古 聯(lián) 宋旭津 謝娟娟 陳 清 嚴(yán) 雁 蘇 莉

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530023)

腦卒中是一種嚴(yán)重致殘和致死的常見神經(jīng)系統(tǒng)疾病,且約85%～90%的腦卒中為缺血性腦卒中(IS)〔1〕。近年一項(xiàng)全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)〔2〕發(fā)現(xiàn)高加索人染色體12p13上NINJ2基因附近的rs12425791多態(tài)性與IS之間的關(guān)聯(lián)達(dá)到了全基因組關(guān)聯(lián)顯著性水準(zhǔn)，因此，rs12425791被認(rèn)為是很有可能的IS的易感遺傳變異。本研究分析IS患者rs12425791多態(tài)性與血脂水平的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1研究對象 2009年7月至2011年6月在廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院治療的IS患者，每名患者均經(jīng)2名主治醫(yī)師以上職稱的神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師，根據(jù)1995年中華醫(yī)學(xué)會第四次全國腦血管病學(xué)術(shù)會議《各類腦血管疾病診斷要點(diǎn)》〔3〕進(jìn)行診斷，且所有患者均經(jīng)CT和(或)MRI檢查確診為IS。共納入166例IS患者，男104例，女62例，平均年齡(68.23±8.46)歲。采用自行設(shè)計的統(tǒng)一調(diào)查問卷，對病例或其家屬進(jìn)行詢問，內(nèi)容包括研究對象的一般情況、高血壓病史和糖尿病病史等既往病史以及吸煙、飲酒等行為生活方式狀況。166例病例均自我報告為廣西漢族人，并知情同意，而且所有病例之間均無親緣關(guān)系。

1.2標(biāo)本采集及血脂檢測 患者住院次日清晨空腹抽取外周血液標(biāo)本5 ml，分為抗凝血和非抗凝血。將抗凝血置于-4℃保存，于3 d內(nèi)提取血液基因組DNA。非抗凝管血用于進(jìn)行血脂檢測，采用日立 7600全自動生化分析儀檢測總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。血脂異常：根據(jù)中國成人血脂異常診斷標(biāo)準(zhǔn)〔3〕，TC≥6.22 mmol/L為升高，TG≥2.26 mmol/L為升高，LDL-C≥4.14 mmol/L為升高，HDL-C<1.04 mmol/L為降低。

1.3DNA提取及基因分型 本研究采用天根科技(北京)有限公司生產(chǎn)的血液基因組DNA提取試劑盒〔TIANamp Blood DNA Kit(離心柱形),目錄號DP318DNA〕，按照產(chǎn)品說明書所述步驟提取血液基因組DNA。將提取后的DNA分裝為3管，于-20℃保存以備用。使用美國應(yīng)用生物系統(tǒng)(ABI) 公司生產(chǎn)的ABI7500 Fast 實(shí)時熒光定量PCR儀以及TaqMan SNP基因分型試劑盒〔試劑盒包括2×通用PCR預(yù)混試劑Universal PCR Master mix (無AmpErase UNG酶)，40×SNP 基因分型試劑Genotyping Assay Mix〕，采用TaqMan MGB探針等位基因分型技術(shù)來對rs12425791進(jìn)行基因分型。PCR反應(yīng)體系的總體積為10 μl，包含：2×TaqMan Universal PCR Mix，5.00 μl；Assay-on-Demand SNP Genotyping Assay Mix(40×)，0.25 μl；無核酸H2O，3.75 μl；基因組DNA，1.00 μl。PCR的反應(yīng)條件：預(yù)變性95℃10 min，變性92℃ 15 s、退火60℃ 1 min，變性以及退火程序循環(huán)43次。對基因分型實(shí)驗(yàn)操作采取以下措施進(jìn)行質(zhì)量控制：對實(shí)驗(yàn)的操作者施盲，使其在進(jìn)行基因分型時不知道標(biāo)本的病例/對照狀態(tài)；每次96孔PCR反應(yīng)板均要設(shè)置2個空白對照并設(shè)置3個隨機(jī)重復(fù)樣本作為陽性對照；而且，隨機(jī)抽取5%的檢測樣本做盲法重復(fù)測定，檢測結(jié)果一致率達(dá)100%。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件進(jìn)行χ2及t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1HarDY-Weinberg Equilibrium(HWE)檢驗(yàn) rs12425791基因型在166例IS患者中的頻數(shù)觀察值分別為103，54，9；期望值分別為102，56，8。頻數(shù)觀察值和期望值差異無顯著性(χ2=0.297,P=0.586)，符合HarDY-Weinberg平衡定律(P>0.05)，說明本研究應(yīng)用的抽樣群體適合于遺傳分析。

