王星，張璐萍

（1.山東省萊蕪市人民醫(yī)院 骨一科，山東 萊蕪 271100；2.濱州醫(yī)學(xué)院 神經(jīng)生物學(xué)研究所，山東 濱州 256603）

西洛他唑?qū)钦蹌?chuàng)傷術(shù)后下肢靜脈栓塞患者血漿中血小板相關(guān)指標(biāo)的影響

王星1，張璐萍2

（1.山東省萊蕪市人民醫(yī)院 骨一科，山東 萊蕪 271100；2.濱州醫(yī)學(xué)院 神經(jīng)生物學(xué)研究所，山東 濱州 256603）

目的探討西洛他唑?qū)钦蹌?chuàng)傷術(shù)后下肢靜脈栓塞患者血漿中血小板相關(guān)指標(biāo)的影響。方法選擇2012年2月～2013年7月就診于萊蕪市人民醫(yī)院的104例骨折創(chuàng)傷術(shù)后下肢靜脈栓塞患者為研究對象，隨機(jī)分為A、B 2組，每組52例。2組均給予常規(guī)護(hù)理，A組加用西洛他唑，B組加用阿司匹林選取同期來本院進(jìn)行體檢的50例健康人員作為對照（C組）。分析各組患者血漿中血小板相關(guān)指標(biāo)的變化。結(jié)果治療前A、B 2組血漿中IL-6和IL-8均顯著高于C組（P＜0.01），治療后，2組IL-6和IL-8水平均顯著降低（P＜0.01），但2組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療前A、B 2組血漿中CRP、FIB和D-D含量均顯著高于C組（P＜0.01，P＜0.05），治療后2組CRP、FIB和D-D含量均顯著降低（P＜0.01，P＜0.05），A組CRP較B組含量更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），A組FIB和D-D含量與B組無差異。治療前A、B兩組PDW、PLT、MPV和P-LCR含量均顯著高于C組（P＜0.01，P＜0.05），治療后2組PDW、PLT、MPV和P-LCR均顯著降低（P＜0.01，P＜0.05），但2組組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療前A、B 2組血小板活化率均顯著高于C組（P＜0.01），治療后，2組血小板活化率均顯著降低（P＜0.01），但2組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論西洛他唑可通過降低炎性因子的表達(dá)、降低D-二聚體和纖維蛋白原的水平以及通過影響血小板相關(guān)指標(biāo)降低血小板的活化，從而發(fā)揮抗血栓作用。

西洛他唑；血小板；靜脈栓塞

靜脈血栓為臨床上三大血栓性疾病之一，是骨折創(chuàng)傷術(shù)后 常見的并發(fā)癥［1］，其發(fā)病率約占下肢骨折手術(shù)的50%［2-3］，若不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)與治療，則易引起肺血栓癥（pulmonary thrombosis，PTE）［4］，導(dǎo)致下肢青腫長期處于病廢狀態(tài)而截肢，嚴(yán)重者可導(dǎo)致死亡。靜脈血栓的好發(fā)部位是下肢，約是上肢發(fā)病率的10倍，其發(fā)病的3大因素有靜脈內(nèi)膜損傷、血流緩慢和血液高凝，目前仍無良好的治療方法［5］。西洛他唑本質(zhì)為磷酸二脂酶-3抑制劑，據(jù)報(bào)道，西洛他唑具有強(qiáng)大的抗血小板凝集作用［6］，本研究以就診于萊蕪市人民醫(yī)院的下肢靜脈栓塞患者為研究對象，對比研究西洛他唑?qū)υ摷膊〉木徑庾饔?，以期為臨床用藥提供一定的理論依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選擇2012年2月～2013年7月就診于萊蕪市人民醫(yī)院骨科的104例骨折創(chuàng)傷術(shù)后下肢靜脈栓塞患者，經(jīng)過彩色多普勒超聲儀檢查確診。隨機(jī)分為西洛他唑組（A組）52例，其中男29例，女23例，平均年齡（47.4±18.3）歲；阿司匹林組（B組）52例，其中男28例，女24例，平均年齡（49.4±16.3）歲。C組50例為來本院進(jìn)行體檢的健康人員，其中男27例，女25例，平均年齡（48.4±17.3）歲。入選的患者無心、肝、腎及其他血液系統(tǒng)疾病，女性排除月經(jīng)期，所有患者近期無使用抗凝血藥物，發(fā)病在7 d以內(nèi)，所有實(shí)驗(yàn)人員均簽署知情同意書，本研究獲得倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。3組患者年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A組中血栓分型有中央型14例、周圍型25例以及混合型13例，B組中央型13例、周圍型26例以及混合型13例，C組中央型14例、周圍型24例以及混合型12例，3相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 治療方法 A、B 2組收診后均給予常規(guī)護(hù)理，在此基礎(chǔ)上A組給予西洛他唑（萬特制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20066511，規(guī)格：50mg／片）100 mg／次，2次／d；B組給予阿司匹林（拜耳醫(yī)藥保健有限公司）200 mg／天，治療5 d?；颊呔谥委熐昂笫褂肊DTA-Na2負(fù)壓抗凝采血管采集靜脈血，使用低速冷凍離心機(jī)離心，分離得到血漿，置－80℃冰箱保存?zhèn)溆?。C組以相同方法采集全血及分離血漿，與A、B組置于一處保存。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 放射免疫法檢測血漿中IL-6、IL-8的水平：利用GC-1200雙探頭γ免疫計(jì)數(shù)器（廈門中佳光電科技有限公司），采用平衡法對樣品進(jìn)行測定，即將待測樣品與抗血清及標(biāo)記抗原進(jìn)行競爭性反應(yīng)，然后加入免疫分離劑，分離抗原-抗體復(fù)合物，測定其放射性，計(jì)算結(jié)合率，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。

