童永鑫，何宇新

(西華大學(xué)生物工程學(xué)院，四川 成都 610039)

體液是廣泛分布于機體細(xì)胞內(nèi)外的，由水和溶解于其中的電解質(zhì)、低分子有機化合物以及蛋白質(zhì)等組成，具有運輸物質(zhì)、調(diào)節(jié)酸堿平衡、維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能等多方面作用的電解質(zhì)混合溶液，因而體液正常的水、電解質(zhì)代謝與生命活動息息相關(guān)。水、電解質(zhì)的代謝紊亂與臨床醫(yī)學(xué)有密切而廣泛的聯(lián)系，它可作為病因引起許多疾病的發(fā)生，也可作為并發(fā)癥與許多疾病伴行。它可導(dǎo)致酸堿平衡紊亂、休克、心力衰竭，從而使原發(fā)疾病惡化甚至發(fā)生惡性循環(huán)，危及生命[1-2]。

復(fù)方氯化鈉注射液作為體液補充藥，在體液水、電解質(zhì)發(fā)生代謝紊亂的時候，能夠迅速通過靜脈輸液進行體內(nèi)水和電解質(zhì)的調(diào)整。對于大容量注射劑，中間產(chǎn)品和成品檢測過程中，迅速完成含量測定，既可以防止污染帶入外源性熱原，還可以大大提高生產(chǎn)效率和成品放行速度。《中國藥典》2010版中對于復(fù)方氯化鈉注射液中氯化鈣含量測定采用的絡(luò)合物滴定法繁瑣復(fù)雜，操作時間長。原子吸收光譜法因其操作方便、檢測迅速、重現(xiàn)性好、檢測限度低，而受到廣泛應(yīng)用。本研究旨在建立一種采用原子吸收光譜法測定鈣離子含量的方法，提高復(fù)方氯化鈉注射液中氯化鈣含量測定的效率。

1 實驗部分

1.1 材料與試劑

氧化鑭(La2O3，批號為F20110627)，高純試劑，純度為4N(99.99%)，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；氯化鈉(NaCl，批號為20121017)，江蘇省勤奮藥業(yè)有限公司；氯化鈣(CaCl2·2H2O，批號為20100101)，天津海光藥業(yè)有限公司；氯化鉀(KCl，批號為20120701)，注射級，自貢鴻鶴制藥有限責(zé)任公司；鹽酸，分析純，成都金山化學(xué)試劑有限公司；氫氧化鈉，藥用輔料級，批號為100920120602，湖南爾康制藥股份有限公司；蒸餾水，廣州屈臣氏食品飲料有限公司；乙二胺四乙酸二鈉，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；羥基萘酚藍，上海邁坤化學(xué)有限公司；復(fù)方氯化鈉注射液(批號為20121101)，自制。

1.2 儀器與設(shè)備

電子天平(型號XS205Du)，梅特勒托利多儀器(上海)設(shè)備有限公司；pH計(型號S20)，梅特勒托利多儀器(上海)設(shè)備有限公司；安捷倫AA240原子吸收光譜儀，安捷倫科技有限公司；鈣空心陰極燈，安捷倫科技有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗條件

燃?xì)忸愋停嚎諝?乙炔，空氣體積∶乙炔體積=13.5∶2.2；燈電流為10 mA；檢測波長為422.7 nm；狹縫寬度為0.5 nm。

1.3.2 溶液的配制[3-7]

1)氧化鑭溶液的配制：稱取29.32 g氧化鑭，用25 mL去離子水潤濕后，緩慢添加125 mL鹽酸使氧化鑭溶解，最后用蒸餾水稀釋定容至500 mL。

2)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：于50 mL的容量瓶中精密量取5 mL鈣單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 μg/mL)，用蒸餾水定容至刻度，即得標(biāo)準(zhǔn)溶液母液，質(zhì)量濃度為100 μg/mL。準(zhǔn)備6個100 mL的容量瓶，編號為0、1、2、3、4、5，分別往其中精密量取0.0、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液母液，再分別加入2 mL氧化鑭溶液，用蒸餾水定容至刻度，即得質(zhì)量濃度分別為0 、1、3、5、7、9 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3)陰性對照溶液的配制：根據(jù)處方比例稱取氯化鈉0.850 0 g，氯化鉀0.030 0 g，配制不含氯化鈣的樣品100 mL。移取上述溶液 5 mL于100 mL容量瓶中，再加入2 mL氧化鑭溶液，用蒸餾水定容至刻度，即得陰性對照溶液。按照此法，重復(fù)配制3個陰性對照溶液。

