孫 晶

(遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科一病區(qū)，遼寧 錦州 121001)

載脂蛋白E(ApoE) 是一個含有299個氨基酸并結(jié)合有磷脂的糖蛋白，其分子量為34 kD，其結(jié)構(gòu)基因有明顯的遺傳多態(tài)性，可直接參與膽固醇的代謝。研究表明ApoE基因多態(tài)性與阿爾茨海默病及血管性癡呆關(guān)系密切〔1〕。但ApoE基因多態(tài)性與腦梗死的關(guān)系，現(xiàn)有的研究結(jié)果存在爭議。本研究探討腦梗死患者ApoE基因多態(tài)性與遺傳易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 2010年4月至2011年4月我院健康體檢者50例為對照組，男23例，女27例，年齡63～81歲，平均(68.2±11.5)歲。同期來我院行腦梗死治療的患者50例為腦梗死組，男29例，女21例，年齡61～79歲，平均(65.2±12.7)歲。所有病例符合全國第一屆腦血管病學(xué)術(shù)會議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)頭顱CT和磁共振成像(MRI)確診。排除心肝腎疾病、糖尿病、阿爾茨海默病、血管性癡呆及影響脂質(zhì)代謝的疾病患者。兩組年齡、性別等一般資料無顯著性差異(P>0.05)。

1.2模板DNA的提取 采用低滲溶血法制備白細(xì)胞基因組DNA。取EDTA-2Na抗凝血100 μl，采用改良碘化鈉法提取正常人及患者白細(xì)胞中的DNA。

1.3PCR擴增 引物序列為P1 ：5′-AACAACTGACCCCGGTFFCG- 3′，P2:5′-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3′。反應(yīng)體系包括5 μl的10×緩沖液, 200 μmol/ L的4× dNTPs，引物P1,P2各30 pmol，4 μl的二甲基亞砜(DMSO)，4 μl模板DNA。將其覆蓋30 μl的滅菌液體石蠟油，并置于DNA擴增儀中, 95℃預(yù)變性15 min后，取出冰浴，加Taq DNA聚合酶2 U, 10 000 r/ min離心30 s。按95℃ 1 min，75℃ 3 min，進(jìn)行5次循環(huán)。后按95℃ 1 min，65℃ 1 min，75℃ 1 min，循環(huán)20次周期。在于75℃ 延續(xù)循環(huán)10 min。產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢查擴增是否成功。

1.4ApoE基因片段酶切分型 采用內(nèi)切酶酶切擴增的PCR產(chǎn)物，在37℃下酶切4 h。酶切后在10%非變性聚丙酰胺凝膠進(jìn)行電泳、取膠、銀染。參照文獻(xiàn)〔2，3〕方法進(jìn)行ApoE基因型的判定。ApoE等位基因頻率計算參照公式PA =x/2n，其中PA：A等位基因的頻率，n：患者總數(shù)，x：A等位基因的數(shù)目。

1.5血脂指標(biāo)的測定 血清總膽固醇(TC)及甘油三酯(TG)采用酶法測定;低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)采用PVS分離沉淀酶法。

1.6統(tǒng)計學(xué)處理 經(jīng)SPSS15.0軟件進(jìn)行t檢驗和χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1兩組ApoE基因型頻率分布 腦梗死組ApoE基因型E3/3頻率低于對照組, E3/4明顯高于對照組(P均< 0.05)。見表1。

表1 兩組ApoE基因型頻率分布情況〔n=50，n(%)〕

2.2兩組ApoE等位基因型頻率分布 腦梗死組ApoE等位基因型頻率以E3最多，E4次之，E2最少，與對照組比較，腦梗死組E4等位基因的頻率明顯增加(P<0.05), E2,E3等位基因頻率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組ApoE等位基因型頻數(shù)分布(n=50,n)

2.3兩組ApoE基因型E3/3、E3/4中血脂水平 E3/3、E3/4基因型亞組，腦梗死組LDL-C水平都高于對照組(P< 0.05)；與E3/3基因型亞組比較，腦梗死和對照組E3/4的LDL-C水平較多(P< 0.05)。見表3。

表3 腦梗死和對照組ApoE基因型E3/3、E3/4中血脂水平±s, n=50,mmol/L)

3 討 論

AopE基因作為遺傳學(xué)中比較重要的一種基因，其與動脈粥樣硬化、冠心病等的發(fā)病存在一定的相關(guān)性，但在腦梗死的研究結(jié)果有所不同〔4〕。本研究結(jié)果提示ApoE E4基因在早期復(fù)發(fā)性腦梗死患者中存在較高的攜帶率，可以作為腦梗死的易感基因來影響患者腦梗死的復(fù)發(fā)。

ApoE對脂質(zhì)代謝的影響最早在ApoE2/2表型的高脂血癥患者中發(fā)現(xiàn)〔5～8〕，推測其可能的機制為ApoE基因E4編碼的E4異構(gòu)體與受體結(jié)合的活性明顯高于E3， 當(dāng)機體攝取含ApoE E4較多的脂蛋白，肝細(xì)胞內(nèi)總膽固醇水平有所上升，通過反饋調(diào)節(jié)，其可以下調(diào)肝細(xì)胞表面的LDL受體，導(dǎo)致LDL水平上升〔9〕。由于LDL占血清TC比例達(dá)65%以上〔10〕，因而血清TC也隨之升高，高TC便產(chǎn)生了。高TC是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的重要危險因素，而動脈粥樣硬化又是腦梗死的危險因素之一，因此E4等位基因有導(dǎo)致腦梗死的可能；本研究結(jié)果與上述結(jié)論一致。

綜上，ApoE E3/3基因型及E3等位基因可能是腦梗死的保護因素，E4等位基因可能是腦梗死的危險因素，但具體的機制及其在不同地區(qū)、種族間有無差異需進(jìn)一步研究。

4 參考文獻(xiàn)

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