王茉莉，朱建平，張 菁，龐文哲，郭 麗(.河北省藥品檢驗(yàn)研究院抗生素室，河北 石家莊 0500；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院藥品科，河北 石家莊 0500)

·論著·

HPLC法測(cè)定交沙霉素原料藥中主組分的含量

王茉莉1，朱建平1，張 菁1，龐文哲1，郭 麗2*
(1.河北省藥品檢驗(yàn)研究院抗生素室，河北 石家莊 050011；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院藥品科，河北 石家莊 050011)

目的建立高效液相色譜(high efficiency liquid chromatography，HPLC)法測(cè)定交沙霉素原料藥中主組分的含量。方法采用十八烷基鍵合硅膠柱(C18)為固定相，以高氯酸溶液(取高氯酸鈉-水合物119g，加水至1 000 mL，用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2.5)-乙腈(60∶40)為流動(dòng)相。柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為231nm，進(jìn)樣量為20μL。結(jié)果交沙霉素主組分在考察的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性范圍為0.125 5 ～0.878 5g/L(r=1.000 0)，平均回收率為99.7%。定量限為2.51ng，最低檢出限為0.84ng。結(jié)論HPLC可用于交沙霉素原料藥中主組分含量的測(cè)定，快速簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠，靈敏度高。

交沙霉素；色譜法，高壓液相；質(zhì)量控制

交沙霉素為一種大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，抗菌譜與紅霉素相似，本品適用于化膿性鏈球菌引起的咽炎及扁桃體炎，敏感菌所致的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎及口腔膿腫，肺炎支原體所致的肺炎，敏感細(xì)菌引起的皮膚軟組織感染，也可用于對(duì)青霉素、紅霉素耐藥的葡萄球菌感染。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素因組分較多，主組分的含量高低決定抗生素的性質(zhì)，因此，在使用過(guò)程中一般要控制其主組分的含量。筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-12]，建立了高效液相色譜(highefficiencyliquidchromatography，HPLC)法測(cè)定交沙霉素原料藥中主組分的含量。該方法方便，快捷，準(zhǔn)確可靠，能夠更好地控制交沙霉素產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與材料

Agilent1200高效液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)安捷倫公司，二極管陣列檢測(cè)器)。

交沙霉素標(biāo)準(zhǔn)品由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)130359-200301，1 006U/mg，含量93.0%(以吉他霉素標(biāo)定后)。吉他霉素標(biāo)準(zhǔn)品由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)10357-9901，吉他霉素A5含量40.2%。

交沙霉素樣品由藥廠提供。廣州白云山光華制藥股份有限公司，批號(hào)Y042Y01；杭州民生藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)Y037Y01；桂林南藥股份有限公司，批號(hào)Y025Y01；安斯泰來(lái)制藥(中國(guó))有限公司，批號(hào)R066-A001Y01-08051901；R066-A001Y01-08051902。高氯酸鈉-水合物、甲醇為分析純；乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱DiamonsilTMC18(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相高氯酸溶液(取高氯酸鈉-水合物119g，加水至1 000mL，用1mol/L的鹽酸調(diào)節(jié)pH值為2.5)-乙腈(60∶40)；檢測(cè)波長(zhǎng)231nm；柱溫40℃；進(jìn)樣量 20μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品貯備液：精密稱取交沙霉素標(biāo)準(zhǔn)品25mg，置25mL量瓶中，加甲醇5mL使溶解，再用50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液：精密量取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液5mL，置10mL量瓶中，用50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.3 樣品溶液：精密稱取本品25mg，置50mL量瓶中，加甲醇5mL使溶解，再用50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果主峰與相鄰色譜峰間的分離度>1.5，理論板數(shù)>10 000。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)圖譜見(jiàn)圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)圖譜(交沙霉素峰與相鄰峰的分離度為6.5)

1.相鄰雜質(zhì)峰；2.交沙霉素

Figure1HPLCchromatogramofsystemsuitabilitytest(Theresolutionfactorbetweenthepeaksofjosamycinandadjacentimpurityis6.5)

1.Adjacentimpurity；2.Josamycin

2.4 線性關(guān)系：分別精密量取交沙霉素標(biāo)準(zhǔn)品貯備液1.25、2.50、3.75、5、6.25、7.50、8.75mL，置于10mL量瓶中，用甲醇及50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果在0.125 5～0.878 5g/L范圍內(nèi)，供試品濃度與其峰面積呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y=26 962X+34.823 (r=1.000 0)。

2.5 專屬性考察：取本供試品溶液，分別經(jīng)酸、堿、氧化和高溫破壞后進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖2。結(jié)果顯示，各降解物之間及主成分峰與相鄰峰之間能有效分離，表明方法專屬性良好。

圖2 破壞試驗(yàn)的色譜圖

A.未破壞樣品;B.酸破壞;C.堿破壞;D.氧化破壞;E.熱破壞1～5、7～10.有關(guān)物質(zhì)；6.交沙霉素

Figure2Chromatogramsofdestructivetest

A.Undestroyed；B.Aciddestroy；C.Basedestroy；D.Oxidationdestroy；E.Heatdestroy1-5，7-10.Relatedsubstances； 6.Josamycin

