沈國(guó)滿

（青海大學(xué)附屬醫(yī)院 藥劑科，青海 西寧 810001）

蛇毒血凝酶在肺癌根治術(shù)中的止血效果分析及其對(duì)凝血酶受體-1的影響

沈國(guó)滿

（青海大學(xué)附屬醫(yī)院 藥劑科，青海 西寧 810001）

目的探討蛇毒血凝酶在肺癌根治術(shù)中的止血效果及其對(duì)凝血酶受體-1（protease-activated receptor-1，PAR-1）的影響。方法選取86例經(jīng)病理證實(shí)為肺癌患者，隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，其中對(duì)照組采用止血敏，觀察組采用蛇毒血凝酶，分別在手術(shù)前后測(cè)定出血量，凝血系統(tǒng)相關(guān)因子，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（enzyme linked immuno sorbent assay，ELISA）測(cè)定P-選擇素，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定血小板PAR-1，Western blot測(cè)定肺癌組織中PAR-1的表達(dá)情況，對(duì)所得數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果觀察組在術(shù)中及術(shù)后2d出血量，顯著低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，觀察組中組內(nèi)不同時(shí)間段PAR-1陽(yáng)性率及P-選擇素?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，同對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)蛇毒血凝酶對(duì)肺癌患者組織中PAR-1影響不明顯，而對(duì)照組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異義（P＜0.05）。結(jié)論蛇毒血凝酶在肺癌根治術(shù)中可以減少出血量，對(duì)凝血系統(tǒng)作用較為穩(wěn)定，對(duì)P-選擇素和PAR-1影響較小，這一結(jié)果提示蛇毒血凝酶可能在肺癌根治術(shù)患者止血過程中不會(huì)使患者出現(xiàn)全身血液高凝狀態(tài)，即不會(huì)導(dǎo)致凝血酶受體高表達(dá)從而引起的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

蛇毒血凝酶；肺癌根治術(shù)；止血；凝血酶受體-1

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年2月～2013年12月青海大學(xué)附屬醫(yī)院就診的86例患者，經(jīng)病理檢測(cè)證實(shí)為肺癌。其中男性患者48例，女性患者38例；年齡42～74歲，平均年齡為（59.1±6.1）歲?；颊咴谑中g(shù)前行ASA評(píng)分均為Ⅰ-Ⅱ級(jí)，且均無肝、腎功能以及凝血功能異常，在手術(shù)前也未服用過止血或者抗凝相關(guān)藥物?；颊咴诮邮苎芯亢褪中g(shù)前均簽訂知情同意書并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)同意。采用隨機(jī)數(shù)字表示法，患者被分為2組：對(duì)照組和觀察組，其中對(duì)照組采用止血敏，每組40例；觀察組采用蛇毒血凝酶。2組患者在年齡、性別、體重以及凝血功能方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。另外6例患者不愿接受止血藥物采用的是生理鹽水進(jìn)行簡(jiǎn)單對(duì)照。手術(shù)均由同一組醫(yī)師完成。另需要排除以下情況：①患者近1個(gè)月內(nèi)服用過抗凝血藥物或者止血相關(guān)藥物；②合并腦心血管疾病的患者；③因其他原因不能行手術(shù)的患者。

1.2 方法 對(duì)照組：患者在手術(shù)前半小時(shí)按照0.5 g／mL生理鹽水中靜脈注射，手術(shù)結(jié)束后每天給予酚磺乙胺止血敏（湖北中佳藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H42020621）0.5 g／mL，連續(xù)2 d。觀察組：術(shù)前半小時(shí)靜脈注射蛇毒血凝酶［兆科藥業(yè)（合肥）有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20060895］2 ku，術(shù)后仍給予蛇毒血凝酶2 ku／d，連續(xù)2 d。

