劉娟，閆軍,王鳳山

（1.山東大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟南 250012；2.山東商業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山東 濟南 250103；3.濟南市皮膚防治院，山東 濟南 250001）

鹽酸平陽霉素水溶蠟棒的研制及含量測定

劉娟1,2，閆軍3,王鳳山1△

（1.山東大學(xué) 藥學(xué)院，山東 濟南 250012；2.山東商業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山東 濟南 250103；3.濟南市皮膚防治院，山東 濟南 250001）

目的制備鹽酸平陽霉素的水溶蠟棒，并建立蠟棒中鹽酸平陽霉素含量測定方法。方法采用正交設(shè)計試驗對蠟棒基質(zhì)的配比及制備條件進(jìn)行篩選，用高效液相色譜法對蠟棒中平陽霉素的含量進(jìn)行測定。結(jié)果鹽酸平陽霉素蠟棒基質(zhì)處方為平平加與硬脂酸聚烴氧(40)脂質(zhì)量比為1∶1，在溫度70℃時加入主藥，攪拌時間為20 min，制成蠟棒；高效液相色譜法測定蠟棒中鹽酸平陽霉素含量在34.4～172 μg/mL線性關(guān)系良好，回歸方程為y=8298.9 x-34996（r=0.9999），平均回收率為102.67%（n=9）。結(jié)論鹽酸平陽霉素水溶蠟棒的制備工藝簡單，性質(zhì)穩(wěn)定；利用高效液相色譜法測定蠟棒中平陽霉素含量的方法簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確。

鹽酸平陽霉素；水溶蠟棒；制備；高效液相色譜；含量測定

平陽霉素是從我國浙江平陽縣土壤中的放線菌培養(yǎng)液中分離得到的抗腫瘤抗生素，經(jīng)研究與國外的博來霉素(Bleomycin)成分相近。國產(chǎn)平陽霉素系博來霉素Aj單體，主要抑制胸腺嘧啶核苷酸摻入DNA，并與DNA結(jié)合使之破壞。另外，它也能使DNA單鏈斷裂，并釋放出部分游離核堿，進(jìn)而破壞DNA模板，阻止DNA復(fù)制[1]。平陽霉素為白色疏松塊狀物或無定形固體，幾乎無臭，引濕性強；易溶于水和甲醇，微溶于乙醇，在丙酮、氯仿和乙醚中幾乎不溶。平陽霉素適應(yīng)癥為頭頸部各部位鱗狀上皮癌、皮膚癌、食道癌等[2]。缺點是半衰期短，臨床應(yīng)用時需一次給藥4～20 mg，可靜脈注射、肌內(nèi)注射和瘤內(nèi)注射，每日給藥1次或隔日給藥1次，最少需連續(xù)應(yīng)用20 d以上[3]。目前有文獻(xiàn)可查的蠟棒制劑有地蒽酚、蒽林的蠟棒制劑，并且蠟棒制劑的治療效果要好于軟膏制劑[4-5]，平陽霉素有微球制劑、凝膠劑、栓劑、膜劑等[6-8]，其蠟棒制劑未見報道。

本實驗通過篩選平陽霉素合適的基質(zhì)，制備易吸收并且使用方便的水溶性蠟棒，為臨床提供一種新的、適用的、治療銀屑病的外用制劑。水溶性蠟棒應(yīng)用時不需用手直接接觸藥物本身，從而可減少藥物的浪費及對手部皮膚的刺激。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 Waterse 2695高效液相色譜儀（配有Waters 2489紫外檢測器），沃特世科技（上海）有限公司；85-2控溫磁力攪拌器，金壇市醫(yī)療儀器廠；GY-1型果實硬度計，艾德堡儀器有限公司；FRQ-1008 HT 超聲波清洗器，杭州法蘭特超聲波有限公司。

注射用鹽酸平陽霉素（批號：121102），天津太河制藥有限公司；平平加O-15（批號：11010979），江蘇省海安石油化工廠；硬脂酸聚烴氧（40）脂（批號：20111101），南京威爾化工有限公司；甲醇和乙腈為色譜純，Merck KGaA；水為娃哈哈純化水。

1.2 方法

1.2.1 正交設(shè)計篩選蠟棒基質(zhì)處方 因為硬脂酸聚烴氧(40)脂的熔點在46℃～51℃[9]，平平加O-15熔點在32℃～35℃[10]，加入藥物時需先加熱使基質(zhì)熔融，且基質(zhì)熔融時間隨溫度升高而縮短。因此，選取影響因素中加熱溫度為60℃、70℃、80℃。因為平陽霉素性質(zhì)不穩(wěn)定，需考察在以上三種加熱溫度下，溫度、攪拌時間是否會使藥物分解。因此實驗采用了平平加質(zhì)量（A）、S 40質(zhì)量（B）、基質(zhì)加熱溫度（C）、攪拌時間（D）4個因素，每個因素取3個水平（見表1）的L9（34）正交實驗設(shè)計表進(jìn)行實驗設(shè)計。

