禚銀玲 郭其森

肺癌是當(dāng)今世界上最常見的癌癥，每年約有100萬患者被診斷為肺癌，并且是癌癥相關(guān)死亡的主要原因[1]。非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）中約半數(shù)以上的患者在診斷時(shí)已屬晚期，因此化療是最主要的治療方案[2]。在臨床應(yīng)用中，鉑類聯(lián)合化療已經(jīng)成為NSCLC的標(biāo)準(zhǔn)化療方案，然而由于腫瘤耐藥的出現(xiàn)，使得絕大部分腫瘤很快出現(xiàn)復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移。從而限制了許多化療藥物例如紫杉醇、多西他賽和長(zhǎng)春瑞濱等微管結(jié)合藥物在NSCLC治療的臨床應(yīng)用[3,4]。

微管（microtubule）是構(gòu)成細(xì)胞骨架的主要成分，微管蛋白分為α、β兩個(gè)亞型，由α-tubulin和β-tubulin形成的異二聚體組裝成的多聚體，具有維持細(xì)胞形態(tài)，進(jìn)行物質(zhì)交換，傳遞信息，參與有絲分裂等重要功能[5,6]。NSCLC中βIII-tubulin表達(dá)與腫瘤的分化程度和分級(jí)有關(guān)，表達(dá)越高，腫瘤的分化越差、分級(jí)越高，并且腫瘤轉(zhuǎn)移潛力增加[7,8]。研究[9]發(fā)現(xiàn)NSCLC在腺癌組織中的βIII-tubulin表達(dá)水平較鱗癌和其它組織學(xué)類型高。

β-tubulin是抗微管藥物的主要細(xì)胞靶點(diǎn)。其中βIII-tubulin高表達(dá)NSCLC細(xì)胞株和卵巢癌細(xì)胞株的耐藥有關(guān)[10,11]。RNA干擾（RNA interference, RNAi）在探索基因功能、基因治療、病毒性疾病、傳染性疾病以及腫瘤的治療領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。與傳統(tǒng)反義核酸進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后基因沉默相比，能高效地特異性抑制目的基因。設(shè)計(jì)更簡(jiǎn)便、作用迅速、效果明顯，能根據(jù)不同病情，設(shè)計(jì)個(gè)體化治療方案。

本研究利用RNA干擾技術(shù)沉默人肺腺癌A549/Taxol細(xì)胞中βIII-tubulin基因的表達(dá)，探討靶基因下調(diào)后對(duì)化療藥物紫杉醇的敏感性的變化以及對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株及主要試劑 人肺腺癌耐紫杉醇A549細(xì)胞株（A549/Taxol）來自山東省腫瘤醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，A549/Taxol在0.2 μg/mL的Taxol中正常生長(zhǎng)。DMEM培養(yǎng)基（Hyclone公司），OPTI-MEM培養(yǎng)液（GIBCO公司），胎牛血清（杭州四季青生物制品公司）；βIII-tubulin siRNA序列（上海吉瑪公司）， PCR引物（上海生物工程公司）；RT-PCR試劑：Lipofectamine 2000、Trizol試劑（invitrogen公司）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒ScriptTMRT reagent kit以及SYBR Premix Ex TaqTM（Perfect Real Time）（TaKaRa公司）；Western blot試劑：βIII-tubulin鼠抗人單抗（Abcam公司），β-actin鼠抗人單抗（Amersham Biosciences公司），羊抗人二抗（中杉公司）；紫杉醇（paclitaxel）（四川太極制藥有限公司），-20oC凍存。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) 人肺腺癌A549/Taxol細(xì)胞株在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37oC、5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔天換液，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3 人工合成βIII-tubulin siRNA序列 根據(jù)Genebank βIII-tubulin mRNA序列和siRNA的設(shè)計(jì)原則，人工設(shè)計(jì)合成3對(duì)βIII-tubulin siRNA序列和1對(duì)陰性對(duì)照siRNA序列：βIII-tubulin siRNA sense 5’-UCUCUUCAGGCCUGACAAUTT-3’，antisense 5’-AUUGUCAGGCCUGAAGAGATT-3’；βIII-tubulinsiRNA sense 5’-GACCUCAACCACCUGGUAUTT-3’，antisense 5’-AUACCAGGUGGUUGAGGUCTT-3’；βIII-tubulin siRNA sense 5’-GCACGUUGCUCAUCAGCAATT-3’，antisense 5’ UUGCUGAUGAGCAACGUGCTT-3’；Negative control siRNA sense 5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’，antisense 5’-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3’。

