鄒 迪 隋殿軍

(長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腎病科,吉林 長春 130021)

三苦滴丸是以三七、苦碟子為主研制成的滴丸制劑，其中選用苦碟子為主藥，該藥具有清熱解毒、消癰排膿、祛瘀止痛之功效；三七為輔藥，具有止血不留瘀、祛瘀通絡(luò)、活血定痛的功效，二藥配用，能活血化瘀、通絡(luò)止痛。三七及苦碟子單用對于心腦血管疾病均有顯著療效〔1～15〕，中藥有效組分配伍方劑三苦滴丸，是提取三七、苦碟子的有效部位，標(biāo)本兼治，共奏活血化瘀通絡(luò)止痛之功，兩藥配伍，可明顯增強(qiáng)其對心腦血管疾病的療效，本實(shí)驗(yàn)旨在探討三苦滴丸對心肌缺血模型大鼠心電圖、肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)、肌鈣蛋白的影響，為進(jìn)一步研究三苦滴丸抗心肌缺血的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物 健康Wistar大鼠100只，雌雄各半，體重(200±20)g，由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供，經(jīng)吉林省實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量檢測中心檢測合格；飼料為實(shí)驗(yàn)動物顆粒飼料，由長春市億斯實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心監(jiān)制。

1.2主要試劑 烏拉坦(氨基甲酸乙酯)，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司，生產(chǎn)批號20001121；鹽酸異丙腎上腺素，上海禾豐制藥有限公司，產(chǎn)品批號110401；三苦滴丸，長春中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥與生物工程研發(fā)中心；復(fù)方丹參滴丸，天津天士力制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號110516；0.9%氯化鈉注射液長春豪邦藥業(yè)有限公司；CK試劑盒，南京建成科技有限公司；肌鈣蛋白試劑盒，漢貝茵萊生物科技有限公司；CK-MB試劑盒，武漢貝茵萊生物科技有限公司。

1.3主要儀器 分析天平shamg pingMD100-1，上海天平儀器廠；生理記錄儀：BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司；心電圖儀:ECG-6511型上海光電醫(yī)用電子儀器有限公司；低速離心機(jī)：anke TDL-5-A上海安亭科學(xué)儀器廠；Alpha-1506P型紫外可見分光光度計上海譜元儀器有限公司；迪瑞全自動生化分析儀長春迪瑞實(shí)業(yè)有限公司。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1組別設(shè)計 實(shí)驗(yàn)用藥前各組大鼠先做心電圖檢查，棄去心律失常、ST段改變、T波異常的大鼠，將健康Wistar大鼠心電圖檢查合格者，按隨機(jī)數(shù)字表分成空白對照組、模型組、三苦滴丸治療組(灌服三苦滴丸自制劑)低、中、高劑量組、陽性對照組(灌服復(fù)方丹參滴丸)，每組10只。

1.4.2給藥方法 每日分別灌胃：空白組、模型組給予0.9%氯化鈉注射液10 ml/kg，陽性對照組給予復(fù)方丹參滴丸405 mg/kg灌胃(相當(dāng)于正常成人用量的30倍)，三苦滴丸高劑量組三苦滴丸1 600 mg/kg灌胃(質(zhì)量濃度為160 mg/ml，相當(dāng)于正常成人用量的40倍)，三苦滴丸中劑量組三苦滴丸800 mg/kg灌胃(質(zhì)量濃度為80 mg/ml，相當(dāng)于正常成人用量的20倍)，三苦滴丸低劑量組三苦滴丸400 mg/kg灌胃(質(zhì)量濃度為40 mg/ml，相當(dāng)于正常成人用量的10倍)，共給藥10 d。

