范小璇 頓寶生 強(qiáng)選平 趙曉平 逯 莉 陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院外四科（咸陽(yáng) 712000）

腦缺血發(fā)生后，常常導(dǎo)致患者學(xué)習(xí)記憶、肢體、語(yǔ)言等功能障礙，這些功能障礙的出現(xiàn)都是神經(jīng)元損害的結(jié)果。神經(jīng)元對(duì)缺血性損害的敏感性不一，凋亡與壞死并存，凋亡主要出現(xiàn)在缺血半暗帶，是遲發(fā)型神經(jīng)元損害的主要形式[1]。二根龍蛭湯是我們臨床總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)方，對(duì)缺血性中風(fēng)等疾病治療效果明顯，為了揭示其作用機(jī)制，進(jìn)行了本項(xiàng)研究，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 選用SD成年大鼠40只，體重200±50g，雌雄各半（由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK 2012-003）。隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、對(duì)照組和治療組，每組10只。對(duì)照組給予吡拉西坦片灌胃，治療組給予二根龍蛭湯（葛根、白茅根、地龍、水蛭、丹參、紅花、川芎）灌胃治療。

1.2 造 模 參考文獻(xiàn)[2－3]制作腦缺血模型。所有動(dòng)物購(gòu)回后適應(yīng)性喂養(yǎng)7d，術(shù)前12h禁飲食，自由飲水。稱重后用10%水合氯醛（3.5mL／kg）腹腔注射對(duì)大鼠麻醉，麻醉成功后將大鼠固定在鼠板上，頸部剃毛、皮膚消毒后，取正中切口，仔細(xì)分離右側(cè)頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈，用絲線結(jié)扎頸外動(dòng)脈，頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)端放置動(dòng)脈夾；將頭皮針端口打磨光滑，把頭端涂有石蠟油的尼龍漁線從頸外動(dòng)脈靠近分叉處導(dǎo)入血管內(nèi)，去掉動(dòng)脈夾，在直視下緩慢推進(jìn)漁線入顱，遇到阻力后停止，入顱約1.8cm；將頸內(nèi)動(dòng)脈連同漁線一起結(jié)扎，放開(kāi)頸外動(dòng)脈結(jié)扎線，縫合皮膚。假手術(shù)組只切開(kāi)頸部皮膚、暴露血管后縫合皮膚。

1.3 治 療 所有動(dòng)物術(shù)后給予紅霉素軟膏涂抹傷口，假手術(shù)組和模型組術(shù)后6h開(kāi)始給予進(jìn)食進(jìn)水，對(duì)照組術(shù)后6h給予進(jìn)食水的基礎(chǔ)上吡拉西坦片（由宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，按人與實(shí)驗(yàn)用鼠比為1∶10進(jìn)行換算后以3.6g／Kg·d劑量灌胃）灌胃進(jìn)行治療，治療組術(shù)后6h給予進(jìn)食水的基礎(chǔ)上給予二根龍蛭湯（由陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供，根據(jù)體重按人正常用量的10倍）濃縮煎劑灌胃治療。

1.4 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 大鼠購(gòu)回后第3d開(kāi)始進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，連續(xù)3d，術(shù)后第4d再次進(jìn)行訓(xùn)練3d，第7d進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。放置一直徑1.3m、深0.5m的圓形水池，池壁為白色，標(biāo)明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四個(gè)象限，在任何一象限內(nèi)放置一個(gè)直徑10cm、高25cm的安全平臺(tái)，水面沒(méi)過(guò)平臺(tái)5cm，水中注入適量奶粉，以目視看不見(jiàn)平臺(tái)為宜，水溫控制在25℃左右。記錄大鼠尋找到安全平臺(tái)時(shí)間，即逃避潛伏時(shí)間；再撤去平臺(tái)，選第Ⅱ象限入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，記錄90s內(nèi)大鼠跨越原平臺(tái)次數(shù)。

1.5 指標(biāo)測(cè)定 第7d水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，開(kāi)胸經(jīng)左心室穿刺，生理鹽水沖洗灌洗，見(jiàn)肝臟顏色發(fā)白后4%甲醛灌注固定，開(kāi)顱取腦，冠狀面冰凍后切片，片厚6um。按照Bax、Bcl-2免疫組化試劑盒說(shuō)明步驟進(jìn)行。在40倍顯微鏡下觀察陽(yáng)性標(biāo)記物標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)量，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果 本組實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，共死亡大鼠4只，其中模型組2只，治療組和對(duì)照組各1只。治療后第7d水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，Bax和Bcl-2實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 治療后7d水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

表2 治療后7dBax、Bcl-2結(jié)果比較

3 討 論 腦缺血屬于中醫(yī)“中風(fēng)”的范疇，《素問(wèn)·風(fēng)論》云：“風(fēng)者，百病之始也?！闭撔皩?shí)而中風(fēng)。清·喻昌在《尚論后篇·真中》云：“中風(fēng)之風(fēng)乃人身自有之風(fēng)，平素蘊(yùn)蓄，而一旦內(nèi)出者也?！薄把觥睘橹酗L(fēng)的病機(jī)關(guān)鍵，補(bǔ)陽(yáng)還五湯用于治療中風(fēng)病的臨床療效被廣泛認(rèn)可，故而，活血化瘀治療成為治療的主要大法。經(jīng)驗(yàn)方二根龍蛭湯由葛根、白茅根、地龍、水蛭、丹參、紅花、川芎七味藥組成。水蛭、地龍共為君藥，水蛭咸、苦、平而歸肝經(jīng)，破血、逐瘀、通經(jīng)，地龍咸、寒歸肝、脾膀胱經(jīng)，息風(fēng)通絡(luò)、利水，二藥共用使瘀血消散，閉阻之經(jīng)絡(luò)暢通；臣以丹參、紅花、川芎，丹參苦、寒，歸心、肝經(jīng)，具有活血調(diào)經(jīng)、涼血安神之功效，紅花心溫，歸心、肝經(jīng)，具有活血通經(jīng)、祛瘀止痛之功效，二者相須為用，功專于化瘀，再加活血行氣、祛風(fēng)止痛之川芎，能上行頭目，旁通絡(luò)脈，使瘀血去、經(jīng)脈通，頭痛止，意識(shí)清；佐以葛根，甘辛涼，解肌退熱，擴(kuò)管通脈，使藥白茅根甘、寒，涼血止血，清熱利水，使熱散而血止，濕滲則水利；全方共奏化瘀通絡(luò)利水之效。

本項(xiàng)研究結(jié)果顯示，模型組大鼠逃避潛伏期時(shí)間較假手術(shù)組明顯延長(zhǎng)，說(shuō)明造模成功，二根龍蛭湯治療后，腦缺血大鼠逃避潛伏期較模型組縮短，跨越平臺(tái)次數(shù)增加，說(shuō)明二根龍蛭湯有改善腦缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的作用。研究表明，Bcl-2具有明顯的抗細(xì)胞凋亡和延長(zhǎng)細(xì)胞壽命的作用[4]，Bcl-2蛋白家族是細(xì)胞凋亡調(diào)控蛋白，Bcl-2／Bax基因是目前研究較為明確的一對(duì)在功能上相互對(duì)立的凋亡調(diào)控基因[5]。本研究表明，二根龍蛭湯能抑制腦缺血模型大鼠Bax的升高，促進(jìn)Bcl-2的升高，說(shuō)明二根龍蛭湯能減輕腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，從而減輕神經(jīng)功能的損害。

總之，二根龍蛭湯對(duì)腦缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶能力具有明顯的改善作用，可能是通過(guò)減輕神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

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