表1 正交試驗設(shè)計各因素水平表Tab.1 Experiment scheme of orthogonal design

按所指定的因素水平選用L9（34）正交試驗表確定平陽霉素水溶蠟棒處方。將一定量的硬脂酸聚烴氧(40)脂和平平加在指定溫度（±2℃）下加熱融化，每組加入相同量的平陽霉素藥物，于磁力攪拌器上按時間充分?jǐn)嚢?，使藥物分散均勻，冷卻，即得所需蠟棒。提取每組蠟棒中的平陽霉素，測定藥物含量，并對結(jié)果用極差分析法進(jìn)行分析。

按正交試驗設(shè)計篩選出的最佳處方制備3批樣品，對其進(jìn)行硬度檢查、延展性測試、皮膚刺激性試驗以及耐熱、耐寒試驗。

1.2.2 平陽霉素蠟棒中藥物含量的測定

（1）色譜條件 Agilent C8色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm），以己烷磺酸鈉溶液（取己烷磺酸鈉1.88 g與乙二胺四醋酸二鈉1.96 g，加0.08 mol/L醋酸溶液使溶解并稀釋至1000 mL，用氨溶液調(diào)節(jié)pH值至4.3）為流動相A；以甲醇-乙腈（7：3）為流動相B，檢測波長為 254 nm，柱溫25℃，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量20μL[11-12]。

（2）對照品溶液及供試品溶液的制備 取平陽霉素原料藥約2 mg，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，使成約80μg/mL的對照品溶液溶液。

取0.1%鹽酸平陽霉素蠟棒樣品2 g（相當(dāng)于平陽霉素2 mg），提取，加水定容至25 mL，搖勻，制成約80μg/mL的供試品溶液。

（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取平陽霉素原料藥約8.6 mg，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，使成0.344 mg/ml的溶液，作為儲備液。分別精密量取儲備液1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，各置10 mL量瓶中，加水分別稀釋至刻度，搖勻，即成濃度為34.4、51.6、68.8、103.2、137.6、172μg/mL的系列溶液。精密量取上述溶液各20μL，注入液相色譜儀，按照2.3.1的色譜條件，以峰面積與鹽酸平陽霉素質(zhì)量濃度（μg/mL）做線性回歸。

（4）精密度試驗 取對照品溶液3份，分別稀釋至20、40、80μg/mL，取這三種濃度溶液按照2.3.1的色譜條件，每種濃度連續(xù)進(jìn)樣5次，每次20μL，記錄峰面積。

（5）重復(fù)性試驗 取同一批樣品5份，按供試品溶液制備方法處理樣品，按照2.3.1的色譜條件，分別進(jìn)樣20μL，記錄峰面積積分值，進(jìn)行分析。

（6）回收率試驗 取蠟棒空白基質(zhì)，精密稱定，按照處方工藝，分別配成主藥濃度為標(biāo)示量的80%，100%，120%的模擬蠟棒樣品各3份。按照供試品溶液制備方法，制成供試品溶液，取各濃度供試品溶液20μL，按照2.3.1的色譜條件，注入高效液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計算含量，計算樣品中平陽霉素回收率。

（7）樣品含量測定 同一條件下制0.1%平陽霉素蠟棒3批，按供試品溶液制備方法處理，每批次進(jìn)樣3次，測平陽霉素含量。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0軟件，對正交實驗數(shù)據(jù)采用極差分析法處理。

2 結(jié)果

2.1 平陽霉素蠟棒處方篩選情況 采用L9（34）正交試驗結(jié)果及采用極差分析法對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析的結(jié)果見表2。

表2 正交試驗結(jié)果與結(jié)果分析Tab.2 Experiment results of the orthogonal design

由表2結(jié)果可知，各因素對處方影響的順序分別為B＞A＞C＞D，根據(jù)藥物含量選出最優(yōu)組合為：平平加1 g，S40 1g，溫度為70℃時加入主藥，攪拌時間為20 min合適。

按正交試驗設(shè)計篩選出的最佳處方制備3批樣品，對其進(jìn)行硬度檢查、延展性測試、皮膚刺激性試驗以及耐熱、耐寒試驗，結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)[13]。

2.2 平陽霉素蠟棒中藥物含量的測定情況

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取平陽霉素原料藥制備的系列濃度溶液，按照2.3.1的色譜條件，以峰面積與鹽酸平陽霉素質(zhì)量濃度（μg/mL）做線性回歸，回歸方程為y=8298.9 x-34996（r= 0.9999），結(jié)果表明鹽酸平陽霉素在34.4～172μg/mL濃度范圍內(nèi)線性良好。