1.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 采用陽性脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前一天將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A549/Taxol細(xì)胞接種于6孔板，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/mL，設(shè)siRNA組：（βIII-tubulin siRNA-1組、βIII-tubulin siRNA-2組、βIII-tubulin siRNA-3組）、陰性對(duì)照組（Negative control siRNA）、mock組（只含轉(zhuǎn)染試劑）和空白對(duì)照組（non-transfection）。將6孔板置于37oC、5%CO2孵箱中培養(yǎng)。次日，待細(xì)胞生長(zhǎng)至70%-80%融合時(shí)，按說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染5 h后更換為全培養(yǎng)液。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)βIII-tubulin mRNA表達(dá) 轉(zhuǎn)染48 h后TRIzol法提取細(xì)胞內(nèi)總RNA，參照TRIzol Reagent說明書分別提取6組細(xì)胞內(nèi)總RNA，檢測(cè)總RNA純度及濃度。反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，體系如下：5×Prime ScriptTMBuffer 2 μL，Prime ScriptTMRT Enzyme Mix I 0.5 μL，Oligo dT Primer （50 μM） 0.5 μL，Random 6 mers(100 μM) 0.5 μL，Total RNA 500 ng，Rnase free dH2O至10 μL。反應(yīng)條件：37oC 15 min，85oC 5 s。對(duì)各組細(xì)胞反轉(zhuǎn)錄合成的βIII-tubulin cDNA模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，β-actin為內(nèi)對(duì)照。引物序列如下：βIII-tubulin：Forward primer 5'-GGAGATCGTGCACATCCAG-3'，Reverse primer 5'-TCGATGCCATGCTCATCAC-3'；β-actin：Forward primer 5'-TGGCACCCAGCACAATGAA-3'，Reverse primer 5'-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3'。實(shí)時(shí)熒光qPCR反應(yīng)體系（50 μL）如下：SYBR? Premix Ex TaqTM（2×）25.0 μL，PCR Forward Primer（10 μM） 1.0 μL，PCR Reverse Primer（10 μM）1.0 μL，ROX Reference Dye（50×），1.0 μL，DNA模板4.0 μL，dH2O（滅菌蒸餾水）18.0 μL，Total 50.0 μL。擴(kuò)增反應(yīng)條件：95oC 10 s 1個(gè)循環(huán)，95oC 5 s 40個(gè)循環(huán)，60oC 31 s 40個(gè)循環(huán)。

擴(kuò)增結(jié)束后excell軟件分析計(jì)算Ct值、△Ct、△△Ct、2-△△Ct，△Ct=CtβIII-tubulin-Ctβ-actin，△△Ct=實(shí)驗(yàn)組△Ct-對(duì)照組△Ct，并計(jì)算βIII-tubulin mRNA含量。

1.6 Western blot檢測(cè)βIII-tubulin蛋白表達(dá) 用RT-PCR法篩選的有效βIII-tubulin siRNA-1序列6孔板轉(zhuǎn)染細(xì)胞，設(shè)對(duì)照組。48 h后，提取細(xì)胞總蛋白，測(cè)定總蛋白濃度，蛋白質(zhì)變性；電泳分離蛋白質(zhì)；轉(zhuǎn)膜將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF膜；4oC封閉過夜；加入βIII-tubulin鼠抗人一抗（1:2,000）、β-actin一抗（1:2,000），室溫孵育2 h，洗膜3次10 min/次；加入羊抗人二抗（1:2,000），室溫孵育2 h，T洗膜3次10 min/次；顯色；曝光；常規(guī)顯影定影；Bio2rad圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析。β-actin為內(nèi)對(duì)照。