1.3 觀察指標(biāo) 2組患者分別在術(shù)前24 h（T1）、術(shù)后20min內(nèi)（T2）、術(shù)后24 h（T3）及48 h（T4）抽取靜脈血，所有血樣采用自動(dòng)凝血分析儀測(cè)定凝血酶原時(shí)間（prothrombin time，PT）、纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）、活化部分凝血酶時(shí)間（activated partial thromboplastin time，APTT）、D-D二聚體、血小板計(jì)數(shù)及聚集率。記錄手術(shù)所需時(shí)間，測(cè)量肺癌根治術(shù)中以及手術(shù)后3 d出血量。采用流式細(xì)胞儀測(cè)定血小板PAR-1、ELISA試劑盒測(cè)定血漿中P-選擇素以及Western blot測(cè)定肺癌組織中PAR-1。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包以及ImageJ4.2對(duì)數(shù)據(jù)以及圖片進(jìn)行處理；對(duì)正態(tài)計(jì)量數(shù)據(jù)以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)通過統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，以P＜0.05作為具有顯著性差異的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 2組患者出血量、手術(shù)時(shí)間情況比較 通過表1顯示，對(duì)照組與觀察組手術(shù)時(shí)間分別為（149.1±43.8）min和（152.6±46.2）min，2組相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；觀察組術(shù)中出血量顯著低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；術(shù)后1 d、2 d，觀察組術(shù)中出血量顯著低于對(duì)照組，2組相比具有顯著性差異（P＜0.01），術(shù)后3 d，2組相比無顯著性差異（見表1）。

表1 2組患者出血量、手術(shù)時(shí)間情況比較Tab.1 Comparison of the amount of bleeding and operative time in two groups

2.2 凝血相關(guān)指標(biāo)變化情況 通過表2發(fā)現(xiàn)，觀察組的PT、APTT在T3時(shí)間段相對(duì)于T1差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），D-D二聚體T4相對(duì)于T1差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對(duì)照組PT、APTT、FIB以及D-D二聚體在不同時(shí)間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而血小板計(jì)數(shù)2者無差別，組內(nèi)比較也沒有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（見表2）。

表2 凝血相關(guān)指標(biāo)變化情況Table 2 Coagulation changes of related indicators

2.3 各時(shí)間段血清中PAR1、P-選擇素變化情況 通過表3顯示，對(duì)照組中PAR-1在血清中表達(dá)，手術(shù)治療前（即T1），相對(duì)T3具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。觀察組PAR-1和P-選擇素在血清中表達(dá)，手術(shù)治療前后并不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；觀察組PAR1在T1、T2相對(duì)于對(duì)照組 T1、T2具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而 P-選擇素在T2、T3具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表3）。

表3 各時(shí)間段血清中PAR1、P-選擇素變化情況Tab.3 Changs of the serum PAR1，P-selectin expression at each time

2.4 Western Blot檢測(cè)肺癌組織中PAR1的表達(dá)情況 通過Western Blot比較分析我們發(fā)現(xiàn)，蛇毒血凝酶對(duì)患者肺癌組織的影響較小，同生理鹽水組相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而止血敏對(duì)照組同生理鹽水組比較具有顯著性差異（P＜0.05，見圖1）。

圖1 Western Blot檢測(cè)組織中PAR1表達(dá)情況和灰度值分析a.PAR1表達(dá)情況；b.PAR1灰度值分析1.生理鹽水組；2.蛇毒血凝酶觀察組；3.止血敏對(duì)照組*P＜0.05，與生理鹽水組比較Fig.1 Analysis of gray value of tissue PAR1 by Western Blot detectiona.Western Blot results；b.Protein luminance ratio results1.saline group；2.hemocoagulase observation group；3.dicynone control group*P＜0.05，compared with saline group