1.3.2 C-反應(yīng)蛋白水平測定：C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）采用顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法進(jìn)行測定，按照試劑盒［德賽診斷系統(tǒng)（上海）有限公司］操作說明書進(jìn)行檢測，原理即樣品中CRP與抗人CRP抗體包被的乳膠顆粒進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，使用LX20全自動(dòng)生化分析儀（美國貝克曼公司）進(jìn)行結(jié)果分析。

1.3.3 纖維蛋白原和D-二聚體含量測定：纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）含量采用纖維蛋白原檢測試劑盒（clauss改進(jìn)法）進(jìn)行檢測，原理即凝血酶與待測血漿中FIB進(jìn)行反應(yīng)，從而使FIB轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，血漿凝固。利用血漿中FIB的含量與凝血時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出纖維蛋白原的濃度。D-二聚體（D-D）含量測定根據(jù)試劑盒（標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及測定試劑盒均購自美國德靈公司）說明使用CA-1500全自動(dòng)血凝分析儀（日本Sysmex公司）進(jìn)行檢測。

1.3.4 血小板相關(guān)指標(biāo)檢測：將采集得到的已經(jīng)抗凝的A、B、C組外周靜脈全血，采用XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（日本Sysmex公司）進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)（platelet count，PLT）、大血小板比率（platelet larger cell ratio，P-LCR）、血小板平均體積（mean platelet volume，MPV）、血小板分布寬度（platelet distribution width，PDW）檢測，所有檢測試劑和標(biāo)準(zhǔn)品均購自日本Sysmex公司。

1.3.5 流式細(xì)胞儀檢測血小板活化狀態(tài) 取A、B組治療前后及C組靜脈抗凝全血各5mL于試管中，加入CD41-FITC和CD62p-PE抗體，室溫避光孵育20 min，3 h內(nèi)上流式細(xì)胞儀（FACSCalibur，美國 Becton Dickinson公司）檢測。

2 結(jié)果

2.1 治療前后3組血漿中IL-6、IL-8的水平比較 治療前A、B組血漿中IL-6和IL-8均顯著高于C組（P＜0.01），治療后2組IL-6和IL-8水平均顯著降低，與治療前相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。而A、B 2組之間IL-6和IL-8水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見表1）。

表1 治療前后3組血漿中IL-6、IL-8的水平比較Tab.1 Comparison of IL-6，IL-8 levels in three groups before and after plasma treatment

2.2 治療前后3組血漿中CRP、FIB和D-二聚體含量比較

治療前，A、B 2組血漿中CRP、FIB和D-D含量均顯著高于C組（P＜0.01，P＜0.05）。經(jīng)相應(yīng)治療后，CRP、FIB和 D-D含量均顯著降低，與治療前相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。治療后A組CRP較B組含量低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而A、B 2組治療后FIB和D-D含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 治療前后3組血漿中CRP、FIB和D-二聚體含量比較Tab.2 Comparison of CRP，F(xiàn)IB and D-D levels in three groups before and after plasma treatment

2.3 治療前后3組血小板相關(guān)指標(biāo)比較 治療前A、B 2組 PDW、P-LCR、PLT、MPV含量均顯著高于 C組（P＜0.01，P＜0.05）。經(jīng)相應(yīng)治療后，PDW、P-LCR、PLT和 MPV均顯著降低（P＜0.01，P＜0.05）。治療后A組CRP較B組含量低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而 A、B 2組治療后 PDW、P-LCR、PLT和MPV差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3 治療前后3組血小板相關(guān)指標(biāo)的變化比較Tab.3 Changes of platelet-related indicators before and after plasma treatment in three groups

2.4 治療前后3組血小板活化情況比較 流式結(jié)果顯示：治療前，A、B 2組血小板活化率均顯著高于C組（P＜0.01），經(jīng)相應(yīng)治療后，血小板活化率顯著降低（P＜0.01），而A、B 2組治療后活化率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見圖1、圖2）。

圖1 治療前后3組血小板的活化情況比較Fig.1 Comparision of platelet activation detected by flow cytometry before and after plasma treatment in three groups

圖2 3組血小板活化率比較＃＃P＜0.01，與 C組相比；**P＜0.01，與治療前相比Fig.2 Comparision of platelet activation rates in three groups＃＃P＜0.01，compared with group C；**P＜0.01 compared with before treatment

