楊光 羅紅 陳晨 孫文平 劉輝

·短篇論著·

基于免疫激發(fā)態(tài)指標(biāo)觀察補(bǔ)中益氣湯對(duì)小鼠免疫功能調(diào)節(jié)作用

楊光 羅紅 陳晨 孫文平 劉輝

目的 探討補(bǔ)中益氣湯對(duì)免疫激發(fā)態(tài)小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用。 方法 將經(jīng)卵清蛋白免疫過(guò)的小鼠 40只分 A、B 兩組, 分別灌服補(bǔ)中益氣湯和葡萄糖, 1次/d, 每次0.5 ml/只, 連續(xù)7 d, 第8天將所有小鼠再次加強(qiáng)免疫 , 再經(jīng)7 d, 采血分離血清, 用ELISA 法檢測(cè)血清中相應(yīng)抗體的生成水平。結(jié)果 補(bǔ)中益氣湯組小鼠抗體生成水平明顯低于葡萄糖組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論 補(bǔ)中益氣湯可以下調(diào)小鼠的免疫應(yīng)答水平, 降低抗體生成。

補(bǔ)中益氣湯；免疫激發(fā)態(tài)；抗體生成YANG Guang, LUO Hong, CHEN Chen, et al. Institute of Laboratory Medcine, Dalian Medical University, Dalian 116044, China

補(bǔ)中益氣湯出自金元時(shí)期李東垣的《脾胃論》, 該方由黃芪、升麻、柴胡、人參、炙甘草、當(dāng)歸、橘皮、白術(shù)所組成［1］。本方為補(bǔ)氣升陽(yáng)、甘溫除熱的代表方, 是臨床治療脾虛證的有卓著療效的常用方劑。研究補(bǔ)中益氣湯的免疫調(diào)節(jié)作用多采用脾虛小鼠模型［2］, 但制備模型的動(dòng)物種屬不同或制備方法不同, 結(jié)果差別也很大, 即使同一方法同一批次制備的動(dòng)物模型也不盡相同, 都可能影響檢測(cè)指標(biāo)的觀察。如果先用抗原刺激小鼠, 使小鼠免疫系統(tǒng)處于激發(fā)態(tài), 這種狀態(tài)高低直接與小鼠免疫應(yīng)答有關(guān), 就可以靈敏觀察出中藥對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響。本實(shí)驗(yàn)采用卵清蛋白抗原刺激后的小鼠, 通過(guò)補(bǔ)中益氣湯灌胃的給藥途徑, 用ELISA法檢測(cè)小鼠的抗體生成水平, 觀察中藥對(duì)小鼠體液免疫功能的影響。ELISA檢測(cè)方法容易建立, 整個(gè)實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單、可靠、靈敏, 減少了實(shí)驗(yàn)的影響因素, 得到較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物 補(bǔ)中益氣湯所用生藥購(gòu)于大連同仁堂大藥房, 經(jīng)大連市藥檢所鑒定為正品。經(jīng)大連同仁堂大藥房煎熬(生藥含量為20% ), 將該藥液密封, 置于冰箱冷藏保存, 備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠, 40只, 雄性, 體重18～22 g(由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。

1.3 試劑與儀器 凍干辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記羊抗鼠 BALB/ CIgG 結(jié)合物(衛(wèi)生部北京生物制品研究所)；底物顯示劑A、B液(北京科衛(wèi)出品)；終止液(上?？迫A出品)；酶標(biāo)儀(Read-er230s 全自動(dòng)酶標(biāo)儀)。

1.4 方法 將40只小鼠隨機(jī)分成2組, 每組20只, 分別標(biāo)記灌服補(bǔ)中益氣湯組(A組), 5%葡萄糖組(B組)。第1天將所有小鼠于腹股溝皮下注射1:5的卵清蛋白抗原, 0.2 ml/只。第2天開始在固定時(shí)間進(jìn)行灌胃, A組灌服補(bǔ)中益氣湯, B 組灌服5%葡萄糖, 1次/d, 每次0.5 ml/只, 連續(xù)7 d。第8天將所有小鼠加強(qiáng)免疫1次, 方法同前, 第15天將小鼠用摘眼球法取血, 2500 rpm離心5 min, 分離血清備用。卵清蛋白抗體效價(jià)測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)間接法測(cè)定。以稀釋的卵清蛋白包被酶標(biāo)板, 測(cè)定小鼠血清的相應(yīng)吸光度值, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)血清的濃度與吸光度對(duì)應(yīng)關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求得小鼠血清中抗體含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用 SPSS11.5軟件協(xié)助完成, 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 兩組數(shù)據(jù)間均值比較采用t檢驗(yàn), P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)2周喂養(yǎng), B組小鼠死亡1只, 死亡原因?yàn)殡S機(jī)死亡。其他小鼠的精神狀態(tài)良好。A組小鼠血清中卵清蛋白抗體生成水平明顯低于B組( t=3.329, P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 小鼠血清中卯清蛋白抗體生成水平

