宋繼榮，樸英蘭，李佳琳，杜佳秋

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江佳木斯154003)

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMs)是育齡婦女常見病和多發(fā)病，因其具有復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為且缺乏有效治愈手段而長(zhǎng)期困擾臨床。近年研究顯示血管生成是子宮內(nèi)膜異位癥形成和發(fā)展的必備條件之一。因此抗血管生成成為目前治療EMs的研究熱點(diǎn)。青蒿琥酯(artesunate)是從菊科一年生草本植物黃花蒿提取所得的倍半萜內(nèi)酯類化合物青蒿素的水溶性衍生物，臨床上多用于搶救和治療腦型瘧疾和惡性瘧疾，其毒、副作用較少［1］。近年來研究發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯具有抗血管生成作用。本實(shí)驗(yàn)采用不同劑量青蒿琥酯干預(yù)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型，為子宮內(nèi)膜異位癥的治療提供新的思路。

1 材料與方法

健康成熟未孕雌性Wistar大鼠50只，體重(220±10)g，(購(gòu)自佳木斯大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。)參考Vemond等［2］的方法，以自體移植法手術(shù)建立子宮內(nèi)膜異位癥模型。建模后3周開腹觀察成模情況，按Katsuki方法［3］用兩腳規(guī)測(cè)量計(jì)算移植物體積(長(zhǎng)×寬×高)mm3。將造模成功的大鼠隨機(jī)分為4組，每天采用灌胃法給藥。(1)生理鹽水對(duì)照組：每天灌胃法服用生理鹽水2mL；(2)青蒿琥酯低劑量組：10mg/kg·d；(3)青蒿琥酯中劑量組：50mg/kg·d；(4)青蒿琥酯高劑量組：100mg/kg·d。連用2周后處死大鼠。開腹觀察移植內(nèi)膜情況。同時(shí)取大鼠內(nèi)眥靜脈血清ELISA法檢測(cè)VEGF/MMP-9濃度

2 結(jié)果

2.1 成模情況

造模成功的大鼠可見移植內(nèi)膜體積增大，內(nèi)出現(xiàn)液體積聚(積液高度≥2mm)，呈透亮的小囊泡，被結(jié)締組織或大網(wǎng)膜覆蓋并有血管形成，質(zhì)軟。取少許組織做病理檢查，有內(nèi)膜上皮細(xì)胞間質(zhì)生長(zhǎng)并有分泌活性，證實(shí)建模成功。50只大鼠中有40只移植物成活，成功率為80%。分別測(cè)量并記錄移植物體積。

2.2 青蒿琥酯治療前后各組成模大鼠移植物體積(mm3)變化

青蒿琥酯治療前幾乎所有異位子宮內(nèi)膜病灶都與周圍組織有不同程度的粘連，部分病灶與腸管、子宮粘連嚴(yán)重。治療后，對(duì)照組移植物體積和粘連情況與治療前無明顯差異(P＞0.05)。用藥組的大鼠異位內(nèi)膜病灶體積均有明顯縮小(P＜0.05)，且不同劑量組之間有顯著性差異。見表1。

2.3 各治療組大鼠外周血MMP-9、VEGF的表達(dá)及與對(duì)照組之間的比較

見表2。

表1 治療前后各組大鼠移植物體積V(mm3)的變化(x± s，n=10)

表2 青蒿琥酯灌胃后各組大鼠外周血MMP-9、VEGF表達(dá)水平()

表2 青蒿琥酯灌胃后各組大鼠外周血MMP-9、VEGF表達(dá)水平()

注：各用藥組大鼠血清中MMP-9及VEGF含量均低于對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.05)；各個(gè)劑量組間兩兩比較差異顯著(P＜0.05)，隨著給藥劑量的增加，兩者的含量均明顯減少。

組別 治療后MMP-9(ug/L) 治療后VEGF(ng/L)低劑量組18.24±0.25 20.86±1.62中劑量組 17.01±0.31 18.87±1.42高劑量組 15.89±0.13 16.68±1.23對(duì)照組20.98±0.73 22.96±1.38

