劉東聲

江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團(tuán)宿遷市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 江蘇 宿遷 223800

Caspase 9基因單核苷酸多態(tài)性與腫瘤易感性的關(guān)系分析

劉東聲

江蘇省南京鼓樓醫(yī)院集團(tuán)宿遷市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 江蘇 宿遷 223800

目的：分析對(duì)于細(xì)胞生長和凋亡的調(diào)節(jié)具重大意義的Caspase(天冬氨酸蛋白酶)家族基因中Caspase 9的基因的編碼cSNP多態(tài)性以及探討其基因位點(diǎn)突變與腫瘤發(fā)生的關(guān)系。方法收集我院在2012年1月～2013年1月間行健康體檢23人抽血樣本和同時(shí)期診治的各類癌癥病人23個(gè)血液樣本，并提取Caspase 9基因DNA，通過PCR使基因大量地?cái)U(kuò)增，將基因分為健康組(基因來自健康人群)和觀察組(基因源于癌癥病人)，采用微點(diǎn)陣對(duì)比分析兩組Caspase 9基因的cSNP位點(diǎn)的差異情況。結(jié)果由分析結(jié)果知，組間rs2308938以及rs2308941兩位點(diǎn)的基因型頻率(GF)與等位基因頻率(AF)具顯著差異(P<0.05)，與文獻(xiàn)的結(jié)果相符合。結(jié)論rs2308938以及rs2308941作為編碼區(qū)基因的兩個(gè)關(guān)鍵的位點(diǎn)，其GF和AF對(duì)于腫瘤的發(fā)生具有重要的作用，與健康基因相比，其突變率越高，則越易導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。

Caspase 9；多態(tài)性；腫瘤易感；分析

本文通過設(shè)計(jì)SNP探針，采用微點(diǎn)陣分析比較健康人與腫瘤患者Caspase 9基因中的不同位點(diǎn)的GF和AF差異，來討論cSNP的GF和AF對(duì)腫瘤發(fā)生的意義，具體如下。

1 資料和方法

1.1 基本資料 收集我院行健康體檢和同期診治的癌癥病人各23個(gè)血樣并分成健康組和穿插組兩組，從中提取基因組DNA作為模板，使其大量擴(kuò)增并作標(biāo)記。健康組中，有男女分別15人和8人，年齡(59.13±15.43)歲，漢族，經(jīng)檢查身體健康，并無血液病、遺傳病和傳染病等；觀察組中，男女漢族患者分別有15人和8人，平均(61.34±16.21)歲，家族癌癥病史3例，患者均經(jīng)病理學(xué)及影像確診患有胃癌、肝癌、肺癌和結(jié)腸癌分別11人、7人、3人和2人(均為常見腫瘤)。比較組間的資料，發(fā)現(xiàn)兩組對(duì)象的性別比率、年齡和民族間不具影響研究的顯著的差別(P<0.05)，可行比較。

1.2 方法

1.2.1 基因提取 上午9時(shí)全部研究對(duì)象行3mL空腹抽血并分組編號(hào)，常規(guī)方式(酚-氯仿提取術(shù))抽提血樣中的G- DNA(基因組dna)。

1.2.2 SNP點(diǎn)陣、探針制作 點(diǎn)樣儀的點(diǎn)陣中應(yīng)囊括rs2308938、rs2308939、rs2308941、rs2308949以及rs2308950、rs2020897、rs1052571、rs1052574和rs1132310的 9個(gè)cSNP位點(diǎn)，并用不同濃度的GAGPH測(cè)試雜交效果。從Genbank中提取SNP位點(diǎn)基因信息，分別設(shè)計(jì)引物(Prime 5.0軟件)，由互補(bǔ)堿基配對(duì)的原則制成核酸探針，每個(gè)點(diǎn)可制成一對(duì)探針，將探針稀釋成同樣濃度，點(diǎn)于尼龍膜經(jīng)交聯(lián)固定，4℃存放待用。

1.2.3 探針雜交：①PCR：以提取DNA為模板，設(shè)計(jì)不同的引物在反應(yīng)體系下用梯度擴(kuò)增程序行PCR，每組各得到80bp～390bp的9個(gè)位點(diǎn)片段，并用地高辛(DVX)標(biāo)記；②將兩組的PCR片段分別與點(diǎn)陣中的探針先在45℃下行預(yù)雜交30min，后在45℃下雜交12h，后用DVX抗體檢測(cè)顯色。③顯色點(diǎn)陣經(jīng)軟件chip3.0分析得到GF和GA對(duì)比結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)表示成%，χ2檢驗(yàn)組間GF和AF，數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS14.0分析。

2 結(jié)果

表1和表2中，組間Caspase 9基因rs2308938和rs2308941位點(diǎn)中的GF和AF均差別明顯(P<0.05)。

表2 rs2308941位點(diǎn)的GF和AF情況比較

3 討論

cSNP即為編碼區(qū)域，其能通過編碼基因來調(diào)控蛋白表達(dá)過程，進(jìn)而影響生物體的各個(gè)方面，Caspase 9基因易發(fā)生缺失和突變，并參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控過程[1]。

本文利用點(diǎn)陣基因技術(shù)從分子水平對(duì)腫瘤患者和健康人群的Caspase 9基因的cSNP位點(diǎn)的GF和AF差別進(jìn)行了對(duì)比研究，結(jié)果表明，健康人群和腫瘤患者的Caspase 9基因中的rs2308938和rs2308941位點(diǎn)的GF和AF均差別明顯(P<0.05)，這個(gè)結(jié)果與文獻(xiàn)一致，分析原因知生物信息學(xué)為人們理解和認(rèn)識(shí)疾病的發(fā)生發(fā)展提供了一個(gè)全新的思維和角度。隨著時(shí)代的進(jìn)步，對(duì)于疾病的研究更加注重靶向性和深入性，長期以來，學(xué)者普遍認(rèn)為腫瘤的發(fā)生是一種人體細(xì)胞凋亡信號(hào)，原癌基因的激活由基因突變和環(huán)境因素共同決定[2]，本文的結(jié)果證實(shí)了腫瘤患者與正常人的基因間存在著顯著的差別性，GF和AF分布情況的差異說明其編碼和調(diào)控的效果必定截然不同，遺傳性腫瘤實(shí)質(zhì)上為基因缺陷導(dǎo)致，而調(diào)控基因的不斷變異和缺失顯然會(huì)對(duì)人體內(nèi)復(fù)雜的信號(hào)通路造成不良的影響，如何控制編碼基因是今后抗癌的關(guān)鍵。而同時(shí)本研究也表現(xiàn)了點(diǎn)陣檢測(cè)的可行性和高效性，此檢測(cè)技術(shù)值得發(fā)展和廣泛應(yīng)用。

綜上，rs2308938以及rs2308941作為編碼區(qū)基因的兩個(gè)關(guān)鍵的位點(diǎn)，其GF和AF對(duì)于腫瘤的發(fā)生具有重要的作用，與健康基因相比，其突變率越高，則越易導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。

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1009-6019(2014)08-0232-02