王振富 鐘 靈 楊付明

(湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北 恩施 445000)

糖尿病腎病(DN)是糖尿病常見的并發(fā)癥之一，也是糖尿病死亡的主要因素。目前尚無療效確切的西藥可延緩其病程的發(fā)展，因此，用中藥防治DN的研究備受人們關(guān)注。研究表明黃芪等中藥有防治DN的作用〔1〕。五鶴續(xù)斷因其生長于湖北省五峰及鶴峰兩縣境內(nèi)而得名，屬于川續(xù)斷科植物，并且是川續(xù)斷中的優(yōu)質(zhì)品，藥用部位為其干燥根，具有補(bǔ)肝益腎、續(xù)接筋骨、抗骨質(zhì)疏松、止血安胎等功效，臨床上主要用于治療腰膝酸軟，跌打損傷，骨折，腰椎骨質(zhì)增生，先兆性流產(chǎn)和習(xí)慣性流產(chǎn)等癥狀〔2〕。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示五鶴續(xù)斷具有增強(qiáng)免疫力、抗氧化和延緩衰老的作用〔3〕，但在防治DN方面的實(shí)驗(yàn)研究未見報(bào)道。五鶴續(xù)斷多糖是五鶴續(xù)斷的主要高效活性成分之一，本實(shí)驗(yàn)旨在探討五鶴續(xù)斷多糖對(duì)大鼠DN的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1主要試劑和儀器 鏈脲佐菌素(STZ)購于Sigma公司；氫化可的松注射液購于山西晉新雙鶴藥液有限公司；苯那普利(洛汀新)購于北京諾華制藥有限公司。Beckman全自動(dòng)生化分析儀(湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院)，TGL-16G 高速臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭儀器廠)，DL-50型超級(jí)恒溫器，F(xiàn)-160型藥物粉碎機(jī)(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)，RE52-3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海滬西分析儀器廠)。

1.2五鶴續(xù)斷多糖提取物的制備 五鶴續(xù)斷由恩施自治州中藥材生產(chǎn)GAP 示范基地提供。取五鶴續(xù)斷干燥根1 kg，用粉碎機(jī)打成粉末，過60目篩。提取工藝流程參照武蕓等〔4〕：石油醚脫脂-熱水浸提-水提液過濾-冷凍濃縮-乙醇沉淀多糖-sevage試劑去蛋白-冷凍干燥-測(cè)定含量。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、造模及處理〔5〕純種SD大鼠，體重220～250 g，由湖北民族學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將40只SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組10只(雌雄各5只)：對(duì)照組、模型組、苯那普利組和五鶴續(xù)斷多糖組。參照文獻(xiàn)〔5〕，采用STZ(60 mg/kg 1次腹腔注射)和氫化可的松制作DN大鼠模型,造模完成后每天定時(shí)灌胃：對(duì)照組和模型組給予蒸餾1 ml·kg-1·d-1灌胃;苯那普利組給予苯那普利溶液1.5 mg·kg-1·d-1灌胃；五鶴續(xù)斷多糖組給予五鶴續(xù)斷多糖溶液1 ml ·kg-1·d-1灌胃。實(shí)驗(yàn)第8周統(tǒng)一處死大鼠。處死前將大鼠置洗凈的金屬代謝籠收集24 h尿，留尿期間禁食，不禁水，記錄尿量后取5 ml，5 000 r/min離心5 min,將上清液保存于-70℃冰箱待測(cè)。稱量大鼠體重后,用戊巴比妥溶液40 mg/kg 腹腔內(nèi)注射麻醉,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血6 ml， 常溫下5 000 r/ min 離心10 min 分離血清，置于-70℃冰箱保存待測(cè)。取出雙腎,以4℃0.85%氯化鈉洗凈，小心剝?nèi)ツI包膜，以4℃0.85%氯化鈉沖洗腎血管3次以上。微量電子天平稱量雙腎重。

