楊重恒

(遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院口腔科，遼寧 錦州 121000)

腫瘤的生物學行為與多種因素有關，通過研究表明血管內皮細胞生長因子(VEGF)、增殖細胞核抗原(PCNA)與多種腫瘤的病理分級、 惡性程度、轉移及預后有密切關系〔1，2〕，據(jù)此推測可能也與腮腺多形性腺瘤有關。本研究探討VEGF、PCNA在良惡性腮腺多形性腺瘤中的表達及意義。

1 材料與方法

1.1臨床資料 遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院和第二醫(yī)院病理科1992～2012年腮腺多形性腺瘤61例，其中良性腮腺多形性腺瘤30例，男14例，女16例，年齡18～75(平均48)歲；惡性腮腺多形性腺瘤31例，男16例，女15例，年齡50～75(平均67)歲。29例正常腮腺組織為隨機從良性腮腺多形性腺瘤旁的正常腮腺組織中選取。

1.2免疫組織化學法 鼠抗人單克隆VEGF抗體(ZM-040)、鼠抗人單克隆PCNA抗體(ZM-0213)及通用性二抗(SP-9000)均購自北京中杉金橋生物技術公司。實驗步驟按照免疫組織化學SP法說明進行操作。

1.3結果判定 VEGF陽性信號表達于腫瘤細胞和內皮細胞，定位于細胞質和細胞膜，染色由淺黃至棕褐色〔3〕；PCNA陽性信號定位于細胞核，呈棕褐色顆粒。陽性染色細胞選取條件為細胞結構清晰、陽性顆粒定位好，著色與背景對比明顯。視野選取染色均勻的腫瘤區(qū)。每張切片隨機選取5個高倍視野(×400)，各計數(shù)200個細胞，陽性細胞數(shù)取均值，再計算該標本的陽性表達率。無陽性細胞為0分，陽性細胞≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。按著色強度判斷，無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。著色強度積分與數(shù)量積分的乘積>3分判為免疫反應(+)〔4〕。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS10.0軟件進行χ2檢驗。

2 結 果

2.1VEGF、PCNA的表達 VEGF陽性表達主要在細胞胞質內和細胞膜上，染色由淺黃至棕褐色；PCNA陽性信號定位于細胞核，呈棕褐色顆粒。見圖1。

2.2VEGF、PCNA在良惡性腮腺多形性腺瘤中的表達 VEGF、PCNA在正常腮腺組織中的陽性表達率分別為6.9%，10.3%，在良性腮腺多形性腺瘤組中分別為36.7%，46.7%。腮腺多形性腺瘤組織中分別為71.0%，80.6%，其中正常腮腺與良性多形性腺瘤組及良、惡性多形性腺瘤組均有顯著差異(P<0.05，P<0.01)。

2.3VEGF、PCNA蛋白表達的相關性 61例多形性腺瘤中，VEGF陽性33例中，PCNA陽性27例，陰性6例；VEGF陰性28例中，PCNA陽性12例，陰性16例。VEGF與PCNA相比較，兩種方法的一致性非常顯著(P<0.01)。

良性腺瘤VEGF

良性腺瘤PCNA

惡性腺瘤VEGF

惡性腺瘤PCNA

3 討 論

血管生成的啟動是腫瘤生長微環(huán)境中血管生成刺激因子和抑制因子平衡改變的結果，其中VEGF是目前發(fā)現(xiàn)的最重要的促進腫瘤血管形成的因子〔5〕，它能夠特異性刺激內皮細胞的增殖，與正常和異常的血管生成均密切相關。VEGF調控的腫瘤新生血管均有功能和結構異常，如扭曲、分叉、基底膜不完整、無神經(jīng)支配、血流紊亂等，有助于血漿的滲出和腫瘤細胞脫離母瘤后進入血管，形成轉移〔6，7〕；另外它還可以通過自分泌途徑作用于腫瘤細胞本身促進腫瘤細胞的增殖，進一步加速腫瘤細胞的生長。

PCNA又稱周期素，是一種36 kD、酸性、無組蛋白的細胞核多肽，其免疫反應大多局限于增殖細胞的核中，胞質則很少或沒有。它的表達合成與增殖細胞的增殖周期有關，G1期在核中表達逐漸增加，S期達到高峰，而G2和M期減少。它是DNA多聚酶δ的輔助蛋白，直接參與細胞增殖過程的DNA復制，是DNA復制過程中所必需的〔8〕。PCNA發(fā)揮功能需要ATP，它具有ATP酶活性。PCNA在細胞核內陽性表達的高低與細胞增殖活性密切相關〔9〕。

本研究提示VEGF、PCNA與腫瘤的惡性程度和病理分級有關。傳統(tǒng)病理形態(tài)學分級確定異型性明顯的腫瘤較準確，而對形態(tài)表現(xiàn)相似、生物學行為卻不同者，進一步病理分級困難。目前研究認為：腫瘤分級、分期相同，而轉移率、生存率不同時，只有使用分子生物學技術(如檢測癌相關基因的表達)，才能合理解釋腫瘤的生長特性。一般而言，分子病理改變總是先于形態(tài)病理，只是由于病因不同，這種先后和變化差異表現(xiàn)程度不同而已。

本研究結果表明VEGF與PCNA的表達有明顯的相關性，隨著VEGF表達的升高PCNA表達也升高。說明它們之間有著某種必然的聯(lián)系，可能為：①VEGF刺激腫瘤血管的形成，為腫瘤細胞帶來營養(yǎng)物質，帶走廢物，促進細胞的增殖。②VEGF直接刺激腫瘤細胞的增殖，造成PCNA增加。本研究，認為VEGF、PCNA的異常表達在腮腺多形性腺瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。兩者對腫瘤的作用是密切相關的，二者共同促進腫瘤細胞的生長。

4 參考文獻

1Ebos JM,Lee CR,Cruz-Munoz W,etal.Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis〔J〕.Cancer Cell,2009；15:232-9.

2周祥榮,李忠音,楊小東，等.PCNA和VEGF在胃癌組織中表達的關系及意義〔J〕.華西醫(yī)學,2009；24(10):2585-7.

3Mukohara T，Kudoh S，Yamauchi S，etal.Expression of epidermal growth factor receptor(EGFR)and downstream activated peptides in surgically excised non-small cell lung cancer(NSCLC)〔J〕.Lung Cancer，2003；41(2)：123-30.

4許良中,楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準〔J〕.中國癌癥雜志,1996；6(4):229-30.

5李京佳，林相國，許 濤，等.VEGF家族及其在腫瘤生長中作用的研究〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2012；12(4)：777-9.

6Wong YK，Liu CJ，Kwan PC，etal.Microvacsular density and vascular endothelial growth factor immunoreactivity as predictors of regional lymph node metastasis from betel-associated oral squamous cell carcinoma〔J〕.Oral Maxillofac Surg，2003；61(11)：1257-62.

7Arora S，Kaur J，Sharma C，etal.Stromelysin 3，Ets-1，and vascular endothelial growth factor expression in oral precancerous and cancerous lesions： correlation with microvessel density，progression，and prognosis〔J〕.Clin Cancer Res，2005；11(6)：2272-84.

8趙 璟,方小玲，龔穎萍.子宮肌瘤中IGF-Ⅱ、PCNA的表達及意義〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2012；22(21)：37-40.

9于曉謨.前列腺癌Bcl-2、p53和PCNA表達的研究〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志,2010；19(36)：4665-7.