2.2不同rs12425791基因型IS患者的血脂水平比較 由于G/G基因型患者例數(shù)較少，為便于比較，將G/G基因型與A/A基因型患者合并為(G/A+A/A)基因型組。不同rs12425791基因型IS患者的血脂水平相比較，G/G基因型患者與(G/A+A/A)基因型患者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同rs12425791等位基因IS患者的血脂水平相比較，G等位基因患者與A等位基因患者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差異也均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.3不同rs12425791等位基因型IS患者血脂比較 不同rs12425791基因型IS患者的血脂異常率比較，G/G基因型患者與(G/A+A/A)基因型患者在TC、TG、LDL、HDL異常率上的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同rs12425791等位基因IS患者的血脂異常率相比較，G等位基因患者與A等位基因患者在TC、TG、LDL、HDL異常率上的差異也均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表1 不同rs12425791基因型、等位基因IS患者血脂比較

表2 不同rs12425791基因型、等位基因IS患者血脂異常比較〔n(%)〕

3 討 論

rs12425791是Ikram等〔2〕的GWAS所發(fā)現(xiàn)與IS的關(guān)聯(lián)性達(dá)到GWAS顯著性水準(zhǔn)的SNP。rs12425791是鄰近NINJ2基因一個位點(diǎn)。NINJ2基因編碼ninjurin2蛋白，ninjurin2是一種嗜同種的與基質(zhì)金屬蛋白酶相互作用的細(xì)胞-細(xì)胞黏附分子〔4〕，在人類骨髓、外周白細(xì)胞、肺和淋巴結(jié)中高表達(dá)。目前，NINJ2基因?qū)S的功能作用在很大程度上仍是不清楚的。

據(jù)報道，IS可控制的危險因素主要包括高血壓、糖尿病、高脂血癥等，而年齡、性別及種族則是不可控制的危險因素。高脂血癥〔5〕可能是一種致炎狀態(tài)，當(dāng)發(fā)生局灶性循環(huán)障礙時可以介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)而加重組織損傷,而調(diào)脂治療能改善腦血管病患者的預(yù)后〔6〕。既往國內(nèi)外有關(guān)易感基因遺傳多態(tài)性與IS患者血脂代謝的相關(guān)性研究結(jié)果并不一致：例如，有研究報道APOE基因與腦梗死血脂異常相關(guān)聯(lián)〔7，8〕，還有研究報道CD14基因多態(tài)性可能通過影響血脂水平而影響IS的發(fā)生〔9〕。但是，也有文獻(xiàn)報道易感基因遺傳多態(tài)性與IS血脂水平無關(guān)聯(lián)，例如，Járomi 等〔10〕在對459例高加索卒中患者進(jìn)行rs16996148，rs17321515、rs12130333基因分型和血脂測定的研究中發(fā)現(xiàn)，不同等位基因的腦卒中患者的TG及TC水平無統(tǒng)計學(xué)差異。目前，易感基因遺傳多態(tài)性在IS患者血脂代謝中的作用機(jī)制目前仍是不甚清楚的。本研究顯示，不同rs12425791基因型或等位基因IS患者在TC、TG、LDL、HDL水平及異常率上的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，與Járomi等〔10〕的研究結(jié)果相類似。本研究提示，rs12425791多態(tài)性可能與IS血脂代謝無關(guān)聯(lián)。但是，目前有關(guān)于rs12425791多態(tài)性與IS患者血脂代謝的相關(guān)性研究還很少，有待于更多更大樣本量的同類研究來豐富研究證據(jù)。

4 參考文獻(xiàn)

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