4)供試樣品的配制：移取復(fù)方氯化鈉注射液(批號20121101)5 mL于100 mL容量瓶中，加入2 mL氧化鑭溶液，用蒸餾水定容至刻度，即得供試樣品溶液。按照此法，重復(fù)配制3個供試樣品溶液。

5)羥基萘酚藍指示液的配制：精密稱取羥基萘酚藍0.5 g，用蒸餾水溶解，再加入2滴0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液，搖勻，即得。

6)乙二胺四乙酸二鈉滴定液的配制：稱取乙二胺四乙酸二鈉1.9 g于100 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解定容至刻度。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定[5]

采用原子吸收光譜法檢測樣品中的離子質(zhì)量濃度，要求標(biāo)準(zhǔn)曲線的最佳分析范圍的吸光度在0.1～0.6 之間，并且樣品檢測的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間段。通過稀釋或增加加樣量，使最終樣品檢測的吸光度值在0.3～0.4左右。

確定了系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的系列濃度后，將系列標(biāo)準(zhǔn)溶液按照原子吸收光譜法進行連續(xù)測定，以質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo)，對應(yīng)吸光度A為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終得到回歸方程和相關(guān)系數(shù)。要求相關(guān)系數(shù)R2≥0.999 0。

1.3.4 樣品中鈣含量的測定

按照原子吸收光譜法先測定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線和回歸方程。再進行樣品測定，系統(tǒng)自動按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程將吸光度值代入得到樣品中的鈣離子含量。

2 實驗結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

根據(jù)1.3.3的測定方法，得到鈣離子含量測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1 鈣離子質(zhì)量濃度與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖1可知，鈣離子含量測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為A= 0.067 4C+ 0.001 1，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 1，表明鈣離子質(zhì)量濃度在1～9 μg/mL之間，鈣離子質(zhì)量濃度與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

2 鈣離子含量檢測方法學(xué)考察

2.2.1 專屬性考察[6-8]

復(fù)方氯化鈉注射液是多電解質(zhì)的混合滅菌水溶液，需要考察處方中非鈣離子對鈣離子含量測定的影響。通過對比陰性對照溶液與供試溶液的吸光度值，計算陰性對照樣品的平均吸光度值占供試樣品溶液的平均吸光度值的百分比a，以a反映處方中非鈣離子對鈣離子含量測定的影響。檢測結(jié)果如表1所示。

表1 專屬性考察

由表1可知，陰性對照溶液的平均吸光度值占供試樣品溶液吸光度值的1.25%，即a=1.25%。說明處方中，非鈣離子成分對鈣離子含量的測定干擾小，說明該法測定鈣離子質(zhì)量濃度專屬性好。

2.2.2 耐用性考察[9]

根據(jù)《中華人民共和國藥典》藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則，需要考察系統(tǒng)測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的程度。原子吸收光譜法測定鈣離子的濃度，典型的變動因素有溶液的穩(wěn)定性、燃?xì)獗壤凸┰嚾芤旱臏囟龋虼?，從以?個方面，考察該方法的耐用性。

1)溶液穩(wěn)定性：按照供試溶液現(xiàn)用現(xiàn)配的原則，以及原子吸收光譜法含量測定迅速的特點，將溶液最長存放時間設(shè)定為3 h，考察3 h內(nèi)供試溶液的穩(wěn)定性。將配制好的供試溶液分別在存放時間為0、0.5、1、1.5、2、2.5、3 h后測定吸光度值。每個時間點重復(fù)測定3次，計算平均吸光度值，再計算7個時間段吸光度值的RSD值，要求RSD≤2%。結(jié)果如表2所示。

表2 溶液穩(wěn)定性考察

由表2可知，供試樣品3 h內(nèi)7次吸光度測定結(jié)果的RSD值為1.5%，小于2%，說明3 h內(nèi)測定樣品結(jié)果差異微小，供試樣品穩(wěn)定性好。

2)燃?xì)獗壤喝細(xì)馀c助燃?xì)庵刃∮诨瘜W(xué)計量比，火焰燃燒完全，氧化性強，不利于還原產(chǎn)物的形成，適用于鈣的測定。本火焰原子吸收光譜儀測定鈣默認(rèn)的助燃比為13.5∶2.0，為了考察在偏離設(shè)備默認(rèn)的助燃比的相對富燃焰對含量測定結(jié)果的影響，考察助燃比分別為13.5∶2.0、13.5∶2.2、13.5∶2.5條件下的吸光度值，每個助燃比平行測定3次，計算平均值，再計算3個助燃比條件下結(jié)果之間的RSD值，要求RSD≤2%。結(jié)果如表3所示。

