魏琳琳 王 蕊 關淑梅

(遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧 錦州 121001)

宮頸鱗癌生物學行為包括生長、浸潤、轉移，三者均是引起腫瘤患者死亡的重要原因。老年人宮頸鱗癌常常認為與人類乳頭瘤狀病毒感染關系不明顯，其與腫瘤基因和蛋白異常表達密切相關。細胞周期檢測點激酶(CHK)1和2是生物進化過程中非常保守的蛋白激酶，在DNA損傷引起的細胞周期檢測點調(diào)節(jié)中有非常重要的作用〔1,2〕。研究認為CHK1和2在正常組織中表達較低，而在細胞惡變的組織中表達較高，其異常表達可能與腫瘤進展有關〔3〕。DNA雙鏈斷裂修復蛋白(RAD)51是一種高度保守的主要在同源重組中發(fā)揮作用的DNA修復蛋白〔4〕，研究顯示其對促進細胞增殖有重要作用，同時可以降低化療療效，因此其可能是促進腫瘤進展的重要蛋白〔5〕。本文探討老年宮頸鱗癌患者癌組織中CHK1、2和RAD51的表達及相關性。

1 材料和方法

1.1臨床資料 2009年6月至2013年6月我院行宮頸鱗癌根治手術后留取的蠟塊組織及患者的臨床資料作為觀察組，均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)的診斷標準。共121例，年齡60～85(平均68.3)歲。選取子宮脫垂老年患者的宮頸組織，并經(jīng)病理回報為慢性宮頸炎組織70例作為對照組，年齡60～79(平均67.7)歲。兩組一般臨床資料無明顯差別(P>0.05)。

1.2免疫組化檢測CHK1、2和RAD51蛋白的表達 CHK1、2和RAD51蛋白濃縮液均購自武漢博士德生物工程公司，按不同比例進行預實驗，選擇最佳配比濃度。采用免疫組織化學技術SP法檢測組織中CHK1、2和RAD51蛋白表達，應用DAB進行顯色，操作嚴格按實驗步驟，并由同一主管技師完成，嚴格質(zhì)量控制。

1.3CHK1、2和RAD51蛋白檢測結果的判定方法 CHK1和2以細胞質(zhì)和(或)細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應細胞，RAD51以細胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應細胞，每張切片選擇10個400倍的高倍視野，取其陽性細胞的平均值，以陽性細胞≥25%為陽性，<25%為陰性。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SAS6.12軟件進行χ2檢驗和線性相關分析。

2 結 果

2.1兩組CHK1、2和RAD51表達陽性率比較 CHK1、2和RAD51在觀察組中表達陽性率明顯高于對照組(P<0.000 1)，見表1。

表1 兩組CHK1、2和RAD51蛋白表達陽性率比較〔n(%)〕

2.2觀察組中不同臨床特征患者CHK1、2和RAD51蛋白表達陽性率的比較 觀察組CHK1、2和RAD51表達在不同腫瘤最大徑、淋巴結轉移、脈管浸潤、累及宮頸管的深度和Ki67的表達中差別顯著(P<0.05)。見表2。

表2 觀察組中不同臨床特征患者CHK1、2和RAD51蛋白表達陽性率的比較〔n(%)〕

2.3觀察組CHK1、2和RAD51表達的相關性 觀察組CHK1和2(r=0.45,P=0.035 6)、CHK1和RAD51(r=0.43,P=0.041 9)、CHK2和RAD51(r=0.49,P=0.025 1)的表達均呈正相關。

3 討 論

子宮頸惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程與多基因和多蛋白的變化有關。老年人由于機體有退行性變化，常表現(xiàn)為萎縮性改變，因此基因和蛋白的變化引起的癌變是以此上皮為基礎，進而出現(xiàn)失控性增生和分化障礙后形成明顯的腫物。CHK1和2是一種進化上高度保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是G2/M檢測點活化的重要效應分子。CHK1和2可以通過上游的激酶分子而進行激活，此時CHK1和2通過磷酸化的作用阻止CDC25C對CDC2的去磷酸化作用，進而有效地阻止CDC2-cyclin B的激活，將細胞周期阻滯在G2/M期，供受損的DNA修復〔6,7〕。有觀點則認為在外界損傷因素的作用下，腫瘤細胞可以有效利用G2/M期檢測點的活化，有效地延長G2/M期，此期的作用是修復DNA使腫瘤獲得充足的耐藥性，因此如有實驗抑制CHK1和2的表達時，對逆轉腫瘤細胞耐藥將成為一種有效的治療手段〔8〕。RAD51基因是細胞在DNA修復過程中的重要成員，多種因素均可以使DNA受到損傷〔9,10〕。有觀點認為有兩種途徑參與DNA的雙鏈斷裂修復，其一是同源重組修復，其二是非同源末端連接修復。兩種過程的關鍵因素是同源的配對，在這個途徑中的關鍵催化酶則為RAD51。作為催化酶時，RAD51高表達，引起介導鏈配對和鏈交換作用的激活，使DNA的遺傳穩(wěn)定和多樣性得到有效的維持，同時也有助于腫瘤細胞的生長繁殖〔11,12〕。

本研究中結果提示CHK1、2和RAD51蛋白對腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有明顯的促進作用，即3種蛋白參與了腫瘤的形成過程，由于CHK1、2和RAD51高表達，因此3種蛋白的功能類似癌基因的作用，其實質(zhì)是3種蛋白調(diào)節(jié)了腫瘤細胞形成過程中的細胞增殖和信息傳遞，使腫瘤細胞的失控性增生和分化成熟障礙明顯增強〔13～15〕。本實驗結果提示CHK1、2和RAD51可能具有正向協(xié)同效應，即共同促進老年人宮頸鱗癌病變的進展，三者的協(xié)同作用與細胞增殖有關，也與其共同調(diào)節(jié)DNA修復作用有關，但是有關三者的具體通路作用尚有待更多實驗證實。本實驗結果提示CHK1、2和RAD51參與了腫瘤的生長過程、淋巴結播散、脈管浸潤和細胞的增殖。檢測三者可能對判斷預后有重要價值。目前也有學者關注CHK1、2和RAD51與化療的關系，認為CHK1、2和RAD51高表達時可以使同源重組的活性升高，因此有針對性地對化療藥物引起修復能力的改變，同時引起腫瘤細胞出現(xiàn)明顯的耐藥〔16〕。因此CHK1、2和RAD51在腫瘤中的作用可能是多元的，功能也是多樣的。

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