傅少梅，殷初陽(yáng)，宋暉

（復(fù)旦大學(xué) 附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院 乳腺科，上海 200011）

miR-340在三陰性乳腺癌的表達(dá)和意義

傅少梅，殷初陽(yáng)，宋暉△

（復(fù)旦大學(xué) 附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院 乳腺科，上海 200011）

目的觀察miR-340蛋白的表達(dá)在三陰乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）的發(fā)生，發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用。方法選擇2006年1月～2012年12月在我院行乳腺癌根治的患者60例，根據(jù)免疫組織化學(xué)的雌激素受體（estrogen receptor, ER），孕激素受體（progesterone receptor, PR）和人表皮生長(zhǎng)因子的受體（human epidermal growth factor receptor,HER-2）表達(dá)，分為三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)33例和非TNBC 27例，同時(shí)選擇同期乳腺癌癌旁組織15例，運(yùn)用免疫組化檢測(cè)miR-340蛋白的表達(dá)。結(jié)果癌旁組織的miR-340陽(yáng)性表達(dá)率為73.33%，TNBC為51.52%，而非TNBC為29.63%，三組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.671，P＜0.05）。miR-340蛋白的表達(dá)在TNBC和非TNBC患者中與年齡，月經(jīng)狀態(tài)和腫瘤直徑差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而miR-340蛋白的表達(dá)與TNBC的臨床分期和淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性(P＜0.05)。結(jié)論miR-340參與了TNBC的發(fā)生發(fā)展，可能成為TNBC治療的目的基因之一。

乳腺癌;免疫組化;微小RNA

三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是指雌激素受體（ER），孕激素受體（PR）和人表皮生長(zhǎng)因子的受體（HER-2）均為陰性的乳腺癌，具有發(fā)病年齡早，惡性程度高，已發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[1-2]。在治療策略中并不能從乳腺癌內(nèi)分泌和靶向治療獲益。微小RNA（miRNA）參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展，有研究表明miR-340參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展[3]，本研究通過(guò)miR-340與TNBC的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2006年1月～2012年12月在我院行乳腺癌根治的患者 60例，全部均為女性，平均年齡53.22±9.21（23～80）歲。術(shù)前均未行放療或者化療。所有病理標(biāo)本進(jìn)行了免疫組織化學(xué)檢測(cè)，其中三陰乳腺癌33例和非三陰乳腺癌27例。其中三陰乳腺癌的年齡45.73±8.83（23～62）歲，腫瘤直徑5.32±1.32（1.0～14.0）cm；月經(jīng)情況：絕經(jīng)前10例，絕經(jīng)后23例；臨床分期：Ⅰ期9例、Ⅱ期13例和Ⅲ期11例；伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10例，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例。非三陰乳腺癌的年齡62.37±9.21（37～80）歲，腫瘤直徑5.37±2.13（1.0～13.0）cm；月經(jīng)情況：絕經(jīng)前7例，絕經(jīng)后20例；臨床分期：Ⅰ期6例、Ⅱ期12例和Ⅲ期9例；伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)檢測(cè) 2組手術(shù)切除癌癥標(biāo)本60例和癌旁組織15例經(jīng)4%的中性甲醛固定，性石蠟包埋，連續(xù)切片，其厚度約4μm。免疫組化按照試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行操作，主要包括組織切片進(jìn)行脫蠟，水花，加熱抗原進(jìn)行修復(fù)，消除內(nèi)源性過(guò)氧化氫，用山羊血清封閉抗原，依次滴入miR-340抗體（工作濃度1∶100），生物素化二抗及ABC復(fù)合物，DBA顯色，蘇木素復(fù)染后封片，用PBS代替一抗為陰性對(duì)照，用已知的陽(yáng)性標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.2 陽(yáng)性結(jié)果的判斷 乳腺癌組織或者乳腺組織胞漿中出現(xiàn)明顯的黃色或者棕黃色為陽(yáng)性，其中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于10%為陰性表達(dá)（-），大于等于10%為陽(yáng)性表達(dá)（+）。分別有兩位病理師進(jìn)行獨(dú)立鏡檢和評(píng)判。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 15.0軟件。正態(tài)計(jì)量資料以“x±s”表示，獨(dú)立2組變量的比較采用t檢驗(yàn)，同組治療其前后的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。計(jì)數(shù)資料用率表示，2組間率比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 miR-340在乳腺癌組織中的表達(dá)特點(diǎn) 從表1可知，癌旁組織的陽(yáng)性表達(dá)率為73.33%，三陰性乳腺癌為51.52%，而非三陰性乳腺癌為29.63%，3組表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.671，P＜0.05）。

