胡偉　陳豫　伍洋

摘要：以蘿卜直根形成層為試驗(yàn)材料，比較不同激素NAA、2，4-D和6-BA濃度配比對(duì)蘿卜外植體形成愈傷組織誘導(dǎo)率和質(zhì)量的影響。結(jié)果表明：（1）與不添加任何激素相比，不同激素濃度配比對(duì)蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)效果明顯。（2）6-BA分別與NAA、2，4-D配比誘導(dǎo)蘿卜愈傷組織的比較表明，2，4-D較NAA更適于誘導(dǎo)蘿卜愈傷組織。（3）6-BA與2，4-D濃度均為0.050～0.075 mg/mL的配比對(duì)蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)效果最好。

關(guān)鍵詞：蘿卜；激素；直根；愈傷組織；誘導(dǎo)率

中圖分類號(hào)： Q943.1；S631.104+.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）07-0060-03

收稿日期：2014-04-01

基金項(xiàng)目：發(fā)酵資源與應(yīng)用四川高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目（編號(hào)：2012KFJ002）；宜賓學(xué)院青年基金（編號(hào)：2012Q14）。

作者簡(jiǎn)介：胡偉（1981—），男，寧夏吳忠人，碩士，講師，主要從事有機(jī)農(nóng)業(yè)及作物生產(chǎn)系統(tǒng)模擬與決策研究。E-mail：wh_1981225@163.com

通信作者：陳豫，博士，副教授，主要從事農(nóng)村沼氣及生態(tài)農(nóng)業(yè)研究。E-mail：chenyu@nwsuaf.edu.cn。蘿卜（Raphanus sativus）是中國(guó)主要的大眾化蔬菜作物之一，在民間有“小人參”之美稱，具有較高的食用價(jià)值和醫(yī)用價(jià)值。蘿卜采用常規(guī)育種手段需時(shí)長(zhǎng)且勞動(dòng)強(qiáng)度大，通過組織培養(yǎng)能夠大量擴(kuò)繁原種，并能更好地保持蘿卜良種的性狀。關(guān)于蘿卜組織培養(yǎng)的研究，國(guó)內(nèi)外都有大量報(bào)道[1-9]，但大多數(shù)研究中應(yīng)用的激素種類比較單一，外植體的類型從蘿卜的帶柄子葉、子葉、下胚軸、花藥等進(jìn)行研究，但未涉及外植體蘿卜根部對(duì)愈傷組織的影響。本試驗(yàn)旨在研究不同激素濃度配比下，以蘿卜根部形成層為外植體進(jìn)行愈傷組織的培養(yǎng)，分析不同激素配比對(duì)蘿卜愈傷組織形成的影響及愈傷組織的生長(zhǎng)情況，找出蘿卜組織培養(yǎng)過程中適宜的激素配比濃度范圍，為蘿卜的組培技術(shù)提供理論參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

選用生長(zhǎng)健壯、體型勻稱、表面無(wú)傷痕的市場(chǎng)銷售的新鮮蘿卜。試驗(yàn)所用的3種激素為分裂素6-BA（6-芐氨基嘌呤）和生長(zhǎng)素2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸）、NAA（萘乙酸）。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制在MS培養(yǎng)基中添加3%蔗糖、0.8%瓊脂和不同激素濃度配比（表1），作為本試驗(yàn)誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基。配制好培養(yǎng)基后，用0.1 mol/L的NaOH或0.1 mol/L的HCl溶液在滅菌前將培養(yǎng)基pH值調(diào)至5.8～60，然后將培養(yǎng)基分裝到100 mL的三角培養(yǎng)瓶中，用封口膜封好瓶口，在121 ℃下濕熱滅菌30 min，滅菌后冷卻待用。

1.2.2愈傷組織的誘導(dǎo)用自來水將蘿卜直根表面污物沖洗干凈，用小刀切成小段放入燒杯中。先用75%乙醇對(duì)蘿卜小段消毒5 min，用無(wú)菌吸水紙吸干，再用0.2%氯化汞溶液消毒3 min，放入無(wú)菌水中漂洗2～3次，用無(wú)菌吸水紙吸干。在無(wú)菌操作臺(tái)上操作，把消毒好的蘿卜直根放入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用消毒好的解剖剪將蘿卜的形成層切成0.5 cm3左右的小塊，置于含有不同激素濃度配比的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，25 ℃暗培養(yǎng)，無(wú)需光照。外植體培養(yǎng)每隔3～5 d觀察1次，并記錄蘿卜切塊愈傷組織的產(chǎn)生情況，25～30 d后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率，計(jì)算公式如下：誘導(dǎo)率=形成愈傷組織的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù)×100%。

2結(jié)果與分析

2.1不添加任何激素時(shí)蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)率

在不添加任何激素的MS培養(yǎng)基上，蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)率為6%，且愈傷組織出現(xiàn)的時(shí)間較晚，大約為19 d，其形態(tài)為白色疏松狀（表2）。

2.2不同濃度6-BA和NAA配比對(duì)蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

由表2（MS2至MS17）可以看出，無(wú)菌根形成層接種到不同濃度6-BA和NAA配比的MS培養(yǎng)基中，大部分培養(yǎng)基上的根在接種后4 d少部分膨大，1周后全部膨大，大多數(shù)外植體在14 d后開始出現(xiàn)愈傷組織，愈傷組織顏色為淡黃色，質(zhì)地較為緊密。與不添加任何激素相比，蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)率有了明顯的提高，且愈傷組織出現(xiàn)的時(shí)間縮短了5 d。當(dāng) 6-BA 和NAA濃度均為0.025 mg/mL時(shí)其誘導(dǎo)率最低，為20%；當(dāng)NAA為0.075 mg/mL、6-BA濃度為0.1 mg/mL時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率最高，為31%。同時(shí)可以看出，6-BA和NAA配比下，當(dāng)NAA濃度不變時(shí)，隨著6-BA濃度增大，蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)率明顯增大。

2.3不同濃度6-BA和2，4-D配比對(duì)蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)率的影響

由表2（MS18至MS33）可以看出，添加不同濃度6-BA與2，4-D配比的MS培養(yǎng)基對(duì)蘿卜外植體進(jìn)行培養(yǎng)，大約在10 d后開始出現(xiàn)愈傷組織，愈傷組織顏色為淡黃色，質(zhì)地較為緊密。與不添加任何激素相比，蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)率有了明顯的提高，且愈傷組織出現(xiàn)的時(shí)間縮短了9 d。當(dāng)6-BA和2，4-D濃度均在0.050～0.075 mg/mL時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率在40%以上，在此范圍內(nèi)，隨著激素濃度的升高，誘導(dǎo)率也隨之升高；但超過其濃度臨界點(diǎn)以后，誘導(dǎo)率隨著激素濃度的升高有一定下降。

變更加嚴(yán)重[16]。李冬杰等研究紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)中的褐化問題時(shí)，認(rèn)為細(xì)胞分裂素類中6-BA有刺激多酚氧化酶（POO）活性提高、加重褐變的作用[17]。

本試驗(yàn)以蘿卜的根為外植體，6-BA分別與NAA、2，4-D配比誘導(dǎo)蘿卜愈傷組織，研究表明2，4-D較NAA更適于誘導(dǎo)蘿卜愈傷組織，且當(dāng)6-BA和2，4-D濃度均在0050～0.075 mg/mL時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)效果最好。本研究結(jié)果與龍?chǎng)┖绲萚18]不同，可能是由供試材料的基因型和外植體的不同引起的，可見，蘿卜愈傷組織的再分化仍然是一個(gè)需努力探索的問題。

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