1.7 MTT法檢測(cè)紫杉醇對(duì)A549/Taxol細(xì)胞的敏感性 轉(zhuǎn)染48 h后，收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，制成為1×105/mL的細(xì)胞懸液，接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100 μL，紫杉醇設(shè)6個(gè)濃度倍比稀釋等級(jí)，每濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔。待細(xì)胞貼壁后加入不同濃度Taxol（1.25 μg/mL、2.5 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、40.0 μg/mL）。于37oC、5%CO2孵箱中培養(yǎng)48 h；加入MTT溶液（5 mg/mL）每孔10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h；加10%SDS-HCL每孔100 μL；24 h后用Bio-rad 450型酶標(biāo)儀測(cè)各孔吸光度（A），檢測(cè)波長(zhǎng)為570 nm，參考波長(zhǎng)為630 nm。按下式計(jì)算各濃度條件下細(xì)胞抑制率（inhibitory rate, IR），IC=（1-實(shí)驗(yàn)組A值/對(duì)照組A值）×100%。Excell軟件繪制濃度效應(yīng)曲線，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡（Annexin V-FITC法） Taxol誘導(dǎo)處理細(xì)胞48 h后，制備細(xì)胞懸液，PBS溶液洗滌2次，1,000 rpm離心5 min，PBS溶液重懸細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/mL，按照Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒說明操作，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡率。

1.9 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期 Taxol誘導(dǎo)處理細(xì)胞48 h后，制備細(xì)胞懸液，PBS溶液洗滌，1,000 rpm離心5 min，PBS溶液重懸細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/mL，1,000 r離心5 min，棄去PBS，加入預(yù)冷70%乙醇固定，4oC過夜。加入碘化丙啶緩沖液500 μL/孔，4oC避光30 min，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以Mean±SD表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 βIII-tubulin siRNA轉(zhuǎn)染下調(diào)A549/Taxol細(xì)胞中βIII-tubulin mRNA表達(dá) 與NC siRNA組、mock、non-transfection組比較，βIII-tubulin siRNA-1、βIII-tubulin siRNA-2、βIII-tubulin siRNA-3組的mRNA表達(dá)水平均有不同程度的下調(diào)（P＜0.05），其中βIII-tubulin siRNA-1組的抑制率最高，為（87.73±4.87）%（P＜0.01）（圖1 ）。

2.2 βIII-tubulin siRNA轉(zhuǎn)染下調(diào)A549/Taxol細(xì)胞中βIII-tubulin蛋白表達(dá) Western blot結(jié)果顯示：βIII-tubulin siRNA組可見到分子量為51 kDa左右微弱的βIII-tubulin特異性條帶和β-actin條帶，其靶蛋白表達(dá)量較對(duì)照組明顯減少，而β-actin條帶與對(duì)照組基本一致。這與βIII-tubulin mRNA表達(dá)減少結(jié)果相一致（圖2）。

2.3 βIII-tubulin下調(diào)增加A549/Taxol細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性 MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，βIII-tubulin siRNA轉(zhuǎn)染A549/Taxol細(xì)胞后，紫杉醇對(duì)βIII-tubulin siRNA組的細(xì)胞抑制率明顯高于對(duì)照組（51.77±4.60）%（P＜0.01），且20 μg/mL時(shí)抑制率明顯（圖3）。