2.2 miR-340在非三陰性乳腺癌和三陰性乳腺癌組織表達(dá) miR-340蛋白的表達(dá)在非三陰性乳腺癌患者中與年齡，月經(jīng)狀態(tài)，腫瘤直徑，臨床分期和淋巴結(jié)狀態(tài)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而miR-340蛋白的表達(dá)與三陰性乳腺癌的臨床分期和淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性(P＜0.05)，與年齡，月經(jīng)狀態(tài)和腫瘤直徑無(wú)明顯相關(guān)性（見(jiàn)表2）。

表1 miR-340在乳腺癌組織中的表達(dá)Tab. 1 Expression of miR-340 in breast cancer

表2 miR-340在非三陰性乳腺癌和三陰性乳腺癌組織表達(dá)Tab. 2 Expression of miR-340 in TNBC and non- TNBC

3 討論

在全世界每年有30萬(wàn)人口被診斷出為乳腺癌，其治療主要有手術(shù)治療，化療，放療，靶向治療和激素治療等，由于乳腺癌的病理類型多種，導(dǎo)致治療方法的多樣性，因此到現(xiàn)在為主沒(méi)有統(tǒng)一治療乳腺癌的金標(biāo)準(zhǔn)[4-5]?，F(xiàn)在乳腺癌的主要分為管型A型（ER陽(yáng)性和（或）PR陽(yáng)性，HER-2陰性），管型B/C型（與A型不同的是HER-2陽(yáng)性）和TNBC型（ER、PR和HER-2均為陰性）[6-7]。由于TNBC型在乳腺癌中僅為10%～17%，但由于其預(yù)后較其他類型更差，而乳腺癌的特殊治療策略如激素和靶向治療并無(wú)明顯療效，因此尋找TNBC類型的基因表達(dá)譜十分有必要，對(duì)于改善其診斷，治療和預(yù)后均具有重要意義。

現(xiàn)已知miRNAs不僅在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，而且在生理活動(dòng)和生長(zhǎng)發(fā)育中具有重要作用[8]。在乳腺癌中，miR-335能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，而且其表達(dá)量與患者的生存期存正相關(guān)，與抑癌基因具有類似的作用[9]。另一個(gè)基因miR-10 b在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中高表達(dá)，并且促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，而起到癌基因的作用[10-11]。本組研究表明miR-340在乳腺癌旁組織的表達(dá)量明顯高于乳腺癌組織，而三陰乳腺癌中的表達(dá)明顯高于非三陰乳腺癌組織，說(shuō)明miR-340參與了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展的過(guò)程。miR-340蛋白的表達(dá)在非三陰性乳腺癌患者中與年齡，月經(jīng)狀態(tài)，腫瘤直徑，臨床分期和淋巴結(jié)狀態(tài)無(wú)明顯關(guān)系；而miR-340蛋白的表達(dá)與三陰性乳腺癌的臨床分期和淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性，與年齡，月經(jīng)狀態(tài)和腫瘤直徑無(wú)明顯相關(guān)性。說(shuō)明miR-340蛋白的表達(dá)與三陰乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，惡性程度和轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性。與Baffa等[12]運(yùn)用miRNA芯片檢測(cè)腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)乳腺轉(zhuǎn)移瘤中的miR-340表達(dá)較原發(fā)腫瘤下降具有類似之處，但本研究進(jìn)一步證實(shí)了miR-340與三陰乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性。

[1] Kim MJ,Kim DH,Jung WH,et al.Expression of metabolism-related proteins in triple-negative breast cancer[J].Int J Clin Exp Pathol,2013,7(1)：301-312.