3 討論

人體靜脈血液正常情況下處于凝血-抗凝的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，一旦血液中的成分發(fā)生變化或者靜脈內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷，靜脈的抗血栓形成功能即受到嚴(yán)重影響，導(dǎo)致血栓形成危機(jī)。炎性細(xì)胞在該過程中被激活，產(chǎn)生炎性因子，如IL-6和IL-8［7-8］，他們可使纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）沉積并且能夠抑制纖溶，不僅如此，炎性因子還可激活血小板［9］，進(jìn)一步促進(jìn)血栓的形成。本研究檢測了CRP、IL-6和IL-8的表達(dá)，結(jié)果顯示靜脈血栓患者血漿中這些炎性因子的含量均明顯高于正常人群，經(jīng)西洛他唑治療后，CRP、IL-6和IL-8的含量均顯著降低，且西洛他唑?qū)RP的降低效果優(yōu)于阿司匹林，提示西洛他唑可減輕血栓的炎性癥狀。

FIB是凝血因子的指標(biāo)，受到很多因素的影響，其中包括炎性因子［10-11］。本研究發(fā)現(xiàn)靜脈血栓患者治療前FIB的水平顯著高于正常人群，經(jīng)西洛他唑治療后，水平有一定程度的降低，這可能與西洛他唑降低血液中炎性因子的水平相關(guān)，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。血液中D-二聚體水平的升高，可反映纖溶系統(tǒng)的活性，更揭示了凝血過程的發(fā)生［12-13］。根據(jù)研究報(bào)道，D-二聚體的水平在嚴(yán)重創(chuàng)傷后可顯著升高，與血栓形成并發(fā)癥密切相關(guān)［14-15］。本研究表明西洛他唑能夠降低D-二聚體的濃度，提示該藥物對靜脈血栓有一定的效果。

本實(shí)驗(yàn)繼續(xù)檢測了血小板的P-LCR、PDW、PLT和MPV，結(jié)果顯示治療前，其均有不同程度的升高，提示治療前血小板處于高度活化狀態(tài)，這項(xiàng)結(jié)果與流式細(xì)胞儀檢測血小板活化情況結(jié)果相一致。治療后P-LCR、PDW、PLT和 MPV均有一定程度的降低，而流式細(xì)胞儀檢測血小板的活性亦有一定程度的降低，表明，西洛他唑可降低血小板活性，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，西洛他唑可通過降低炎性因子的表達(dá)、降低D-二聚體和纖維蛋白原的水平以及通過影響血小板的相關(guān)指標(biāo)而降低血小板的活化，從而發(fā)揮抗血栓作用。

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（編校：吳茜）

Effects of cilostazol on plasma platelet-related indicators in trauma fractures patients w ith postoperative venous thrombosis

WANG Xing1，ZHANG Lu-ping2

（1.First Department of Orthopaedics，Laiwu City People's Hospital of Shandong Province，Laiwu 271100，China；2.Institute of Neurobiology，Binzhou Medical College，Binzhou 256603，China）

ObjectiveTo evaluate the effects of cilostazol on plasma platelet-related indicators in trauma fractures patients with postoperative venous thrombosis.Methods104 cases of trauma fractures patientswith postoperative venous thrombosis from February 2012 to July 2013 in Laiwu City People's Hospitalwere collected and random ly divided into group A and group group B，each had 52 cases Two groupswere given conventional nursing，and group A were added cilostaeol group B were added aspirin.Other50 cases of currenthealthy people formedical examination were selected for controls（group C）.The effects of cilostazol on plasma platelet-related indicators in each treatment group were analyzed.Result Before treatment，the levels of IL-6 and IL-8 in group A and Bwere significantly higher than group C（P＜0.01），but there is no difference between group A and B.The plasma CRP，F(xiàn)IB and DD in group A and B were significantly decreased than group C（P＜0.01，P＜0.05）.After appropriate treatment，the levels of CRP，F(xiàn)IB and DD in group A and B were significantly reduced than pre-treatment（P＜0.01，P＜0.05）.CRP content in group A was lower than that in group B，the differencewas statistically significant（P＜0.05），F(xiàn)IB and DD in group A showed no differencewith group B.Before treatment，PDW，PLT，MPV and P-LCR in group A and B were significantly higher than group C（P＜0.01，P＜0.05）.After appropriate treatment，the levels of PDW，PLT，MPV and P-LCR in two groups were significantly decreased（P＜0.01，P＜0.05），but there was no difference between two groups.Before treatment，the expression of platelet activation in group A，B were significantly higher than group C（P＜0.01），but significantly reduced after appropriate treatment（P＜0.01），and the difference between the two groups was not statistically significant.ConclusionCilostazol could reduce the expression of inflammatory factors，levels of D-dimer and fibrinogen and platelet related indicators by reduced platelet activation，which plays antithrombotic effect.

cilostazol；platelet；vein thrombosis

R683

A

1005－1678（2014）04－0134－04

山東省高?？萍加?jì)劃（J11LF55）

王星，男，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：創(chuàng)傷骨科，E-mail：laiwuwangxing＠163.com。