張狀

·論著·

阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織超氧化物歧化酶的影響

張狀

目的 探討阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響。方法 選用健康Sprague-Dawley(SD)大鼠, 隨機(jī)分為阿托伐他汀預(yù)處理組、單純?nèi)毖M和假手術(shù)組。阿托伐他汀預(yù)處理組于術(shù)前15 d灌胃阿托伐他汀, 6 mg/(kg·d), 然后制備大鼠局灶性腦缺血模型, 缺血后24 h行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、化學(xué)比色法測(cè)定腦組織勻漿中SOD活性。結(jié)果 與假手術(shù)組比較, 局灶性腦缺血24 h, 腦組織SOD活性明顯下降(P＜0.05)。與單純?nèi)毖M比較, 阿托伐他汀預(yù)處理組明顯降低神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分(P＜0.05), 提高腦組織勻漿SOD活性(P＜0.05)。結(jié)論 阿托伐他汀可以改善局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分, 提高腦組織SOD活性, 增強(qiáng)氧自由基清除作用, 具有神經(jīng)保護(hù)作用。

阿托伐他??；局灶性腦缺血；超氧化物歧化酶

缺血性腦損傷是多種因素、多種機(jī)制共同參與的級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程, 興奮性氨基酸毒性、鈣超載、自由基反應(yīng)、炎癥和細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致缺血性腦損傷的重要環(huán)節(jié)［1］。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)是體內(nèi)主要的抗氧化酶之一, 它能催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng), 清除超氧陰離子自由基, 具有阻斷自由基的毒性作用［2］, 保護(hù)細(xì)胞免受損傷［2］。腦缺血時(shí)體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除自由基的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)遭到破壞, 使得SOD減少, 清除自由基能力下降,氧自由基蓄積, 可導(dǎo)致神經(jīng)元興奮、潰變、死亡, 產(chǎn)生興奮性毒性, 造成廣泛的腦組織病理性損害［3］。本研究從氧自由基的角度來(lái)探討阿托伐他汀對(duì)缺血性腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制, 為臨床尋找新的腦保護(hù)藥物提供一條途徑。

1 材料與方法

1.1 材料 選用健康SD 大鼠36只, 雌雄各半, 體重

180～240 g(遼寧醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。許可證號(hào)：SCXK(遼)200320007。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物級(jí)別:普通級(jí)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品和試劑 阿托伐他?。狠x瑞制藥有限公司,規(guī)格20 mg；SOD試劑盒：南京建成生物工程研究所提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組 36只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、單純?nèi)毖M、阿托伐他汀預(yù)處理組, 每組12只大鼠。阿托伐他汀預(yù)處理組于術(shù)前灌胃阿托伐他汀, 6 mg/(kg·d), 共15 d, 假手術(shù)組和單純?nèi)毖M分別予以等量生理鹽水, 療程和給藥方法相同。制備大鼠局灶性腦缺血模型, 每組12只大鼠于缺血后24 h進(jìn)行取材。

1.4 SD大鼠局灶性腦缺血模型(MCAO)的制備 大鼠局灶性腦缺血模型［4］(middle cerbral artery occlusion, MCAO)手術(shù)前12 h禁食不禁水。選用標(biāo)準(zhǔn)大鼠麻醉劑量, 以10%水合氯醛3 ml/kg, 經(jīng)腹腔麻醉, 仰臥固定于手術(shù)臺(tái)上, 頸部正中切開(kāi)皮膚及淺筋膜, 鈍性分離胸鎖乳突肌與胸骨舌骨肌, 暴露左側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)和迷走神經(jīng), 頸外動(dòng)脈(ECA), 頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA), ICA的顱外分支——翼腭動(dòng)脈, 在近心端結(jié)扎CCA,在頸總動(dòng)脈分叉處結(jié)扎ECA, 結(jié)扎翼腭動(dòng)脈。將ICA遠(yuǎn)心端用動(dòng)脈夾夾閉, 距頸總動(dòng)脈分叉處近心端0.5 cm處將頸總動(dòng)脈剪一小口, 插入備好的碳素魚線, 去除動(dòng)脈夾, 沿著ICA輕輕向前推進(jìn), 注意不要誤入翼腭動(dòng)脈, 當(dāng)?shù)竭_(dá)指定長(zhǎng)度(18 mm左右)時(shí)結(jié)扎ICA并固定魚線。假手術(shù)組動(dòng)物, 除手術(shù)過(guò)程中不插入線栓以外, 其他過(guò)程相同。以青霉素局部消毒后縫合皮膚。術(shù)后保持環(huán)境溫度在25～30℃左右。尤其要注意動(dòng)物頭部的保溫。模型成功的標(biāo)志是大鼠即刻出現(xiàn)右側(cè)Horner征。

1.5 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分 參考經(jīng)典的Zea Longa［5］法對(duì)大鼠在MCAO術(shù)后清醒后到24 h進(jìn)行3次神經(jīng)功能評(píng)分, 取平均值。見(jiàn)表1。