表3 燃?xì)獗壤疾?/p>

由表3可知，3個助燃比條件下的平均吸光度值之間的RSD為1.25%，小于2%，說明鈣離子在助燃比分別為13.5∶2.0、13.5∶2.2、13.5∶2.5的條件下，測定結(jié)果無明顯差異。為了方便試驗，助燃比選取13.5∶2.0。

3)供試溶液溫度：供試溶液溫度會影響到提升量和霧化效率。為了考察供試溶液溫度(20～30 ℃)對含量測定結(jié)果的影響，將供試溶液分別放置在20、25、30 ℃的水浴鍋中保溫30 min后，按照原子吸收光度法測定供試樣品溶液Ca2+的含量。每個溫度條件下的樣品測定3次，計算每個溫度條件下的平均含量。計算3個溫度條件下平均含量之間的RSD。檢測結(jié)果如表4所示。

表4 溶液溫度考察

由表4可知，溶液溫度在20、25、30 ℃條件下，供試品Ca2+質(zhì)量濃度的RSD值為0.36%。說明溶液溫度在20～30 ℃之間，該測定方法能夠?qū)┰嚻返腃a2+質(zhì)量濃度進行準(zhǔn)確測定。

2.2.3 準(zhǔn)確度考察(回收率)[8]

按照成品藥液鈣離子含量的80%、100%、120%，配制供試品溶液。于12個100 mL容量瓶中分別移取2.5 mL復(fù)方氯化鈉注射液，再分別加入0.0、0.0、0.0、1.3、1.3、1.3、2.2、2.2、2.2、3.1、3.1、3.1 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液母液，最后分別加入2 mL氧化鑭溶液，用蒸餾水稀釋，定容至刻度。按照原子吸收光度法進行連續(xù)測定，每個樣品連續(xù)測定3次，分別計算各添加量下供試溶液含量的平均值。以標(biāo)準(zhǔn)母液添加量為0的樣品的Ca2+含量為本底值，計算3個添加量下供試溶液的回收率，要求回收率應(yīng)在98%～102%之間。結(jié)果如表5所示。

表5 回收率考察

由表5可知，3個添加量下供試溶液的回收率在98.42%～100.93%之間，說明該方法進行鈣離子含量的測定，回收率符合要求，準(zhǔn)確度好。

2.2.4 精密度考察

2.2.4.1 重復(fù)性[8]

重復(fù)配制6份供試樣品溶液，按照原子吸收光度法進行連續(xù)測定供試品溶液Ca2+的質(zhì)量濃度，每個樣品連續(xù)測定5次，計算每個樣品的平均質(zhì)量濃度，再計算6個溶液平均質(zhì)量濃度之間的RSD值，要求RSD值≤2%。結(jié)果如表6所示。

表6 重復(fù)性考察

由表6可知，6個溶液質(zhì)量濃度之間的RSD為0.96%，低于2%，說明該方法測定供試品溶液中Ca2+的含量重復(fù)性好。

2.2.4.2 中間精密度[9]附錄194-附錄195

由試驗操作人員A、B，分別于同一天配制3組平行供試樣品，按照原子吸收光度法進行連續(xù)測定供試品溶液Ca2+的含量，每個樣品測定5次，計算每個樣品的平均質(zhì)量濃度。再計算A、B兩人共6個平均質(zhì)量濃度之間的RSD值，要求RSD值≤2%。試驗人員A于第2天，再次配制3組平行供試樣品，測定供試樣品溶液Ca2+的含量，每個樣品測定3次，求得每個樣品的平均質(zhì)量濃度。再計算A第1天和第2天測得的6個平均濃度之間的RSD值，要求RSD值≤2%。結(jié)果如表7和表8所示。

表7 組間精密度

表8 日間精密度

由表7和表8可知，A、B兩名試驗操作人員測得的樣品質(zhì)量濃度之間的RSD值為0.62%，A操作人員兩天測得的樣品質(zhì)量濃度之間的RSD值為0.18%，均小于2%，說明采用該方法測定Ca2+的含量，中間精密度好。

2.2.5 檢測限[10]

按照原子吸收方法依次測定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，以質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程A=KC+b。然后連續(xù)測定空白溶液20次，計算20次含量測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差S。根據(jù)下列方程計算檢測限：

檢測限=3×S/K

(1)