1.4血、尿生化指標(biāo)測(cè)定 血糖(PG)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)采用Beckman 全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定,并計(jì)算內(nèi)生肌酐排泄率(Ccr),Ccr(ml/min)= 尿肌酐濃度×每分鐘尿量/血漿肌酐濃度；β2-微球蛋白(β2-MG)水平采用放射免疫法測(cè)定；24 h尿微量清蛋白排泄率(UAER)= 尿清蛋白水平(mg/ml)×24 h 尿量(ml)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS15.0軟件進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1五鶴續(xù)斷多糖對(duì)DN大鼠腎重/體重、PG及血脂的影響 與對(duì)照組比較，模型組大鼠腎重/體重明顯增加，PG、血脂增高(P<0.01)；與模型組比較，五鶴續(xù)斷多糖能明顯降低模型大鼠腎重/體重、PG及血脂(P<0.01)，見表1。

2.2五鶴續(xù)斷多糖對(duì)DN大鼠腎功能的影響 與對(duì)照組比較，模型組大鼠出現(xiàn)明顯腎衰竭(P<0.01)，與模型組比較，五鶴續(xù)斷多糖能明顯改善腎功能(P<0.01)，見表2。

表1 五鶴續(xù)斷多糖對(duì)DN大鼠腎重/體重、及血脂的影響

表2 五鶴續(xù)斷多糖對(duì)DN大鼠腎功能的影響

3 討 論

DN早期病理特點(diǎn)為腎小球肥大、腎小球和腎小管基底膜增厚以及系膜外基質(zhì)進(jìn)行性積聚；其后期為腎小球和腎小管纖維化，并最終導(dǎo)致蛋白尿和腎衰竭。DN的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚不完全明了。大多數(shù)學(xué)者人為：腎血流動(dòng)力學(xué)改變、糖代謝紊亂及由此所致的非酶糖基化、多元醇通路激活、血管活性物質(zhì)及細(xì)胞因子激活、氧化應(yīng)激、蛋白激酶C激活、腎病蛋白、脂代謝紊亂、遺傳等因素有關(guān)〔6〕。DN的治療采用一體化治療原則：嚴(yán)格控制高血糖、高血壓、糾正脂代謝紊亂、逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗、減少蛋白尿、保護(hù)腎功能和積極治療并發(fā)癥。雖然這些措施可以減緩蛋白尿的增加和腎功能減退,降低病死率,但DN的治療仍然是一個(gè)巨大的難題,更有效的治療措施和新藥的研發(fā)迫在眉睫〔7〕。研究表明：黃芪、冬蟲夏草等中藥具有防止DN的作用〔8〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：五鶴續(xù)斷多糖具有增加腎重/體重、降低血糖和血脂及減緩腎衰竭的作用。可能機(jī)制為：雙向調(diào)節(jié)血糖、抑制一氧化氮(NO)合成、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、降低血漿滲透壓和血液黏度、調(diào)節(jié)脂代謝的作用,能增加腎血流量,減輕脂質(zhì)在腎小球和腎間質(zhì)的沉積和微血栓的形成,還能改善腎功能、防止腎小球硬化，但其具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

4 參考文獻(xiàn)

1閆凌云，楊叔禹，李學(xué)軍.黃芪多糖對(duì)糖尿病腎病防治機(jī)制的研究進(jìn)展〔J〕.醫(yī)學(xué)綜述,2012；18(11)：1727-9.

2全國中草藥匯編寫組.全國中草藥匯編(下冊(cè))〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：135.

3艾明仙.五鶴續(xù)斷注射液對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶及抗氧化酶的影響〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2007；6(11):1044-6.

4武 蕓，丁 莉.五鶴續(xù)斷多糖的提取及動(dòng)態(tài)分布規(guī)律的研究〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009；20(6):1325-6.

5陳小野.實(shí)用中醫(yī)征候動(dòng)物模型〔M〕.北京：北京醫(yī)科大學(xué)·中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1993：100-5.

6廖 鈺,夏 寧.糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展〔J〕.醫(yī)學(xué)綜述,2011；17(22)：3453-5.

7方岐瑩，邵鳳民.糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制及治療新進(jìn)展〔J〕.實(shí)用診斷與治療雜志，2008；22(3)：201-3.

8張 穎，苗明三.糖尿病腎病動(dòng)物模型及中醫(yī)藥治療特點(diǎn)〔J〕.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2011；26(3)：329-32.