邱 鋼, 朱 暢, 劉小春

(廣東省深圳市龍崗區(qū)第三人民醫(yī)院, 1.普外科; 3.胃鏡室, 廣東 深圳, 518115;2.廣東省深圳市第一人民醫(yī)院 胃腸外科, 廣東 深圳, 518020)

胃癌是全世界最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，大部分的胃癌患者確診時(shí)都屬于中晚期。研究[1]結(jié)果表明，基因的多態(tài)性與胃癌的發(fā)生有著密切的關(guān)系。利用飛行時(shí)間質(zhì)譜基因分型系統(tǒng)(MassARRAY Assay)高通量技術(shù)，選取新的與胃癌有相關(guān)性的若干易感基因位點(diǎn)，對(duì)大樣本人群進(jìn)行胃癌相關(guān)基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)研究，有助于發(fā)現(xiàn)調(diào)控胃癌癌變的關(guān)鍵機(jī)制和主要靶點(diǎn)，更好地解釋基因位點(diǎn)突變與胃癌易感性之間的關(guān)系[2], 為胃癌的早期篩查、診斷、制定個(gè)體化治療方案、判斷治療效果等提供依據(jù)。本研究主要探討了單核苷酸多態(tài)性與胃癌易感性的相關(guān)性，旨在為胃癌的發(fā)病機(jī)制及臨床診治提供一定的參考依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析了2009年12月—2013年12月入住兩院的120例胃癌患者的臨床資料，其中男67例，女53例；年齡32～76歲，平均(58.71±5.99)歲；另外選擇同期在本院進(jìn)行體檢的健康者112名作為對(duì)照組，其中男60例，女52例；年齡30～73歲，平均(55.20±5.07)歲。80例病例相應(yīng)蠟塊均源自手術(shù)切除且經(jīng)WHO病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)為胃癌組織，其中乳頭狀癌23例(28.75%), 管狀腺癌24例(30.00%), 黏液腺癌25例(31.25%), 印戎細(xì)胞癌8例(10.00%); 另外選擇24例癌旁正常黏膜組織作為對(duì)照。

1.2 方法

2組患者于空腹?fàn)顟B(tài)下取靜脈血，分別采集5 mL, 通過(guò)TAINGEN公司所提供的DNA提取試劑盒(DP304-03)對(duì)其加以提取，并將其保存于Buffer TE中，同時(shí)保證純化核酸OD260/OD280值的范圍為(1.8±0.1), 且將基因組的DNA水平保持在100～300 ng/L的范圍內(nèi)，然后注射EDTA抗凝劑，存儲(chǔ)于-20 ℃～80 ℃條件下，直至測(cè)序開始。然后對(duì)DNA的濃度進(jìn)行標(biāo)化, 2組患者采取EZH2 rs734004、rs734005、rs2072407、rs6464926及rs12670401多態(tài)性進(jìn)行測(cè)序，應(yīng)用組織芯片技術(shù)與免疫組化檢測(cè)80例同源胃癌組織與24例癌旁正常胃黏膜組織EZH2蛋白的表達(dá)情況[3]。

1.3 觀察指標(biāo)

比較患者組EZH2中rs12670401基因型CC與正常血樣中rs6464926基因型TT，胃癌患者中的EZH2包含的雜合基因型rs2072407TC、rs734004TC以及rs734004CG與正常血液中的雜合基因型之間的構(gòu)成比，分析基因型對(duì)胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)生的影響。

2 結(jié) 果

2.1 2組一般資料比較

2組在年齡、性別、吸煙史、癌癥家族史方面經(jīng)檢驗(yàn)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 見(jiàn)表1。

表1 2組一般資料比較[n(%)]

2.2 EZH2基因單核苷酸多態(tài)性與胃癌風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性分析

rs12670401最小等位基因C與rs6464926最小等位基因T增加，其胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較大(OR>1)，而其余三種多態(tài)性則會(huì)降低胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，見(jiàn)表2。

表2 EZH2基因單核苷酸多態(tài)性與胃癌風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性

2.3 各基因型在胃癌患者組與對(duì)照組的分布情況分析

經(jīng)Codominant模型、Dominant模型及Recessive模型分析，rs12670401CC與rs6464926CT構(gòu)成比顯著高于對(duì)照組，可增加胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(OR>1), 胃癌患者中雜合基因rs2072407TC、rs734005TC及rs734004CG構(gòu)成比均顯著低于對(duì)照組，可降低胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(OR<1), 見(jiàn)表3。