3 討論

目前有研究顯示［7］，癌周組織出現(xiàn)的異常血管新生是導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴(kuò)散的重要因素。異常血管新生導(dǎo)致癌周微血管密度增加，增加了癌癥手術(shù)的治療風(fēng)險(xiǎn)［8］。因此在癌癥手術(shù)中常常因?yàn)槌鲅鴮?dǎo)致手術(shù)時(shí)間延長(zhǎng)、有的甚至大出血而死亡。本研究顯示，蛇毒血凝酶在手術(shù)中具有顯著降低出血量且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），手術(shù)后前兩天的出血量相對(duì)于對(duì)照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在對(duì)患者凝血功能的影響指標(biāo)中，發(fā)現(xiàn)蛇毒血凝酶與對(duì)照組相比，凝血酶原時(shí)間以及活化部分凝血酶時(shí)間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），而纖維原蛋白、血小板計(jì)數(shù)以及D-D二聚體2者相比較并無顯著性差異。觀察組中各時(shí)間段凝血功能相關(guān)指標(biāo)較為穩(wěn)定。我們初步斷定蛇毒血凝酶在整個(gè)手術(shù)期間以及術(shù)后恢復(fù)中能夠產(chǎn)生明顯的止血效果，可能與其對(duì)凝血功能的影響要強(qiáng)于止血敏的效果。從蛇毒血凝酶對(duì)手術(shù)時(shí)間中的出血量以及凝血功能的影響來看，蛇毒血凝酶在肺癌根治術(shù)中應(yīng)用是可行的。

血小板的生理功能主要是參與血栓的形成和止血，任何凝血過程都會(huì)涉及到血小板的活化［9］，血小板表面表達(dá)PAR-1以及凝血酶受體-4，其中凝血酶最易與PAR-1結(jié)合而發(fā)揮凝血效果［10］，凝血系統(tǒng)的多種因子參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展［11］。目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為凝血酶受體對(duì)于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，尤其是癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移上占有很重要的作用［12］。蛇毒血凝酶在外科手術(shù)中的應(yīng)用非常廣泛，那么在癌癥手術(shù)中是否可以應(yīng)用是值得研究和探討的［13］。為了進(jìn)一步研究蛇毒血凝酶在肺癌根治術(shù)中應(yīng)用的安全性以及對(duì)肺癌患者本身凝血系統(tǒng)等是否會(huì)造成影響，本文初步研究了蛇毒血凝酶對(duì)癌癥患者組織中PAR-1的影響。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板PAR-1，結(jié)果顯示，患者血小板PAR-1的表達(dá)并未出現(xiàn)明顯升高的現(xiàn)象，尤其與止血敏比較，具有非常顯著的差異。這一研究結(jié)果提示，蛇毒血凝酶在肺癌根治術(shù)中應(yīng)用尤其是止血方面是安全有效的。

目前一些止血藥物應(yīng)用不慎容易出現(xiàn)血栓，有研究報(bào)道蛇毒血凝酶在臨床應(yīng)用上不僅可以達(dá)到止血的效果，而且可以避免血栓的形成，其原因主要是蛇毒血凝酶只在出血部位止血，而并不會(huì)打破凝血-纖溶系統(tǒng)的平衡，因而不會(huì)引起正常血管內(nèi)凝血［14］。通過研究顯示［15］，蛇毒血凝酶對(duì)凝血酶原時(shí)間以及活化部分凝血酶時(shí)間的作用相對(duì)于對(duì)照組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），其時(shí)間相對(duì)于對(duì)照組時(shí)間較短，這一結(jié)果提示蛇毒血凝酶能更快發(fā)揮止血效果。P-選擇素與PAR-1表達(dá)呈正相關(guān)，其表達(dá)使血小板和內(nèi)皮細(xì)胞大量激活，從而使腫瘤患者血液處于高凝狀態(tài)并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用，進(jìn)一步誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)以及轉(zhuǎn)移。因此，本研究選取P-選擇素作為指標(biāo)，主要是在考察蛇毒血凝酶對(duì)血小板活化的影響，從而分析蛇毒血凝酶是否會(huì)造成患者血液處于高凝狀態(tài)甚至血栓。通過研究結(jié)果顯示，蛇毒血凝酶對(duì)肺癌根治術(shù)患者血漿中P-選擇素影響較小，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。值得提出的是本研究并未探討蛇毒血凝血酶對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的影響，尤其是對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響。后期可以從蛇毒血凝酶對(duì)腫瘤細(xì)胞是否有影響這一角度入手，從而開發(fā)出在癌癥手術(shù)中有效安全的止血藥物提供依據(jù)。