2.4 A549/Taxol細(xì)胞βIII-tubulin下調(diào)增加紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示紫杉醇作用后βIII-tubulin siRNA組細(xì)胞早期凋亡率較對(duì)照組明顯增加（P＜0.05），其中Taxol為20 μg/L最明顯，兩組的早期凋亡率分別為（40.12±3.86）%、（21.47±5.44）%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）（圖4）。

2.5 βIII-tubulin siRNA轉(zhuǎn)染后檢測(cè)紫杉醇對(duì)A549/Taxol細(xì)胞的細(xì)胞周期影響 細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示，紫杉醇處理細(xì)胞組的G2/M期細(xì)胞百分率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表明紫杉醇將細(xì)胞阻滯在G2/M期，可能與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)，且紫杉醇處理轉(zhuǎn)染組后細(xì)胞晚期凋亡率較對(duì)照組增加（圖5）。

圖 1 轉(zhuǎn)染后A549/Taxol細(xì)胞中βIII-tubulin mRNA含量。*：與對(duì)照組相比，P＜0.05；#：與βIII-tubulin siRNA-2、βIII-tubulin siRNA-3組相比，P＜0.05。βIII-tubulin siRNA-1組的抑制率最高（87.73±4.87）%，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。Fig 1 Expression of βIII-tubulin mRNA in A549/Taxol after transfection detected by qRT-PCR. *: compared with the control, P＜0.05； **: compared with the control, P＜0.01； #: compared with βIII-tubulin siRNA-2, βIII-tubulin siRNA-3, P＜0.05. βIII-tubulin siRNA-1 sequence showed the highest transfection efficiency, (87.73±4.87)%. The difference was statistically significant compared with control.

圖 2 Western blot檢測(cè)蛋白的βIII-tubulin表達(dá)。與對(duì)照組相比，βIII-tubulin siRNA-1組靶蛋白表達(dá)水平明顯減少。Fig 2 Expression of βIII-tubulin protein level detected by Western blot. Compared with the control group, protein expression of βIII-tubulin siRNA-1 after transfection was significantly reduced.

圖 3 MTT法檢測(cè)紫杉醇處理轉(zhuǎn)染組后細(xì)胞抑制率曲線。轉(zhuǎn)染組細(xì)胞抑制率較對(duì)照組增加（P＜0.01），且10 μg/mL、20 μg/mL時(shí)，抑制率最明顯（P＜0.01）。**P＜0.01, *P＜0.05。Fig 3 Inhibition ratio assays on βIII-tubulin siRNA induced by paclitaxel. The inhibition ratio of βIII-tubulin siRNA group was higher than that of control group (P＜0.05 ). And it has obviously increased with 10 μg/mL and 20 μg/mL (P＜0.01). **P＜0.01, *P＜0.05.

圖 4 紫杉醇誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染后A549/Taxol細(xì)胞的早期凋亡率。轉(zhuǎn)染組細(xì)胞早期凋亡率較對(duì)照組增加（P＜0.05）。且20 μg/mL時(shí)抑制率明顯（P＜0.01）。Fig 4 Apoptosis ratio induced by taxol on A549/Taxol transfected by βIII-tubulin siRNA. The early apoptosis rate of transfected group were higher than that of control group (P＜0.05). And it has the significantly increased in 20 μg/mL (P＜0.01). #P＜0.01, *P＜0.05.

圖 5 紫杉醇處理后各細(xì)胞組細(xì)胞周期分析。紫杉醇處理組G2-M期細(xì)胞比例較未處理組明顯增高（P＜0.05）。且βIII-tubulin siRNA+Taxol組細(xì)胞晚期凋亡率較對(duì)照組增加。Fig 5 Cell cycle assays of A549/Taxol on effect of taxol. G2-M content induced by paclitaxel is obviously increased than untreated samples. And the apoptosis rate of βIII-tubulin siRNA+Taxol group were higher than that of control group.