3 討論

機(jī)體受抗原刺激后, 產(chǎn)生抗體的水平是評(píng)估體液免疫狀態(tài)的重要指標(biāo), 抗體的產(chǎn)生需要T細(xì)胞的輔助和細(xì)胞因子的參與, 因此抗體生成水平在一定程度上也可以反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài), 是一種評(píng)價(jià)機(jī)體免疫應(yīng)答水平的有效方法。本實(shí)驗(yàn)以抗原刺激后的小鼠為研究對(duì)象, 測(cè)定其灌服中藥后抗體激發(fā)水平的變化, 結(jié)果顯示激發(fā)態(tài)小鼠灌服補(bǔ)中益氣湯后, 抗體生成水平明顯低于對(duì)照組, 且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01),初步證實(shí)了補(bǔ)中益氣湯可以下調(diào)小鼠的免疫應(yīng)答水平, 對(duì)免疫調(diào)節(jié)有一定程度的影響。近年來(lái), 補(bǔ)中益氣湯的雙向免疫調(diào)節(jié)觀念在臨床多有應(yīng)用［3］, 機(jī)體受抗原刺激后, 很可能出現(xiàn)過(guò)高的免疫反應(yīng), 這種反應(yīng)可能對(duì)機(jī)體是不利的, 到達(dá)一定程度時(shí)得到抑制, 對(duì)于機(jī)體而言又是一種有益的、保護(hù)性的調(diào)節(jié)作用。這種作用能否應(yīng)用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病、組織器官移植中降低排斥反應(yīng), 具有一定的實(shí)際價(jià)值。

中藥對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)受其劑量、成分、藥物的配伍等多方面的影響, 同時(shí)給藥途徑、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬及檢測(cè)方法都會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。同一種中藥使用情況不同, 可表現(xiàn)促進(jìn)或抑制機(jī)體免疫功能的作用, 這是中藥獨(dú)特而復(fù)雜的藥性決定的［4-6］, 我們將在以后的試驗(yàn)中增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量, 選擇不同的給藥途徑及劑量等, 進(jìn)一步闡明補(bǔ)中益氣湯的作用機(jī)制。本研究旨在拋磚引玉, 希望能引起更多關(guān)于中藥方劑對(duì)免疫功能作用的研究。近些年, 中藥的免疫調(diào)節(jié)作用成為研究中藥藥理作用的熱點(diǎn), 其原因可能是中藥的免疫調(diào)節(jié)作用確實(shí)有優(yōu)于西藥之處, 而且毒副作用相對(duì)于西藥小。中藥的免疫調(diào)節(jié)作用還用于抗炎、抗腫瘤等臨床輔助治療［7-9］, 可以作為中西醫(yī)結(jié)合治療研究的新方向。

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Regulation of functional immunity in mice with Buzhong Yiqi Tang based on immune excited state index

Objective To investigate the regulation of functional immunity in mice with Buzhong Yiqi tang. Methods 40 mice immuned by egg protein were randomly divided into group A and group B, administered with Buzhong Yiqi Tang and glucose individually.The dose was 0.5 ml for each mouse one day and lasted for 7 days.The second immunization was conducted 7 days after the first immunization.Blood serum was separated and ELISA was used to examine antibody to egg protein on day 14 postimmunization. Results Compared with group B, antibody level was low in group A, and had statistic meaning (P＜0.01). Conclusion Buzhong Yiqi Tang is possible to decrease levels of antibody and immunity in mice.

Buzhong Yiqi Tang； Immune excited state； Antibody formation

遼寧省教育廳科技發(fā)展基金資助(項(xiàng)目編號(hào)：990221063)

116044 遼寧省大連醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院

劉輝