3 討論

3.1 VEGF及MMP-9與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是迄今發(fā)現(xiàn)的最重要的血管生長(zhǎng)因子，廣泛存在于人體組織中，幾乎參與機(jī)體各種疾病過程。異位內(nèi)膜的生長(zhǎng)需要依賴新生血管給予營(yíng)養(yǎng)。而VEGF誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、增加微血管通透性從而促進(jìn)新生血管形成正好滿足了這種需要。大量研究表明，內(nèi)異癥患者無論是血清還是腹腔液以及病灶組織中都有VEGF高表達(dá)?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是一組鋅離子依賴性內(nèi)肽酶，它們需在激活劑作用下，脫去前肽才具有酶活性。它們幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)的所有成分，因而成為近年來腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移以及內(nèi)異癥研究的熱點(diǎn)。MMP-9作為MMP家族的重要成員，它參與基底膜的降解；并且能夠釋放血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)［4］，從而促進(jìn)異位內(nèi)膜組織的侵襲和生長(zhǎng)。成模組大鼠血清中的MMP-9和VEGF表達(dá)明顯高于正常大鼠血清含量，證實(shí)兩者與內(nèi)異癥的生成、持續(xù)及侵襲有關(guān)［5］。

3.2 青蒿琥酯對(duì)大鼠異位內(nèi)膜病灶的影響

20世紀(jì)初，有學(xué)者用家兔做為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，成功將自體子宮內(nèi)膜移植到兔子腹腔，成為最早的與人類內(nèi)異癥相似的異位病灶，為早期內(nèi)異癥的研究打下了良好的基礎(chǔ)。1985年大鼠自體移植模型創(chuàng)立，經(jīng)過國(guó)內(nèi)外學(xué)者的多次摸索實(shí)踐，成功率已經(jīng)達(dá)到80%以上。本實(shí)驗(yàn)成功復(fù)制了大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型，成功率80%，與文獻(xiàn)報(bào)道的接近。病灶肉眼可見內(nèi)部充滿透亮漿液的小囊泡，表面覆蓋結(jié)締組織并有豐富的血管；鏡下觀察可見囊壁內(nèi)膜層子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞，呈高柱狀或扁平狀，并有少量上皮細(xì)胞有分泌現(xiàn)象。腺體間質(zhì)細(xì)胞少而稀疏、形態(tài)改變，有的腺腔極度擴(kuò)大。這與人類內(nèi)異癥病灶組織在光鏡下的病理結(jié)構(gòu)類似［6］。經(jīng)過青蒿琥酯治療后，三組大鼠異位病灶體積均較對(duì)照組明顯縮小，血清中MMP-9和VEGF的表達(dá)也明顯減少，表明青蒿琥酯通過某種方式降低了異位內(nèi)膜新生血管的形成，并對(duì)異位組織的侵襲起到了抑制作用。

3.3 青蒿琥酯抗EMs血管生成作用的應(yīng)用前景

青蒿在我國(guó)用于治療瘧疾已有上千年歷史，因其具有來源廣、價(jià)格低廉、毒副反應(yīng)輕、抗瘧效果好而一直受到我國(guó)藥學(xué)與臨床工作者的青睞。青蒿素及其衍生物是我國(guó)具有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的藥物，目前已形成批量生產(chǎn)，開發(fā)其新用途對(duì)提高藥用價(jià)值具有重要意義。近年來國(guó)內(nèi)外研究表明青蒿素及衍生物青蒿琥酯具有廣泛的體內(nèi)外抗腫瘤效應(yīng)，而其中的一個(gè)重要機(jī)制就是抑制腫瘤的新生血管形成，本實(shí)驗(yàn)顯示應(yīng)用青蒿琥酯后異位病灶的體積和VEGF及MMP-9的血清含量均明顯低于對(duì)照組，提示青蒿琥酯抑制了兩者的表達(dá)，并推測(cè)其可能通過抑制新生血管的生成從而達(dá)到對(duì)內(nèi)異癥的治療作用。臨床上青蒿琥酯一直用于抗瘧治療，它的試驗(yàn)研究主要在抗腫瘤領(lǐng)域，本課題組首次把青蒿琥酯用于治療EMs大鼠模型的研究，并得出有意義的結(jié)論，對(duì)開發(fā)老藥的新作用有一定的啟示，并給子宮內(nèi)膜異位癥的治療提供了新思路。

［1］Benakis A，Paris M，Loutan L，et al.Pharmacokinetics of artemisinin and artesunate after oral administration in healthy volunteers［J］.Am J Trop Med Hyg，1997，56（1）：17-23

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［3］Katsuki Y，Takano Y，F(xiàn)utamura Y，et al.Effects of dienogest，a synthetic steroid，on experimental endometriosis in rats［J］.Eur J Endocrinol，1998，138（2）：216-226

［4］魯衍強(qiáng)，葉其壯.基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑［J］.生命的化學(xué)，2002，22（4）：348

［5］宋繼榮，李佳林，盧北燕，等.吡格列酮對(duì)大鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型VEGF和MMP-9表達(dá)的影響［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2011，34（4）：96-97

［6］Uchiide l，Lhara T，Sugamata M.Pathological evalution of the rat endometriosis model［J］.Fertil Steril，2002，78（4）：782-786