結(jié)果顯示，線性回歸方程為y=0.089 2x+ 0.009 4，即K為0.089 2，連續(xù)20次含量測定的標(biāo)準(zhǔn)偏差S為0.000 244，因此該方法進行鈣離子含量的測定的檢測限為0.008 206 μg/mL。

2.3 樣品中氯化鈣含量的測定

分別采用原子吸收光譜法和藥典方法—絡(luò)合滴定法進行復(fù)方氯化鈉注射液中鈣離子含量測定，再計算2種方法含量測定結(jié)果之間的RSD值，要求RSD值≤2%。

2.3.1 原子吸收光譜法

按照供試樣品的配制方法，平行配制供試樣品3個，按照原子吸收方法測定Ca2+的質(zhì)量濃度C，每個樣品測定3次，計算每個樣品平均質(zhì)量濃度。樣品中CaCl2·2H2O的含量是測定出鈣離子質(zhì)量濃度后，按照下列方程式計算而得：

C(CaCl2·2H2O)=C(Ca2+)×3.676

(2)

2.3.2 絡(luò)合滴定法[9]590

分別量取復(fù)方氯化鈉注射液(批號20121101)100 mL，置于3個編號為1、2、3的200 mL錐形瓶中。分別加入1 mol/L氫氧化鈉溶液15 mL和羥基萘酚藍指示液3 mL，用0.025 mol/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-二鈉)滴定液滴定溶液由紫紅色變?yōu)榧兯{色。每1 mL EDTA-二鈉滴定液相當(dāng)于3.676 mg的CaCl2·2H2O。通過計算EDTA-二鈉消耗體積，計算出CaCl2·2H2O含量。

2.3.3 兩種方法測定結(jié)果

含量測定結(jié)果如表9和表10所示。

表9 原子光譜法含量測定結(jié)果

表10 絡(luò)合滴定法含量測定結(jié)果

由表9和表10可知，原子吸收光譜法對復(fù)方氯化鈉注射液(批號20121101)中CaCl2·2H2O的檢測結(jié)果為0.032 929 6%～0.033 334 0% g/mL之間，絡(luò)合物滴定法對復(fù)方氯化鈉注射液(批號20121101)中CaCl2·2H2O的檢測結(jié)果為0.033 488 4%～0.034 039 8% g/mL之間，均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求(含CaCl2·2H2O應(yīng)為0.031%～0.035%g/mL)。并且2種方法含量檢測結(jié)果之間的RSD值為1.21%，2種方法檢測結(jié)果差異微小，原子吸收光譜法可以代替藥典方法進行氯化鈣含量測定。

3 結(jié)論

通過考察專屬性，耐用性、準(zhǔn)確度、精密度、檢測限，采用原子吸收光譜法測定復(fù)方氯化鈉注射液中氯化鈣的含量，專屬性好，精密度高，穩(wěn)定性強，重復(fù)性好，并且對比藥典方法，CaCl2·2H2O含量測定結(jié)果差異微小，且本法檢測迅速，供試溶液配制方法簡單，可以作為藥典對復(fù)方氯化鈉注射液鈣含量測定的補充方法。

[1]王萬鐵.病理生理學(xué)[M].杭州:浙江大學(xué)出版社, 2009:12.

[2]楊鳳瓊.復(fù)方電解質(zhì)葡萄糖R<,2>A注射液的研制[D].廣州:廣東工業(yè)大學(xué),2008.

[3]李向榮.藥劑學(xué)[M].杭州:浙江大學(xué)出版社, 2010:227.

[4]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 5413.21—2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn):嬰幼兒食品和乳品中鈣、鐵、鋅、鈉、鉀、鎂、銅和錳的測定[S]．北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010:1-7.

[5]黃北雄,陳啟釗.火焰原子吸收法測定葡萄糖酸鈣片的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2008,28(12):1040-1041.

[6]全英花,桂光云,王美玲,等.火焰光度法測定復(fù)方氯化鈉注射液中氯化鉀含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2008,9(5):358.

[7]黃北雄,陳啟釗.火焰原子吸收法測定葡萄糖酸鈣片的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2008,28(12):1041.

[8]毛士龍,吳亞利.火焰原子吸收光譜法測定復(fù)方醋酸鈉注射液中鉀含量[J].藥物鑒定, 2010,19(9):31.

[9]中華人名共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典：第二部 [K].北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2010.

[10]應(yīng)英,湯鋆.原子吸收法測定濾膜中錫的方法學(xué)研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2011,21(9):2181.