàn)BRG1和它們之間有關(guān)系，見(jiàn)表1。

3 討論

圖2 BRG1在不同組織中的陽(yáng)性表達(dá)率

表1 BRG1在190例膠質(zhì)瘤中的表達(dá)與各臨床病理特征的相關(guān)性

抑癌基因在抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及分化過(guò)程中起重要的負(fù)調(diào)節(jié)作用，并能潛在地抑制腫瘤生長(zhǎng)。如果其功能失活或出現(xiàn)基因缺失、突變等異常，可導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化從而發(fā)生腫瘤[9]。BRG1（Brahma-related gene 1）是SWI/SNF家族的重要成員，定位于人類(lèi)染色體19 p上，其mRNA長(zhǎng)度為5247 bp，基因編碼的蛋白質(zhì)相對(duì)分子量為2.05×105，它主要通過(guò)ATP水解產(chǎn)生的動(dòng)力來(lái)影響細(xì)胞分裂過(guò)程中染色質(zhì)的重組，使一些特異性的基因不能表達(dá)和抑制[2]。SWI/SNF復(fù)合物與許多基因的激活和轉(zhuǎn)錄的抑制有關(guān)，它主要通過(guò)轉(zhuǎn)錄的活化和抑制功能來(lái)控制腫瘤的生長(zhǎng)[3]。不同研究發(fā)現(xiàn)，BRG1在膀胱癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、食道癌、胰腺癌等多種腫瘤組織中表達(dá)缺失或突變[3-5，10-11]。

早期研究表明，BRG1在多種腫瘤組織和細(xì)胞系中表達(dá)失活，BRG1可以與Rb、BRCA等腫瘤抑制因子結(jié)合，通過(guò)上調(diào)P16、P15、P21等細(xì)胞周期蛋白從而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[12]。然而近來(lái)越來(lái)越多的研究結(jié)果卻與早期相矛盾。BRG1被發(fā)現(xiàn)在胃癌、前列腺癌和黑色素瘤中表達(dá)升高[6-8]。BRG1可以通過(guò)抑制p53的活性從而調(diào)節(jié)黑色素瘤等腫瘤細(xì)胞的增殖[13-15]。此外，國(guó)內(nèi)也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，BRG1在胃癌和宮頸癌中高表達(dá)與腫瘤的分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)深度等臨床病理因素有關(guān)[16-17]。因此，就目前的研究現(xiàn)狀來(lái)說(shuō)，BRG1在腫瘤中的作用是不確切的，BRG1的丟失可以導(dǎo)致腫瘤形成，然而也有研究發(fā)現(xiàn)沉默BRG1會(huì)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BRG1的表達(dá)在癌旁組織與良性膠質(zhì)瘤之間、癌旁組織與惡性膠質(zhì)瘤之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），而在良性、惡性之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.847）。此外，BRG1的表達(dá)與各臨床病理參數(shù)之間均沒(méi)有相關(guān)性，這說(shuō)明BRG1可能只參與了膠質(zhì)瘤的形成過(guò)程。筆者的結(jié)果與BRG1參與了胃癌、宮頸癌和前列腺癌的進(jìn)展不相符，但與Lin等[8]在黑色素瘤中研究結(jié)果一致。分析其原因，可能與其啟動(dòng)子異常甲基化、基因突變及其轉(zhuǎn)錄激活功能異常等因素有關(guān)[18]。筆者猜測(cè)，這可能是由于介導(dǎo)了不同的信號(hào)通路及組織或細(xì)胞類(lèi)型的種屬特異性造成的，其具體的分子機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

綜上所述，BRG1在人膠質(zhì)瘤中表達(dá)升高，并與膠質(zhì)瘤的發(fā)生具有一定的相關(guān)性，BRG1在膠質(zhì)瘤的發(fā)生過(guò)程中可能有重要作用。本研究為筆者判斷膠質(zhì)瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后提供一個(gè)重要參考，BRG1有望成為膠質(zhì)瘤新的治療靶點(diǎn)。

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