表1 神經(jīng)功能缺失評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1.6 化學(xué)比色法測(cè)定腦組織勻漿中SOD活力 MCAO術(shù)后, 在固定時(shí)間點(diǎn)分別將大鼠各以10%水合氯醛經(jīng)灌胃深度麻醉后置于解剖臺(tái)上, 斷頭, 冰盤上經(jīng)枕骨大孔開(kāi)顱取出腦組織, 用冷生理鹽水沖洗除去血液, 濾紙拭干, 切取左側(cè)大腦頂葉皮質(zhì)約100 mg, 經(jīng)電子天平稱重后放入勻漿器中, 按W/V=1/9的比例加入預(yù)冷的生理鹽水冰浴下勻漿, 制備10%的腦組織勻漿, 3500 r/min低溫離心, 15 min, 取上清液, 冰箱-20℃保存?zhèn)溆? 嚴(yán)格按SOD試劑盒(黃嘌呤氧化酶法)檢測(cè)腦組織勻漿SOD活力。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)等統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分的影響 與假手術(shù)組相比, 單純?nèi)毖M大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀顯著增加(P＜0.05)；阿托伐他汀組神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分顯著低于單純?nèi)毖M(P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分的影響( x-±s, n=6)

2.2 阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦組織勻漿SOD活力的影響 與假手術(shù)組相比, 單純?nèi)毖M大鼠腦組織勻漿SOD活力降低(P＜0.05)；與單純?nèi)毖M相比, 阿托伐他汀大鼠腦組織勻漿SOD活力升高(P＜0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 阿托伐他汀對(duì)局灶性腦缺血大鼠缺血側(cè)腦組織勻漿SOD活力(U/mg prot)的影響( x-±s, n=6)

3 討論

細(xì)胞內(nèi)的鈣超載和氧自由基損傷在缺血性腦損傷發(fā)病機(jī)理中占有重要地位［6］。在腦缺血時(shí), 細(xì)胞膜去極化, 激活電壓依賴性的鈣通道(VDCCs), 大量Ca2+內(nèi)流, 胞漿Ca2+濃度異常升高, 細(xì)胞內(nèi)Ca2+超載通過(guò)三個(gè)方面引起自由基的大量產(chǎn)生, 即磷脂酶途徑［7］、黃嘌呤氧化酶途徑［8］和一氧化氮合酶途徑［9］, 使血清自由基產(chǎn)物增加［10］。

本研究觀察了阿托伐他汀［6 mg/(kg·d)］對(duì)局灶性腦缺血24 h大鼠神經(jīng)行為學(xué), 腦組織SOD活力的影響。結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較, 單純?nèi)毖M大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀顯著增加 (P＜0.05), 阿托伐他汀預(yù)處理組的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分低于單純?nèi)毖M(P＜0.05), 表明阿托伐他汀可明顯改善腦缺血后神經(jīng)功能缺損癥狀。缺血24 h大鼠腦組織勻漿SOD活力降低 (P＜0.05)；與單純?nèi)毖M相比, 阿托伐他汀大鼠腦組織勻漿SOD活力升高 (P＜0.05)。表明阿托伐他汀能改善神經(jīng)缺損癥狀, 對(duì)腦缺血大鼠具有神經(jīng)保護(hù)作用, 其機(jī)制可能與增加大鼠腦組織SOD活力, 減輕腦缺血時(shí)氧自由基的毒性有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)從阿托伐他汀通過(guò)改善局灶性腦缺血大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分及降低氧自由基損傷的角度研究阿托伐他汀的神經(jīng)保護(hù)作用, 為臨床應(yīng)用阿托伐他汀提供了理論依據(jù)。

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Effect of atorvastatin on brain tissue superoxide dismutase of focal cerebral ischemia rats

ZHANG Zhuang.
Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Liaoning Medical College, Jinzhou 121001, China

Objective To explore the eff ect of atorvast atin calcium on brain tissue superoxide dismutase(SOD) of focal cerebral ischemia rats.Methods He althy Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into atorvastatin pretreatment group, pure ischemia group and sham-operated group.Atorvastatin pretreatment group was treated by atorvas tatin calcium at a dos e of 6 m g/(kg·d) 15 days before the oper ation.made the focal cerebral ischemia model.24 h after ischemia, neurobehavioral scores and chemical colorimetric method were used to detect SOD activity in brain tis sue homogenate.Results Com pared with sham-operated group, 24 h after focal cerebral ischemia, SOD activity declined.Compared with pure ischemia group, the neurobehavioral scores declined(P＜0.05), SOD activity in brain tis sue homogenate in atorvas tatin pretreatment group improved(P＜0.05).Conclusion Atorvas tatin can improve neurobehavioral scores in the focal cerebral ischemia rats, increase SOD activity in brain tissue and scavenging effects of oxygen free radical atorvastatin has neuroprotective effect against focal cerebral ischemia in rats.

Atorvastatin; Focal cerebral ischemia; Superoxide dismutase

2014-04-24］

121001 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科