3 討論

腫瘤耐藥是影響肺癌患者化療療效的主要因素。影響NSCLC耐藥的因素主要有多藥耐藥（multi-drug resistant, MDR）基因、多藥耐藥相關(guān)蛋白（multi-drug resistant related protein, MRP）基因及它們產(chǎn)物表達(dá)的增加，以及拓?fù)洚悩?gòu)酶II（Topoisomerase II, Topo II）表達(dá)下降和谷胱甘肽（Glutathione, GSH）及谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（glutathione S-transferase, GST）系統(tǒng)表達(dá)增加。此外研究[12]表明，細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中相關(guān)因子的表達(dá)異常、腫瘤細(xì)胞DNA修復(fù)的異常及其他相關(guān)基因的表達(dá)異常與肺癌耐藥的產(chǎn)生也存在密切聯(lián)系。因此篩選有效的分子指標(biāo)，以預(yù)測(cè)患者對(duì)藥物的敏感性,可以更好的指導(dǎo)個(gè)體化治療、提高化療療效。

微管是細(xì)胞骨架的重要構(gòu)成成分，對(duì)維持細(xì)胞的空間結(jié)構(gòu)以及各種生理活動(dòng)都具有重要作用。微管是由α-tubulin和β-tubulin形成的異二聚體組裝成的多聚體，其中有6種β微管蛋白同型體，而βIII-tubulin與抗微管類化療藥物敏感性有最密切的關(guān)系[6]。當(dāng)可溶性微管蛋白水平增加后，β-tubulin mRNAs翻譯水平出現(xiàn)下調(diào)，機(jī)體通過自身調(diào)控機(jī)制調(diào)節(jié)β-tubulin同型體的表達(dá)[13,14]?？刮⒐艿鞍拙酆纤幬镉腥箢?，即秋水仙堿類、鬼臼素類和長(zhǎng)春花生物堿類（如長(zhǎng)春瑞濱）。而促進(jìn)微管聚合、抑制微管蛋白解聚的藥物目前有紫杉醇和多西紫杉醇兩類[15]。

β-tubulin是抗微管類藥物的主要靶點(diǎn)，分析β-tubulin同型體的表達(dá)確定藥物耐藥有關(guān)的具體靶蛋白是非常有必要的。研究[16,17]表明βIII-tubulin高表達(dá)與作用于微管的藥物有關(guān)，而與其他β-tubulin亞型沒有交叉作用。

研究[18.19]表明βIII-tubulin低表達(dá)的NSCLC患者經(jīng)紫杉類化療其療效及預(yù)后均優(yōu)于高表達(dá)者。Vilmar等[9]的研究認(rèn)為NSCLC中不同組織學(xué)類型其βIII-tubulin表達(dá)不同，腺癌的陽性表達(dá)率較鱗癌和其它組織學(xué)類型的陽性表達(dá)率高，βIII-tubulin-negative腺癌患者較βIII-tubulin-positive腺癌者PFS和OS延長(zhǎng)（P＜0.05），且其OS較βIII-tubulinnegative鱗癌或大細(xì)胞癌患者延長(zhǎng)（P＜0.05）。

許多臨床前研究[5,12,21]和臨床證據(jù)表明βIII-tubulin在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)上皮源性腫瘤包括NSCLC中βIII-tubulin表達(dá)異常與腫瘤分化能力、侵襲性密切相關(guān)，其高表達(dá)者表現(xiàn)為腫瘤低分化、惡性程度高、侵襲性增加等特點(diǎn)，且患者生存期短、預(yù)后差，故不僅是化療耐藥的標(biāo)記物也是NSCLC的獨(dú)立預(yù)后因子[20]。

