周臻濤 王悅冬

HPV16-E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組織及非癌組織中的表達

周臻濤 王悅冬

目的 通過分析HPV16-E6蛋白在食管正常組織、不典型性增生組織和癌組織中的表達，探討HPV16-E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組發(fā)生、發(fā)展中的生物學意義。方法 應用免疫組織化學方法檢測對68例食管正常黏膜組織、20例上皮不典型增生組織及68例癌組織中HPV16-E6蛋白的表達情況進行研究。結果 HPV16-E6蛋白陽性率在正常食管黏膜組織中為14.7%，在上皮不典型性增生組織中為45.0%，在癌組織中為70.6%，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論 HPV16-E6蛋白與梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關系密切。

食管腫瘤；人乳頭狀瘤病毒；E6蛋白；免疫組化

人乳頭狀瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖。目前已分離出的HPV有130多種，根據其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明其與食管鱗癌的發(fā)生關系密切[1]。梅州地區(qū)為客家人聚集區(qū)，該地區(qū)食管癌高發(fā)。本研究應用免疫組化的方法檢測梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內HPV16-E6蛋白表達，以探討HPV16-E6蛋白在該地區(qū)食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的生物學意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集梅州市人民醫(yī)院2008年1月～2011年6月間行根治性切除，且臨床病理資料完整的食管鱗病例標本及相應的距腫瘤5 cm以上經病理證實為正常食管黏膜組織68例。所有患者術前均未行放療、化療，其中男性50例，女性18例；年齡40～62歲，中位年齡50歲；另外選取同期經胃鏡活檢病理證實為食管鱗狀上皮不典型性增生標本20例，其中男性15例，女性5 例；年齡30～65歲，中位年齡40歲。上述所有患者均為長期(≥20年)居住在梅州地區(qū)的客家人。HPV16-E6單抗為美國Santa Cruz公司產品，購自北京中山生物公司，即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購自DaKo公司。

1.2 方法 免疫組織化學檢查采用EnVision兩步法，實驗步驟按試劑盒說明書進行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽性對照片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷 HPV16-E6蛋白主要位于細胞核內，呈棕黃色或棕褐色反應，伴少許胞漿著色。在普通光學顯微鏡下閱片，在高倍鏡下(400×)隨機觀察5～10個視野，觀察細胞核的染色深淺和計算胞核陽性的細胞所占的百分比。染色結果判定標準參照Fromowitz等[2]陽性細胞半定量分級法，在高倍鏡下對細胞染色作如下評分：根據陽性細胞占整個腫瘤細胞的百分數打分：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。根據陽性細胞染色深淺打分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；兩項結果相加<2分為陰性(-)，2～3分為弱陽性(+)，4～5分為中度陽性(++)，6～7分為強陽性(+++)，其中(-)視為低表達陰性，(+、++、+++)視為陽性。以上結果均由2位有經驗的病理科醫(yī)師采用雙盲法觀察并確定。

1.4 統(tǒng)計學方法 統(tǒng)計分析采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件進行χ2檢驗,以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 HPV16 E6在各組織中的表達 HPV16-E6蛋白著色部位主要在細胞核， 呈棕黃色或棕褐色反應，伴少許胞漿著色。在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16-E6蛋白表達陽性率分別為14.7%、45.0%、70.6%。正常黏膜組與上皮不典型增生組及正常黏膜組與鱗癌組比較HPV16-E6蛋白表達陽性率差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)；上皮不典型增生組與鱗癌組比較HPV16-E6蛋白表達陽性率差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(見表1)。

表1 3種組織中HPV16-E6蛋白的表達情況[n(%)]

3 討論

食管癌是常見的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬人死于食管癌,我國是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，其中尤以我國北部(太行山區(qū))發(fā)病率最高，梅州地區(qū)亦為食管癌高發(fā)區(qū)。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素協(xié)同、多階段綜合作用的結果，其病理學形態(tài)常經過鱗狀上皮的單純增生、不典型增生、原位癌、早期浸潤癌至浸潤癌階段[3]。

HPV能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖，目前已分離出的HPV有130多種，根據其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明HPV16與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關[4,5]。在HPV16雙股DNA的8個讀碼框架結構中，E6基因為轉化有關的早期基因，在DNA復制前早期編碼E6蛋白，是一種病毒癌蛋白，可以刺激易感細胞增生，并在腫瘤形成的早期階段起重要作用。歐洲學者研究表明高危型HPV感染與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，40%～60%的食管鱗癌標本HPV監(jiān)測為陽性[6]。國內學者王悅冬[7]采用PCR/導流雜交法檢測56例新鮮客家人食管癌組織、癌旁組織及正常食管黏膜組織HPV的表達，結果提示梅州地區(qū)客家人食管癌組織中存在HPV感染。本研究應用免疫組化的方法檢測梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內HPV16-E6蛋白表達，結果顯示在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16-E6蛋白表達陽性率分別14.7%、45.0%、70.6%，各組之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。從研究結果可也看出，隨著食管病變的進展，HPV16- E6蛋白表達的陽性率也隨著升高，這提示HVP16-E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關，但其具體作用機制尚有待進一步研究。

[1] 劉節(jié),蘇勤,張偉.人乳頭瘤病毒HPV-E6及p53蛋白與食管鱗癌關系.世界華人消化雜志,2000,8(5):494-496.

[2] Fromowitz F B, Viola M V, Chao S, et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol,1987, 18(12):1268- 1275.

[3] 許春雷,千新來,周小山,等.HPV16型-E6、E7 在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達.癌癥,2004,23(2):165-168.

[4] 任占平,石喆,杜鵑,等.乳腺癌組織中HPV16 18E6 及p53 MCM7 蛋白的表達及意義.中國腫瘤臨床,2008,35(6):327-330.

[5] McDougall J K. Immortalization and transformation of human cells by human papillomavirus//Human Pathogenic Papillomaviruses. Springer Berlin Heidelberg, 1994: 101-119.

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[7] 王悅冬,張開鄂,周臻濤,等.梅州市客家人食管與人乳頭狀瘤病毒感染的關系.腫瘤基礎與臨床,2010,23(5):377-378.

Expression of HPV16-E6 in squamous cell carcinoma tissues of esophageal cancer and non-cancer tissues

ZHOUZhen-tao，WANGYue-dong.

DepartmentofOncology，MeizhouPeople’sHospital,Meizhou514031，China

Objective To explore the biological significance of HPV16-E6 in the esophageal squamous cell carcinogenesis of Meizhou Hakka People through determining the expression of HPV16-E6 protein in normal tissues, dysplasia tissues and carcinoma tissues of esophagus. Methods Immunohistochemistry technique was used to detect the expression of the HPV16-E6 protein in 68 cases of normal tissues, 20 cases of dysplasia tissues and 68 cases of carcinoma tissues of esophagus. Results The positive rates of HPV16-E6 protein in the tissues of normal mucosa,dysplasia and carcinoma of esophagus patients were 14.7%, 45.0% and 70.6% respectively. There was significantly difference among the three groups respectively(P<0.05). Conclusion HPV16-E6 protein are highly associated with esophageal squamous cell carcinogenesis of Meizhou Hakka People.

Esophageal neoplasm；Human Papillomavirus(HPV)；E6 protein；Immunohistochemistry

514031梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科