1.4.3造模方法 每天分別灌胃：模型組、空白組：生理鹽水10 ml/kg；三苦滴丸高中低劑量組：三苦滴丸懸液高劑量、中劑量、低劑量；陽性對照組：復(fù)方丹參滴丸懸液405 mg/kg，連續(xù)灌胃10 d，連續(xù)腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素5 mg/kg，連續(xù)3 d。于第8、9天給予腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素(5 mg/kg)，空白組給予等容量生理鹽水，于第10天灌藥后30 min，各組大鼠分別以 10%烏拉坦(0.5 ml/100 g體重)麻醉，仰位固定，腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素(5 mg/kg)，空白組給予等容量的生理鹽水，模型成功的判斷指標(biāo):空白組與模型組心電圖進(jìn)行比較,觀察是否發(fā)生心肌缺血改變。判斷心肌缺血的心電圖標(biāo)準(zhǔn): ① ST段水平向下或向上偏移≥0.1 mv； ② T波高聳超過同導(dǎo)聯(lián)R波的1/2； ③ T波高聳伴ST段移位； ④出現(xiàn)異常Q波；⑤心動過速、期前收縮或其他心律失常；大鼠心電圖改變具備以上條件之一者即可判斷為心肌缺血陽性。陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)：① S-T 段斜形偏移，或水平偏移< 0 .1 mv ；② T 波低平或雙向倒置。以模型組大鼠心電圖ST段抬高≥ 0.1 mv為造模成功。

1.4.4觀察方法 連接心電圖機(jī)，走紙速度50 mm/s，標(biāo)準(zhǔn)電壓10 mm/mv，記錄腹腔注射鹽酸腎上腺素注射液前及記錄成模后即刻、5、10、20、30 min標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖變化，觀察各組大鼠心肌缺血發(fā)生率及ST段的改變。在造模成功2 h后腹主動脈取血，離心機(jī)3 000 r/min離心20 min，取血清1.5 ml，放入2 ml EP管中，存于-20℃冰箱備用，檢測時樣本解凍，樣本及試劑需要37℃預(yù)熱5 min，用全自動生化分析儀檢測肌鈣蛋白，CK、CK-MB，操作方法見試劑盒說明。

2 結(jié) 果

2.1三苦滴丸對心肌缺血模型大鼠心肌缺血發(fā)生率的影響 模型組大鼠心肌缺血發(fā)生率100%，說明造模成功，其余各組與模型組比較心肌缺血發(fā)生率降低，三苦滴丸給藥低劑量組大鼠心肌缺血發(fā)生率(60%)明顯低于丹參滴丸組(80%)；高、中劑量組大鼠心肌缺血發(fā)生率(均80%)與丹參滴丸組比較未見差異空白對照組為10%。

2.2三苦滴丸對急性心肌缺血模型大鼠心肌缺血程度的影響 各組大鼠心肌缺血程度(∑-ST)比較表明，腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素后即刻空白組、丹參滴丸組、三苦滴丸低、高劑量組ST段改善明顯，與模型組比較∑-ST變化有顯著性差異(P<0.05)，三苦滴丸中劑量組較模型組ST段雖有改善，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；三苦滴丸高、中、低劑量組與丹參滴丸組比較，低劑量組及高劑量組較丹參滴丸組效果稍好，中劑量組較丹參滴丸組效果稍差，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；給藥后5、10、20、30 min其余各組與模型組比較，ST段改善明顯(P<0.05)；其中低劑量組給藥后10、20、30 min較丹參滴丸組效果稍好，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 三苦滴丸對大鼠心肌缺血程度(∑-ST)的影響±s,n=10)

2.3三苦滴丸對心肌缺血大鼠血清心肌酶CK、CK-MB變化的影響 空白對照組、丹參滴丸組、SK中、高劑量組CK顯著降低，其變化與模型組比較差異顯著(P<0.01)；SK低劑量組CK變化與模型組比較差異顯著(P<0.05)；SK高劑量組可使CK減少，其均值小于丹參滴丸組，但與丹參滴丸組比較無顯著性差異(P>0.05)，低、中劑量組與丹參滴丸組比較差異無顯著性意義(P>0.05)。空白對照組、三苦滴丸低、中、高劑量組CK-MB顯著降低，其變化與模型組比較差異顯著(P<0.01)；丹參滴丸組CK-MB變化與模型組比較差異顯著(P<0.05)；三苦滴丸中、高劑量組可使CK-MB減少，與丹參滴丸組比較有非常顯著性差異(P<0.01)。見表2。

