李雪青 石志敏

(河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北 唐山 063000)

在即刻早期反應(yīng)基因(IEGs，即早基因)中研究較多的有原癌基因c-fos和e-jun它是一類對(duì)外界刺激信號(hào)傳入數(shù)分鐘內(nèi)即作出反應(yīng)并進(jìn)行表達(dá)的基因〔1〕。腦缺血時(shí)間、缺血模型、鼠的種類及檢測(cè)所用的試劑等因素有關(guān)都可能使腦缺血后c-fos表達(dá)出現(xiàn)差異。目前缺血神經(jīng)元死亡機(jī)制中的一個(gè)關(guān)鍵性環(huán)節(jié)就是p53及其相關(guān)基因在腦缺血中的表達(dá)調(diào)控。本研究觀察繆刺對(duì)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白c-fos、p53的影響。

1 資料與方法

1.1動(dòng)物分組 雄性Wistar大鼠80只,隨機(jī)分成模型對(duì)照組、普通針刺組、繆刺組、普通針刺和繆刺聯(lián)合組,每組20只。

1.2右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞模型制作 參照文獻(xiàn)〔2〕采用改良方法將 Wistar大鼠制備為MCAO模型。

1.3針刺選穴與操作 模型對(duì)照組:不予治療,每天同樣抓取1 次,不做其他處理。普通針刺組:根據(jù)華興邦等研制的大鼠穴位圖譜選取穴位：合谷、內(nèi)關(guān)、委中、三陰交針具:30 號(hào) 1 寸毫針(華佗牌,蘇州針灸器械廠) 操作方法：先在施針處常規(guī)消毒,然后持針依次在大鼠左側(cè)肢體上(患側(cè))針刺以上四穴為了保證刺激強(qiáng)度的穩(wěn)定,采用電針的方法,直刺進(jìn)針5 mm,針柄連接于電針治療儀的電極上,頻率2 Hz,電壓一般3～5 V,電流1～2 mA,疏密波,1次/d,30 min/次?？姶探M操作同上,選穴在大鼠右側(cè)肢體(健側(cè))，聯(lián)合組:操作同上,雙側(cè)肢體同時(shí)選穴(健側(cè)、患側(cè)同時(shí))，首次針刺造模術(shù)后 6 h開(kāi)始,治療各組療程分別為 1、3、5、10、15 d;1次/d。

1.4繆刺對(duì)MCAO模型大鼠腦組織蛋白c-fos、p53表達(dá)的影響 步驟：①載玻片防脫片劑處理；②腦組織固定、脫水、透明、包埋及切片；③將切片置于經(jīng)防脫片劑處理過(guò)的載玻片上，保存，備用；④石蠟切片脫蠟水化→顯色劑DAB顯色→顯微鏡觀察;⑤終止反應(yīng)→復(fù)染→沖洗返藍(lán)→脫水→封片觀察；⑥結(jié)果:胞核或胞質(zhì)棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞。⑦圖像分析:400倍光鏡下，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞，觀察5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)每100個(gè)細(xì)胞中染色的細(xì)胞數(shù)；⑧取8組數(shù)據(jù)求其平均值進(jìn)行組間比較。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1繆刺對(duì)MCAO模型大鼠大腦皮質(zhì)c-fos蛋白表達(dá)的影響 見(jiàn)表1。普通針刺組、繆刺組、聯(lián)合組分別與模型對(duì)照組比較其中在24 h及48 h時(shí)間點(diǎn)普通針刺組、繆刺組、聯(lián)合組c-fos蛋白表達(dá)均有不同程度的降低(P<0.05)。在72 h時(shí)間點(diǎn)聯(lián)合組及繆刺組c-fos蛋白表達(dá)較模型對(duì)照組降低(P<0.05)。

表1 繆刺對(duì)MCAO模型大鼠大腦皮質(zhì)c-fos蛋白表達(dá)的影響

2.2繆刺對(duì)MCAO模型大鼠大腦皮質(zhì)p53蛋白表達(dá)的影響 與模型對(duì)照組比較，在24 h及48 h時(shí)間點(diǎn)普通針刺組、繆刺組、聯(lián)合組p53蛋白表達(dá)均有降低(P<0.05)。在72 h時(shí)間點(diǎn)聯(lián)合組及繆刺組p53蛋白表達(dá)較模型對(duì)照組降低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 繆刺對(duì)MCAO模型大鼠大腦皮質(zhì)p53蛋白表達(dá)的影響

3 討 論

繆刺法是《黃帝內(nèi)經(jīng)》針對(duì)絡(luò)病提出的一種針刺方法，療效肯定所謂“繆”是“荒繆、錯(cuò)誤”的含義。即在針刺治療過(guò)程中“左病取右，右病取左”，《素問(wèn)·繆刺論》“夫邪客大絡(luò)者，左注右，右注左，上下左右與經(jīng)相干，而布于四末，其氣無(wú)常處，不入于經(jīng)俞，命曰繆刺。”指出：邪氣侵入大絡(luò)后，在左邊流竄到右邊，在右邊流竄到左邊，或上或下，或左或右，但只是影響到絡(luò)脈而不能進(jìn)入經(jīng)脈之中，從而隨絡(luò)脈流布到身體四肢部；邪氣流竄沒(méi)有固定地方，也不能進(jìn)入經(jīng)脈腧穴，所以病氣在右而癥狀見(jiàn)于左，病氣在左而癥狀見(jiàn)于右，必須右痛刺左，左痛刺右，才能中邪，這種刺法叫做“繆刺”。由于繆刺是刺其絡(luò)，因此在臨床上常取各有關(guān)的經(jīng)脈在四肢端的井穴(四末為陰陽(yáng)之大絡(luò))及皮膚部出現(xiàn)郁血的絡(luò)脈。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，繆刺能降低c-fos蛋白的表達(dá)，對(duì)腦缺血損傷產(chǎn)生適應(yīng)性變化，增強(qiáng)腦組織的修復(fù)能力，說(shuō)明繆刺能有效抑制腦缺血后p53的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞凋亡，從而達(dá)對(duì)腦組織的保護(hù)作用。

4 參考文獻(xiàn)

1袁瓊蘭.即早基因c-fos在腦缺血中的作用及研究進(jìn)展〔J〕.滬州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001；24(3):261-3.

2徐 凌.PKB/Akt及其生理作用的研究進(jìn)展〔J〕.國(guó)外醫(yī)學(xué)·流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊(cè)，2003；30(4):233-6.