表3 各基因型在胃癌患者組與對(duì)照組的分布情況

3 討 論

胃癌是胃腸黏膜發(fā)生的惡性腫瘤。胃癌是一個(gè)全球性疾病，在癌癥相關(guān)死亡中位列第2位[4-5]，在中國(guó)是最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率均居各類惡性腫瘤首位。近年來(lái)，胃癌的發(fā)病具有明顯的年輕化趨勢(shì)。過(guò)去以40～60歲年齡組居多，現(xiàn)在則以35～55歲年齡組為多。19～35歲的青年患者有明顯增加，占到胃癌總數(shù)的6%～11%。年輕人不重視胃部不適，就診晚、發(fā)現(xiàn)晚，且其胃癌細(xì)胞分化較差，惡性程度較高，是年輕人胃癌治療效果不佳、生存時(shí)間較短、預(yù)后差的根本原因[6]。在中國(guó)，江蘇省、山東省、浙江省、上海市、遼寧省及福建省等沿江沿海地區(qū)為胃癌高發(fā)區(qū)，原因不明，有學(xué)者認(rèn)為可能與沿海環(huán)境和海產(chǎn)食物受致癌物污染有關(guān)[7]；但是還有西北地區(qū)(青海、寧夏、甘肅)發(fā)病率也高；另外，胃癌還有一定的家庭性聚集的傾向[8]?？梢?jiàn)胃癌的發(fā)病原因也是非常復(fù)雜的。其發(fā)生與其他腫瘤一樣，是多因素綜合作用的結(jié)果，其中既有環(huán)境因素的影響，特別是幽門螺桿菌(HP)感染、飲食因素和生活行為方式，亦有機(jī)體內(nèi)部因素的影響，包括遺傳因素、社會(huì)心理因素等[9]。事實(shí)上并非所有暴露于同一種環(huán)境因素的個(gè)體都會(huì)患胃癌，這說(shuō)明胃癌的發(fā)病除了與暴露于外界各種環(huán)境因素、生物因素持續(xù)作用有關(guān)，還與個(gè)體的遺傳易感性存在著非常密切的關(guān)系。這種遺傳易感性是由于個(gè)體在環(huán)境致癌因素及生物因素共同作用下表現(xiàn)出與腫瘤相關(guān)的易感基因發(fā)生了變異，最終導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生[10]。

單核苷酸多態(tài)性(SNP)是人類基因組中最常見(jiàn)的遺傳多態(tài)性，是一個(gè)可以比較好地反映個(gè)體遺傳差異的分子標(biāo)記，在人類基因組中密度最大、發(fā)生頻率較高，人體許多表型差異、對(duì)藥物或疾病的易感性等等都可能與SNP有關(guān)[11]。因此，SNP研究能作為一個(gè)強(qiáng)有力的工具，用于高危群體的發(fā)現(xiàn)、疾病相關(guān)基因的鑒定、藥物的設(shè)計(jì)和測(cè)試以及生物學(xué)的基礎(chǔ)研究等。SNP在基因組中分布相當(dāng)廣泛，近來(lái)的研究[12]表明在人類基因組中每300堿基對(duì)就出現(xiàn)一次。大量存在的SNP位點(diǎn)，使人們有機(jī)會(huì)發(fā)現(xiàn)與各種疾病，包括腫瘤相關(guān)的基因組突變；從實(shí)驗(yàn)操作來(lái)看，通過(guò)SNP發(fā)現(xiàn)疾病相關(guān)基因突變要比通過(guò)家系來(lái)得容易；有些SNP并不直接導(dǎo)致疾病基因的表達(dá)，但由于它與某些疾病基因相鄰，而成為重要的標(biāo)記，從中能夠發(fā)現(xiàn)各種復(fù)雜疾病的遺傳易感因素，從而可以尋找出人類各種與遺傳相關(guān)疾病的復(fù)雜的發(fā)病原因[13]。對(duì)確定高危人群、尋找疾病標(biāo)志物及個(gè)體化醫(yī)療方案的制定均有重要價(jià)值。

Yoon等[14]學(xué)者認(rèn)為EZH2rs6950683和rs3757441多態(tài)性與肺癌易感性有關(guān)，基因型AA(rs6950683)和基因型CC(rs3757441)可以降低韓國(guó)人群肺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，起保護(hù)作用(OR=0.71,P<0.007; OR=0.73,P<0.015)。作者發(fā)現(xiàn)，rs12670401最小等位基因C與rs6464926最小等位基因T增加，其胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較大；而其余三種多態(tài)性則會(huì)降低胃癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。此外，本研究結(jié)果還顯示，rs12670401CC與rs6464926TT構(gòu)成比顯著高于對(duì)照組，可增加胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)

(OR>1)，胃癌患者中雜合基因rs2072407TC、rs734005TC及rs734004CG構(gòu)成比均顯著低于對(duì)照組，可降低胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

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