2.2.2 精密度試驗 3份不同濃度對照品溶液峰面積積分值的RSD分別為1.00%、0.22%、0.24%，結(jié)果精密度良好，說明方法可靠。

2.2.3 重復(fù)性試驗 取同一批樣品5份的供試品溶液，峰面積積分值RSD為3.3%，表明結(jié)果重復(fù)性良好。

2.2.4 回收率試驗 主藥濃度為標(biāo)示量的80%，100%，120%的模擬蠟棒樣品的供試液，計算平陽霉素回收率，結(jié)果見表3。

表3 加樣回收試驗結(jié)果Tab.3 The results of recovery

2.2.5 樣品含量測定 同一條件下制備的3批0.1%平陽霉素蠟棒測得其平陽霉素平均含量為分別為98.03μg/g、95.29μg/g、99.18μg/g，RSD為2.05%，說明測定方法可靠。

3 討論

平陽霉素注入人體，主要分布于皮膚及肺部[14]，主要副作用有發(fā)熱、胃腸道反應(yīng)(惡心嘔吐、食欲不振)、口腔炎，特別是肺毒性較嚴(yán)重[15]。所以考慮將平陽霉素改為外用劑型以治療皮膚疾病，減小副作用。平陽霉素存在皮膚反應(yīng)(色素沉著、角化增厚、皮炎、皮疹等)[15]，制成蠟棒制劑，應(yīng)用時不需用手直接接觸藥物本身，從而可減少藥物的浪費及對手部皮膚的刺激。由于平陽霉素水溶液24 h內(nèi)藥物含量會發(fā)生顯著變化[16]，所以在選擇外用制劑基質(zhì)時，不適宜選擇含水基質(zhì)。本研究研制的平陽霉素水溶蠟棒選取的基質(zhì)為硬脂酸聚烴氧(40)脂，用平平加調(diào)節(jié)蠟棒硬度。在蠟棒整個制備過程中沒有水，藥物性質(zhì)穩(wěn)定。因為硬脂酸聚烴氧(40)脂為表面活性劑，可以在水、乙醇或乙醚中溶解，所以洗除方便。

文獻(xiàn)記載平陽霉素在25℃下性質(zhì)穩(wěn)定，15℃～25℃下原料藥粉2年不降低效價[14]，但是蠟棒的儲存溫度過高或過低都會有發(fā)硬現(xiàn)象，延展性變差，不適宜涂抹，所以平陽霉素水溶蠟棒的保存溫度應(yīng)控制在15℃～25℃。

采用HPLC法對蠟棒中鹽酸平陽霉素的進(jìn)行含量測定的測定條件參考了2010版藥典二部中“鹽酸平陽霉素”章節(jié)[12]。本次實驗利用HPLC法測定平陽霉素含量時，對流動相中己烷磺酸鈉溶液濃度、乙二胺四醋酸二鈉濃度、pH值、甲醇-乙腈的配比進(jìn)行摸索和篩選，在所建立的色譜條件下平陽霉素保留時間合適，比藥典方法保留時間大大縮短，且峰形較好。

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Preparation of pingyangmycin water-soluble wax stick and the content determination

LIU Juan1,2，YAN Jun3，WANG Feng-shan1△
（1.School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University, Jinan 250012, China; 2.Shandong Institute of Commerce and Technology, Jinan 250103,China; 3.Jinan Hospital for Skin Diseases Preven tion and Treatment, Jinan 250001, China）

Objiective To prepare pingyangmycin water-soluble wax stick and to establish its content determination method。MethodThe formula was optimized by orthogonal experiment and the content of pingyangmycin in wax stick was determined by high performance liquid chromatography (HPLC)。ResultsThe formula of pingyangmycin wax stick matrix was optimized as 1 g of alcohol ethoxylate and 1 g of S 40. Pingyangmycin was added when the temperature of the matrix raised to 70℃ and stirred for 20 min. The linear range of pingyangmycin determined by HPLC was 34.4～172 μg/mL，the regression equations was y=8298.9 x-34996（r= 0.9999），and the average recovery of pingyangmycin was 102.67 (n=9）。ConclusionThe Preparing procedure of pingyangmycin water-soluble wax sticks is simple and stable. The HPLC method for determining the content of pingyangmycin in water-soluble wax sticks is simple, fast and accurate.

pingyangmycin；water-soluble wax stick；preparation；high performance liquid chromatography；content determination

R 285;TQ 464.1

A

1005-1678(2014)01-082-03

劉娟，女，講師，制藥工程，E-mail：sdliujuan@163.com；王鳳山，通信作者，教授， E-mail： fswang@sdu.edu.cn。