許多臨床研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者術(shù)后腫瘤組織中βIII-tubulin陽性表達(dá)組的OS短于陰性表達(dá)組，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），證明βIII-tubulin可作為NSCLC術(shù)后的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因子，βIII-tubulin高表達(dá)可能是肺癌的預(yù)后因子。Rosell等[18]和王峻等[12]的研究顯示在NSCLC腫瘤組織中βIII-tubulin高表達(dá)對(duì)長(zhǎng)春堿類藥物敏感性低。Vilmar等[9]的研究認(rèn)為βIII-tubulin-negative的晚期肺腺癌患者較βIII-tubulin-positive腺癌者PFS和OS延長(zhǎng)（P＜0.05），并且化療后其OS較鱗癌或大細(xì)胞癌者延長(zhǎng)（P＜0.05）。以上研究表明βIII-tubulin高表達(dá)的患者預(yù)后差，PFS和OS短，而且高表達(dá)者對(duì)化療耐藥，可能與腫瘤的進(jìn)展有關(guān)。

本研究應(yīng)用βIII-tubulin siRNA轉(zhuǎn)染A549/Taxol細(xì)胞，并檢測(cè)βIII-tubulin基因和蛋白水平的表達(dá)情況，并檢測(cè)靶基因下調(diào)后對(duì)紫杉醇的敏感性的變化以及細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期情況。

結(jié)果顯示βIII-tubulin siRNA組的靶基因表達(dá)明顯下調(diào)（87.73±4.87）%（P＜0.01）；βIII-tubulin siRNA組的靶蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯減少，與βIII-tubulin mRNA表達(dá)下調(diào)相一致；紫杉醇處理后βIII-tubulin siRNA組的細(xì)胞抑制率較control組明顯增加（51.77±4.60）%（P＜0.01），表明下調(diào)βIII-tubulin基因表達(dá)明顯增加對(duì)紫杉醇的敏感性。細(xì)胞早期凋亡率較對(duì)照組明顯增加（P＜0.01），且20 μg/mL時(shí)明顯（40.12±3.86）% vs （21.47±5.44）%，提示下調(diào)βIII-tubulin后紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞早期凋亡率增加，抑制腫瘤增殖；紫杉醇誘導(dǎo)后βIII-tubulin siRNA組G2/M期細(xì)胞百分率明顯高于未處理組（P＜0.05），將細(xì)胞阻滯在G2/M期，抑制腫瘤細(xì)胞增生，可能與促進(jìn)細(xì)胞凋亡有關(guān)。且紫杉醇誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染組細(xì)胞晚期凋亡率較對(duì)照組增加，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，細(xì)胞早期凋亡率明顯增加。因此βIII-tubulin可能是在調(diào)節(jié)化療藥物反應(yīng)方面的一個(gè)重要的生存反應(yīng)因子。

Hasegawa等[22]利用反義寡核苷酸干擾A549/Taxol下調(diào)靶基因表達(dá)后細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性較對(duì)照組明顯增加（P＜0.05）。Gan等[16]利用siRNA干擾兩組肺癌細(xì)胞株NCI-H460和Calu-6，發(fā)現(xiàn)βIII-tubulin siRNA干擾細(xì)胞后I型、II型、IV型和總β-tubulin表達(dá)均較對(duì)照組無差異。而βIII-tubulin表達(dá)水平較對(duì)照組明顯減少。且兩組細(xì)胞對(duì)作用于微管的兩種化療藥物紫杉醇和長(zhǎng)春新堿的藥物敏感性較對(duì)照組明顯增加。細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組明顯增加。這與本研究結(jié)果相一致。證實(shí)了βIII-tubulin高表達(dá)對(duì)紫杉醇耐藥，相反低表達(dá)對(duì)紫杉醇敏感，通過增加細(xì)胞凋亡來抑制腫瘤增殖。

βIII-tubulin表達(dá)與紫杉醇敏感性有關(guān)，體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)低表達(dá)者療效及預(yù)后均優(yōu)于高表達(dá)者，提示βIII-tubulin有可能作為預(yù)測(cè)紫杉醇敏感性的一個(gè)指標(biāo)，有利于指導(dǎo)NSCLC的臨床個(gè)體化治療。