表2 三苦滴丸對心肌缺血大鼠CK、CK-MB水平的影響±s,n=10,U/L)

2.4三苦滴丸對心肌缺血大鼠血清肌鈣蛋白變化的影響 空白對照組(<1 ng/ml)、丹參滴丸組〔(46.60±5.97)ng/ml〕、SK低劑量組〔(51.90±5.46)ng/ml〕、SK中劑量組〔(42.40±6.25)ng/ml〕、SK高劑量組〔(23.60±3.56)ng/ml〕肌鈣蛋白Ⅰ顯著降低，其變化與模型組〔(63.30±15.44)ng/ml〕比較有顯著性差異(P<0.05)；與丹參滴丸組比較，造模2 h后，SK高劑量組可使肌鈣蛋白Ⅰ活性減少，有顯著性差異(P<0.05)，但低、中劑量組與丹參滴丸組比較差異無顯著性意義(P>0.05)。SK高劑量組與中、低劑量組之間有顯著性差異(P<0.05)。

3 討 論

心電圖是心臟興奮的發(fā)生、傳播及過程的客觀指標(biāo)，是反映心臟興奮的電活動過程，對心臟基本功能及其病理研究方面，具有重要的參考價值。故選取心電圖為造模成功與否的指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示三苦滴丸對于異丙腎上腺素所致的心肌缺血模型動物心肌缺血程度有改善作用，而且一定劑量的三苦滴丸可以降低異丙腎上腺素誘導(dǎo)模型動物心肌缺血的發(fā)生率。

心臟內(nèi)存在大量的酶類物質(zhì)完成心臟的正常生理功能，由于心肌缺血缺氧損傷和細(xì)胞膜通透性增高，使心肌內(nèi)含有的酶，如CK、CK-MB、乳酸脫氫酶(LDH)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)等大量釋放入血，致使血清中濃度升高。在病程不同階段，釋放入血的心肌酶的量與病程的長短和病變嚴(yán)重程度有關(guān)，檢測血循環(huán)中心肌生化標(biāo)志物的濃度，并觀察其動態(tài)變化有較大的診斷意義。CK及CK-MB的特異性和敏感性較高，已成為常規(guī)檢測項(xiàng)目。其他標(biāo)志物如AST、LDH等由于特異性差，目前已較少用于對心肌細(xì)胞損傷壞死的檢測。肌鈣蛋白是由結(jié)構(gòu)和功能各不同的3種亞單位(TnC、TnT、TnI)組成的蛋白復(fù)合物，主要參與心肌細(xì)胞收縮中Ca2+的激活調(diào)節(jié)過程。心肌細(xì)胞發(fā)生缺血、缺氧性損傷時，TnI釋放到血液。心肌Tn白是一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、發(fā)病后出現(xiàn)較早的心肌損傷診斷血清標(biāo)志物〔16〕。心肌TnI及T較傳統(tǒng)的CK及CK-MB更敏感、更可靠，心肌TnI陰性也可排除由于骨骼肌損傷導(dǎo)致的CK-MB升高。正逐步取代成為急性心肌梗死(AMI)的診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”?？梢?，心肌肌鈣蛋白的檢測是近年來心血管疾病研究領(lǐng)域中的一項(xiàng)重要進(jìn)展。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示三苦滴丸對心肌缺血模型大鼠心肌酶CK、CK-MB有改善作用，因此可減輕心肌損傷，其中三苦滴丸高劑量組效果稍好。另外，對心肌缺血模型大鼠心肌損傷有改善作用，且呈現(xiàn)量效關(guān)系，其中SK高劑量組作用最為明顯。

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