總之，通過研究顯示，蛇毒血凝酶在肺癌根治術(shù)中可以減少出血量，對(duì)凝血系統(tǒng)影響較為小，通過對(duì)P-選擇素和PAR-1進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)蛇毒血凝酶對(duì)其影響較小，這一結(jié)果提示蛇毒血凝酶可能在肺癌根治術(shù)患者止血過程中不會(huì)使患者出現(xiàn)全身血液高凝狀態(tài)，即不會(huì)導(dǎo)致凝血酶受體高表達(dá)從而引起的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的可能。

［1］ 曾其毅.經(jīng)纖支鏡注入立止血治療肺癌纖支鏡活檢后出血療效觀察［J］.航空航天醫(yī)學(xué)雜志，2011，22（11）：1351-1353.

［2］ 許航宇，舒海榮.白眉蛇毒血凝酶在內(nèi)鏡鼻竇手術(shù)中的止血效果［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2011，32（1）：54-57.

［3］ Franchini M，Montagnana M，F(xiàn)avaloro EJ，et al.The bidirectional relationship of cancer and hemostasis and the potential role of anticoagulant therapy inmoderating thrombosis and cancer spread［J］.Semin Thromb Hemost，2009，35（7）：644-653.

［4］ Hansen KK， Oikonomopoulou K， Li Y， et al.proteinase-activated receptors（PARs）and the pathophysiology of cancer and diseases of the cardiovascular，musculoskeletal，nervous and gastrointestinal systems［J］.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol，2008，377（4-6）：377-379.

［5］ 凌琪，鄔一軍，陳斌鑫.醋酸去氨加壓素和蛇毒血凝酶在胃癌根治術(shù)圍手術(shù)期止血作用的對(duì)比研究［J］.中華普通外科雜志，2008，23（12）：971-973.

［6］ 張軍，柳蒼生，王生華，等.蛇毒血凝酶對(duì)肺結(jié)核患者術(shù)中出滲血量與凝血功能的影響［J］.山東醫(yī)藥，2010，50（40）：71-72.

［7］ 朱蘊(yùn)蘭，李爽，于豐源，等.凝血酶受體在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞XG-1增殖和抗凋亡作用中的機(jī)制［J］.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2010，30（1）：15-18.

［8］ 姜亞軍，常誠(chéng)，張琳，等.腦出血后腦組織內(nèi)凝血酶受體1（PAR1）的表達(dá)及其病理意義［J］.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2004，21（2）：100-103.

［9］ 王征，耿平，左麗，等.腫瘤化療患者P-選擇素、TF狀態(tài)及川芎嗪對(duì)其影響的臨床研究［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2014，41（5）：912-914.

［10］ St Hill CA.Interactions between endothelial selectins and cancer cells regulatemetastasis［J］.Front Biosci，2011，1（17）：3233-3251.

［11］ Schwock J，Dhani N，Hedley DW.Targeting focal adhesion kinase signaling in tumor growth factor and metastasis［J］.Expert Opin Ther Targets，2010，14（1）：77-79.

［12］ 呂驊，朱明煒，崔紅元，等.白眉蛇毒血凝酶對(duì)老年腹腔鏡膽囊切除患者的止血作用和安全性探討［J］.中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2013，32（4）：393-397.