2.6 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液， 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，其峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.2%，儀器精密度良好。取供試品溶液，室溫(20℃)條件下放置，分別在1.5、3.0、4.5、10h測(cè)定，所檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)未增加，主峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.4%，表明溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)：按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行配制5份溶液，照上述方法進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積。其主成份含量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.1%，方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取已知主組分含量的交沙霉素原料9份，分別精密加入近等量的交沙霉素標(biāo)準(zhǔn)品，照上述方法測(cè)定,測(cè)得回收率為99.7%。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7%。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 1 The results of recovery test (n=9)

RSD:relativestandarddeviation

2.9 定量限和檢測(cè)限：取逐級(jí)稀釋的交沙霉素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以信噪比S/N=10計(jì)算定量限，以信噪比S/N=3時(shí)計(jì)算最低檢測(cè)限。測(cè)得定量限為2.51ng，最低檢測(cè)限為0.84ng。

2.10 樣品測(cè)定：分別精密稱取5批交沙霉素樣品各25mg，置于50mL量瓶中，加甲醇5mL使溶解，再用50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算各樣品中交沙霉素主組分的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品的主組分測(cè)定結(jié)果Table 2 Determination of principal component of josamycin samples

RSD:relative standard deviation

3 討 論

3.1 標(biāo)定用標(biāo)準(zhǔn)品的選擇：Omura等[13]于1970年經(jīng)采用紅外光譜法、紫外光譜法和核磁共振法測(cè)定了交沙霉素的分子結(jié)構(gòu)及其理化特性，證明盡管兩者是由不同的菌種發(fā)酵所得，但交沙霉素與吉他霉素A3的分子結(jié)構(gòu)及其理化特性完全一致，因此交沙霉素即是吉他霉素A3[13]。我們將交沙霉素與吉他霉素A5的分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，交沙霉素的R1與吉他霉素A5的R1完全相同，即均為乙?；?，而R2所連取代基不同，即交沙霉素的R2為異戊酰基，吉他霉素A5的R2為正丁?；＜又簧趁顾乇燃顾刂皇窃趥?cè)鏈上多了一個(gè)甲基，因此可以認(rèn)為交沙霉素與吉他霉素A5紫外吸收響應(yīng)因子一致。所連取代基的微小差異并不會(huì)影響兩者的紫外響應(yīng)值，采用吉他霉素A5標(biāo)定交沙霉素完全可行。通過(guò)標(biāo)定得出交沙霉素標(biāo)準(zhǔn)品含量為93.0%。

3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：鑒于日本藥局方第十五改正書[14]在交沙霉素項(xiàng)下規(guī)定了其色譜純度的檢測(cè)波長(zhǎng)為231nm；交沙霉素紫外吸收光譜最大吸收λmax為230.5～230.6nm；用二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)所得的紫外吸收光譜圖，其在231nm波長(zhǎng)處的光學(xué)純度為99.99%。因此，選定231nm為其檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 柱溫的影響：日本藥局方第十五改正書[14]和進(jìn)口藥品注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)JX20020131[15]均規(guī)定柱溫為40℃。當(dāng)柱溫穩(wěn)定在40℃時(shí)，色譜峰的保留時(shí)間提前且各峰間分離度良好，峰型對(duì)稱性好，柱效較高。故選擇40℃柱溫。

3.4 溶劑的選擇：根據(jù)交沙霉素的溶解度性質(zhì)，其在甲醇、乙醇或乙醚中易溶，在丙酮中溶解，在水中極微溶解。故采用50%的甲醇溶液作為溶劑，且該溶劑對(duì)測(cè)定方法無(wú)干擾。

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(本文編輯：劉斯靜)

HPLCDETERMINATIONONPRINCIPALCOMPONRNTOFCRUDEDRUGJOSAMYCIN

WANGMoli1，ZHUJianping1，ZHANGJing1，PANGWenzhe1，GUOLi2*
(1.DepartmentofAntibiotics,HebeiInstituteforFoodandDrugControl，Shijiazhuang050011，China;2.DepartmentofPharmacy,theFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011,China)

ObjectiveAhighefficiencyliquidchromatographymethodwasestablishedforthedeterminationofprincipalcomponentcrudedrugjosamycin.MethodsAoctadecylbondedsilicacolumnwasusedasthestationaryphase,withthemobilephaseofmixtureofperchloricacidsolution-acetonitrile(60∶40)atthedetectionwavelengthof231nm.Thecolumntemperaturewas40℃andtheinjectionvolumewas20μL.ResultsTheprincipalcomponentofjosamycinshowedalinearrangewithin0.125 5-0.878 5g/L(r=1.000 0).Theaveragerecoverywas99.7%.Thequantitationanddetectionlimitswere2.51ngand0.84ng,respectively.ConclusionThemethodwasrapid,simple,accurate,sensitive,andsuitableforthedeterminationofprincipalcomponentincrudedrugjosamycin.

josamycin；chromatography,highpressureliquid；qualitycontrol

2014-01-24；

2014-03-05

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃(20120265)

王茉莉(1980-)，女，河北保定人，河北省藥品檢驗(yàn)研究院主管藥師，理學(xué)碩士，從事藥物分析與研究。

R927.2

A

1007-3205(2014)11-1300-04

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.11.018

*通訊作者