何婉敏 莫國棟 聶秀霞

HPLC法同時測定復方氯霉素硼酸酊中氯霉素及水楊酸的含量

何婉敏 莫國棟 聶秀霞

目的 建立高效液相色譜法(HPLC法)同時測定復方氯霉素硼酸酊中氯霉素及水楊酸含量的方法。方法 采用Eclipse XDB-C18(5 μm, 4.6 mm×150 mm)色譜柱；甲醇- 0.5%乙酸銨(60:40)為流動相；檢測波長為300 nm；柱溫：30℃。結(jié)果 水楊酸在0.042~0.168 mg/ml濃度范圍內(nèi), 峰面積與濃度呈良好的線性關系, 氯霉素在0.031~0.125 mg/ml濃度范圍內(nèi), 峰面積與濃度呈良好的線性關系, 回歸方程分別為：水楊酸：Y=13475 X-21.411(r=0.9997)；氯霉素：Y=8819.1 X-5.0643(r=0.9997)。結(jié)論 此法專屬性高、耐用性強、操作簡便, 適合作為測定復方氯霉素硼酸酊中氯霉素及水楊酸含量的分析方法。

高效液相色譜法；氯霉素；水楊酸

復方氯霉素硼酸酊為本院自制外用制劑, 主要成份為氯霉素及水楊酸等, 具有止癢、殺菌、消炎的作用, 在治療脂溢性皮炎及毛囊炎中發(fā)揮了較好的作用, 深受患者好評。作者查閱2010版《中國藥典》［1］及文獻［2, 3］, 并實時操作,發(fā)現(xiàn)采用HPLC法可以同時測定復方氯霉素硼酸酊中氯霉素及水楊酸的含量, 現(xiàn)報告如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 安捷倫1260液相色譜儀；色譜柱：Eclipse XDB-C18(5 μm, 4.6 mm×150 mm), 電子分析天平［BSA124S型 賽多利斯科學儀器(北京)有限公司］。

1.2 試劑 甲醇(色譜純 天津市康科德科技有限公司)；乙酸銨(色譜純 天津市科密歐化學試劑有限公司)；水楊酸(100106-201104 中國食品藥品檢定研究院)；氯霉素(130303-200614 中國藥品生物制品檢定所)；復方氯霉素硼酸酊及復方氯霉素硼酸酊陰性制劑為本制劑室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱：Eclipse XDBC18(5 μm, 4.6 mm×150 mm)；流動相以甲醇- 0.5%乙酸銨(60:40)；流速為1.0 ml/min；柱溫為30℃；檢測波長為300 nm。分別取水楊酸及氯霉素對照品適量, 用流動相溶解并稀釋至刻度, 作為系統(tǒng)適用性試驗溶液, 精密量取20 μl, 進樣,進行測定。結(jié)果見圖1。

2.2 線性相關性試驗 分別取水楊酸、氯霉素對照品適量,精密稱定, 置10 ml量瓶中, 加流動相溶解并定容至刻度, 搖勻, 作為對照品儲備液。精密量取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 ml分別置于10 ml量瓶中, 用流動相稀釋至刻度, 作為系列標準溶液, 按照高效液相色譜法《中國藥典》2010年版二部附錄VD), 分別進樣10 μl, 記錄色譜圖。以標準溶液的濃度c(mg/ml)為橫坐標, 峰面積A為縱坐標繪制標準曲線, 水楊酸的回歸方程為：Y=13475 X-21.411(r=0.9997), 氯霉素的回歸方程為：Y=8819.1 X-5.0643(r=0.9997)。結(jié)果表明：水楊酸在0.042~0.168 mg/ml濃度范圍內(nèi), 峰面積與濃度呈良好的線性關系, 氯霉素在0.031~0.125 mg/ml濃度范圍內(nèi), 峰面積與濃度呈良好的線性關系, 標準曲線圖見圖3、圖4。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗色譜圖

圖2 空白溶劑色譜圖

2.3 回收率試驗 將各輔料按處方配比混合, 作為基質(zhì)空白溶液, 取已知含量的對照品, 按80%、100%、120%三個水平各配3份, 用基質(zhì)空白溶液稀釋并定容至刻度, 搖勻,進樣10 μl, 記錄色譜圖, 計算回收率。結(jié)果見表1、表2?；厥章?(測得量-樣品量)/加入量×100%。

圖3 水楊酸標準曲線圖

圖4 氯霉素標準曲線圖

表1 水楊酸回收率試驗結(jié)果

表2 氯霉素回收率試驗結(jié)果

2.4 精密度試驗 取對照品溶液, 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版二部附錄VD), 進樣10 μl, 連續(xù)測定6次,記錄色譜圖。結(jié)果測得水楊酸、氯霉素RSD分別為0.43%、0.38%。

2.5 重復性試驗 取供試品溶液(批號：20131025), 照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版二部附錄V D), 進樣10 μl, 連續(xù)測定6次, 記錄色譜圖。結(jié)果測得水楊酸RSD為0.59%、氯霉素RSD為1.25%。

2.6 改變流速的研究 照2.7含量測定方法, 改流速為0.95 ml/min、1 ml/min、1.05 ml/min；柱溫為室溫；檢測波長為300 nm。取供試品溶液10 μl, 分別注入液相色譜儀, 記錄色譜圖, 按外標法以峰面積計算。主峰的拖尾因子均＜2.0, 氯霉素與水楊酸分離度＞1.5, 氯霉素與水楊酸的含量相對標準差均＜2.0%。

2.7 含量測定 取供試品溶液與對照品溶液各10 μl, 分別注入液相色譜儀, 記錄色譜圖, 按外標法以峰面積計算, 即得。結(jié)果見表3。

表3 復方氯霉素硼酸酊中水楊酸及氯霉素的含量測定結(jié)果(%)

3 討論

復方氯霉素硼酸酊為本院自制制劑, 主要成分為水楊酸和氯霉素, 具有抗菌消炎的作用, 主要用于脂溢性皮炎、皮疹等皮膚病。2010版《中國藥典》中采用用高效液相色譜法測定水楊酸和氯霉素的含量［1］, 查閱文獻資料, 有采用高效液相色譜法同時測定氯霉素與水楊酸的報道［3］, 作者參考文獻, 并在此方法上作了進一步改進, 取得了較好的效果。此法操作簡單, 方法簡便、快速, 結(jié)果準確、可靠、重現(xiàn)性好,可作為該制劑的含量測定方法。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部).北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 2010:78-79.

［2］ 龔銀香, 魏軍.高效液相色譜法測定復方氯霉素酊中氯霉素含量.長江大學學報(自然版), 2006, 3(3):298-230.

［3］ 郭勝才, 谷娜, 李華.高效液相色譜法測定復方氯霉素醇溶液中水楊酸和氯霉素的含量.醫(yī)藥導報, 2010(6):30.

2014-06-23］

528447 中山市第二人民醫(yī)院