[2] Kaneko N,Yamanaka K,Kita A,et al.Synergistic antitumor activities of sepantronium bromide(YM 155),a survivin suppressant,in combination with microtubule-targeting age nts in triple-negative breast cancer cells[J].Biol Pharm Bull,2013,36(12)：1921-1927.

[3] Wu ZS,Wu Q,Wang CQ,et al.miR-340 inhibition of breast cancer cell migration and invasion through targeting of oncoprotein c-Met[J]. Cancer,2011,117(13)：2842-2852.

[4] Tessari A,Palmieri D,Di Cosimo S.Overview of diagnostic/targeted treatment combina tions in personalized medicine for breast cancer patients[J].Pharmgenomics Pers Med,2013,（7）：1-19.

[5] Hotko YS.Male breast cancer：clinical presentation,diagnosis,treatment[J].Exp Oncol,2013,35(4)：303-310.

[6] Richter D,Abarzua S,Chrobak M,et al.Effects of phytoestrogen extracts isolated fro m pumpkin seeds on estradiol production and ER/PR expression in breast cancer and tr ophoblast tumor cells[J].Nutr Cancer,2013,65(5)：739-745.

[7] Zhang SJ,Hu Y,Qian HL,et al.Expression and significance of ER,PR,VEGF,C A 15-3,CA 125 and CEA in judging the prognosis of breast cancer[J].Asian Pac J Canc er Prev,2013,14(6)：3937-3940.

[8] Sun Y,Zhao X,Zhou Y,et al.miR-124,miR-137 and miR-340 regulate colorectal can cer growth via inhibition of the Warburg effect[J].Oncol Rep,2012,28(4)：1346-1352.

[9] Heyn H,Engelmann M,Schreek S,et al.MicroRNA miR-335 is crucial for the BRCA 1 regulatory cascade in breast cancer development[J].Int J Cancer,2011,129(12)：2797-2806.

[10] Ma L.Role of miR-10 b in breast cancer metastasis[J].Breast Cancer Res,2010,12(5)：210.

[11] Ibrahim SA,Yip GW,Stock C,et al.Targeting of syndecan-1 by microRNA miR-10 b promotes breast cancer cell motility and invasiveness via a Rho-GTPaseand E-cadherin-dependent mechanism[J].Int J Cancer,2012,131(6)：884-896.

[12] Fassan M,Baffa R,Palazzo JP,et al.MicroRNA expression profiling of male breast cancer[J].Breast Cancer Res,2009,11(4)：58.

Expression of miR-340 in triple negative breast cancer and their signi fi cance

FU Shao-mei, YIN Chu-yang, SONG Hui△
(Department of Breast Surgery, Obstetrics and Gynecology Hospital, Fudan University, Shanghai 200011, China)

ObjectiveTo investigate the relationship among the expression of miR-340 protein, occurrence, development and metastasis in triplenegative breast cancer (TNBC)。Method60 patients with breast cancer, from January 2006 to December 2012, according to the immunohistochemistry expression of estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and human epidermal growth factor receptor (HER-2), were divided into TNBC (33 patients) and non- TNBC (27 patients), and the breast cancer tissues (15 patients) were also selected at the same period, and the expression of miR-340 protein were detected by the immunohistochemistry。ResultsThe positive expression of miR-340 protein was 73.33% in adjacent tissues of breast cancer, 51.52% in TNBC, 29.63% non-TNBC, the expression differences of each group were statistically signi fi cant(χ2=7.671,P＜0.05). The expression of miR-340 protein in TNBC and non- TNBC patients were no signi fi cant difference in age, menopausal status and tumor size; while there were obvious correlation among clinical stage, lymph node metastasis and protein expression of miR-340 in TNBC(P＜0.05)。ConclusionThe gene of miR-340 involves in the occurrence, development and metastasis of TNBC, they would be one of the purposes gene therapy in TNBC.

breast cancer; immunohistochemistry; miRNA

R 737.9

A

1005-1678(2014)01-0072-02

傅少梅，女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：乳腺腫瘤方向的研究；宋暉，通信作者，E-mail：vipsonghui@139.com。