［13］ 費(fèi)建文，姜俊杰，周冬梅，等.老年人關(guān)節(jié)置換術(shù)后靜脈血栓栓塞癥的防治［J］.中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2012，31：136-139.

［14］ Wei JM，Zhu MW，Zhang ZT，et a1.A multicenter，phaseⅢ trial of hemocoagulase Agkistrodon：hemostasis，coagulation，and safety in patients undergoing abdominal surgery.Chinese Medical Journal，2010，123：589 593.

［15］ 汪宏梅.結(jié)腸癌組織中蛋白酶活化受體-1的表達(dá)及意義［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（24）：3320-3323.

（編校：譚玲）

The hemostatic effect of hemocoagulase in lung cancer radical surgery analysis and its effect on PAR-1

SHEN Guo-man

（Department of Pharmacy，Affiliated Hospital of Qinghai University，Xining 810001，China）

ObjectiveTo investigate hemocoagulase hemostatic effect in lung cancer radical surgery and its effecton protease-activated receptor-1（PAR-1）.Methods86 cases of pathologically confirmed lung cancer patients were random ly divided into control group and observation group，which controlswere used etamsylate，observation group were used hemocoagulase，then to measure the amount of bleeding，clotting system-related factors before and after surgery，using ELISA assay to detect P-selectin，flow cytometry to measure platelet PAR-1，Western Blot to determine lung tissue expression of PAR-1，and the resulting datawere statistically analyzed.ResultsThe blood loss of observation group during surgery and postoperative 2d compared with the control group，had a significant difference（P＜0.05）；flow cytometry results showed that，PAR-1-positive rate and P-selectin in different time periods in observation group were no statistically significant，while had a statistically significant compared with control group（P＜0.05）；Western Blot detected hemocoagulase of lung tissue in patients with PAR-1 had no obvious effect，while control group had significant difference（P＜0.05）.ConclusionVenin hemocoagulase in lung cancer radical surgery can reduce the amount of bleeding，and be more stable for the role of the coagulation system，as well as less effect on the P-selectin and PAR-1.The results suggest that vonin hemocoagulase might notmake patients with systemic hypercoagulable state in patients undergoing radical process with lung cancer，in other words itmight not lead to PAR-1 highly expression to cause tumor cellmetastasis.

hemocoagulase；radical surgery of lung cancer；hemostatic；protease-activated receptor-1

R656

A

1005－1678（2014）04－0070－03

肺癌組織在周圍釋放激肽釋放酶導(dǎo)致周圍細(xì)胞炎性因子以及彈性蛋白酶釋放增加，因此在肺癌根治術(shù)中滲出的血液很難凝固，此外肺癌病灶部位與胸壁黏連，在手術(shù)清掃淋巴結(jié)時(shí)創(chuàng)面出血更多［1］。蛇毒血凝酶的主要成分為廣西圓斑蝰蛇蛇毒的提取物，在臨床上主要用于出血性疾病的治療，臨床研究顯示該藥可以明顯縮短出血時(shí)間，減少出血量，且不會(huì)形成血栓，出現(xiàn)內(nèi)凝血現(xiàn)象［2］。蛇毒血凝酶能促進(jìn)血液凝固，但是凝血系統(tǒng)中諸多分子是腫瘤細(xì)胞發(fā)生、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素，凝血酶受體-1（proteaseactivated receptor-1，PAR-1）是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的主要分之一［3-4］。蛇毒血凝酶在肺癌根治術(shù)中對(duì)PAR-1的影響值得研究。本研究采用蛇毒血凝酶對(duì)肺癌根治術(shù)患者凝血系統(tǒng)以及PAR-1的影響，初步探討蛇毒血凝酶在肺癌根治術(shù)中使用的安全性。

國(guó)家自然科學(xué)基金（21002025）

沈國(guó)滿，男，本科，主治醫(yī)師，研究方向：蛇毒血凝酶及其藥物研究，E-mail：704420757＠qq.com。