河北省邯鄲市食品藥品檢驗中心，河北 邯鄲 056002

HPLC法測定復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ中維生素C、B6的含量

劉艷麗

河北省邯鄲市食品藥品檢驗中心，河北 邯鄲 056002

目的建立測定復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ中維生素C、B6含量的高效液相色譜法。方法采用色譜柱：Sunfire C18(4.6mm×150mm，5μm)；流動相：0.04%戊烷磺酸鈉溶液(pH=2.5)-甲醇(85∶15)；流速：1.0ml·min-1；檢測波長：291 nm，柱溫：30℃。結(jié)果維生素C在0.1255mg·ml-1～3.7650 mg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9995)，平均回收率為99.3%，RSD為1.48%(n=9)；維生素B6在0.0106mg·ml-1～0.3180 mg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9992)，平均回收率為100.6%，RSD為0.90%(n=9)。結(jié)論該方法簡便、快捷，能更好地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。

復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ；維生素C；維生素B6；HPLC

復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ是一種降血脂藥，曾用名脈通膠囊， 由亞油酸、維生素B6、維生素C、維生素E、肌醇、大豆磷脂、甲基橙皮苷七種成分組成，用于治療和預(yù)防動脈粥樣硬化、降低血脂等癥。收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地標(biāo)升國標(biāo)第四冊[1]，但該標(biāo)準(zhǔn)對維生素C和維生素B6僅有簡單的理化定性鑒別方法，沒有制定含量定量測定方法。查閱文獻(xiàn)資料也沒有同時測定復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ中維生素C、B6的含量報道。本文摸索出適合同時測定復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ中維生素C、B6含量的高效液相方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜儀(美國)，Empower色譜工作站，waters 2498型紫外檢測器，XS105型電子天平(瑞士梅特勒)。戊烷磺酸鈉為分析純；甲醇為色譜純；水為一級純化水；其余試劑均為分析純。維生素C(批號:100425-200702)、維生素B6(批號:110116-200502)由中國藥品生物制品檢定所提供。復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ(批號：13040821，神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司；批號：120314，華北制藥康欣藥業(yè)有限公司；批號：120601，天津中央藥業(yè)有限公司；批號：130217，青島雙鯨藥業(yè)有限公司；批號：20130301，秦皇島百慧制藥廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Sunfire C18(4.6mm×150mm，5μm)；流動相：0.04%戊烷磺酸鈉溶液(pH=2.5)-甲醇(85 ∶15)；流速：1.0ml/min；檢測波長：291 nm，柱溫：30℃；進(jìn)樣量10μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 分別精密稱取維生素C對照品0.12550g與維生素B6對照品0.01060g，置100ml量瓶中，加0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(pH為2.5)適量，振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取20粒內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取約2g，置100ml量瓶中，加0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(pH2.5)適量，超聲20min使充分溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液[2、3]。

2.2.3 陰性樣品溶液 按處方比例制備不含維生素C、B6的陰性樣品，按“2.2.2”供試品溶液項下的方法制備陰性樣品溶液。

2.3 方法專屬性考察 分別精密量取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀。在上述色譜條件下，供試品溶液主峰的保留時間與對照品溶液主峰的保留時間一致，而陰性樣品在相同的保留時間內(nèi)無色譜峰，表明處方中其他成分對維生素C、B6的測定干擾不明顯，該方法專屬性強(qiáng)。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.2.1”項下的對照品溶液1、2、5、10、20、30μl，注入液相色譜儀進(jìn)行測定，以峰面積A對濃度C(mg·ml-1)進(jìn)行線性回歸，維生素C的回歸方程為A=2E+06C-26906(r=0.9995)，結(jié)果表明維生素C在0.1255～3.7650 mg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；維生素B6的回歸方程為A=4E+07C-204542(r=0.9992)，結(jié)果表明維生素B6在0.0106～0.3180 mg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密量取對照品溶液10μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，按上述色譜條件測定維生素C、B6的峰面積，RSD分別為0.2%、0.3%。

2.6 重復(fù)性試驗 取同一批樣品6份，按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣測定，計算樣品中含維生素C、B6的含量(mg.g-1)，其RSD為1.52%、1.04%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取對照品溶液按上述色譜條件分別于0、1、2、3、4、5、12、24h進(jìn)樣測定，維生素C、B6的峰面積的RSD分別為0.4%、0.7%，結(jié)果表明溶液在24h穩(wěn)定。

2.8 樣品測定 取5批復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ，按 “2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，按上述色譜條件，精密量取供試品溶液和對照品溶液各10μl進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法以峰面積計算含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果(n=5)

3 討論

3.1 波長的選擇 取一定濃度的維生素C、B6溶液于200～400nm波長處掃描，維生素C于242nm波長處有最大吸收，維生素B6于291nm波長處有最大吸收，然而處方中兩者所占比例為12.5∶1，如果選擇雙波長的話，在各自最大波長處測得的信號響應(yīng)值，維生素C的峰值遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于維生素B6的峰值，得不到滿意的圖譜，后采用291nm作為測定波長，結(jié)果滿意。

3.2 提取條件的選擇 復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ主要成分亞油酸為脂溶性成分，不易溶于水，而維生素C、維生素B6為水溶性成分，易溶于水，在酸性溶液中較穩(wěn)定，采用0.03mol/L磷酸二氫鈉溶液(pH2.5)超聲20min，加速兩者的充分溶解，易于提取完全。

[1]國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)(第4冊)[S]．2002：141-142．

[2]索志榮，鄭建斌，朱小紅．復(fù)方三維亞油酸膠丸Ⅰ中甲基橙皮苷和維生素C的HPLC分析[J]．藥物分析雜志，2005，25(9)：1012-1014．

[3]馮國．HPLC法測定二維亞鐵顆粒(Ⅱ)中維生素C、維生素B6含量[J]．中國藥師，2013，16(1)：84-86．

劉艷麗，女，副主任藥師，主要從事藥品檢驗。E-mail：liu_yl12345@sohu.com

R284.1

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1007-8517(2014)14-0008-02

2014.06.02)