劉福寶 梁良 王喆 劉麗芳 邊虹錚 王樂 趙永芳

·藥物研究·

高效液相法測定補中益氣丸中甘草苷和橙皮苷含量

劉福寶 梁良 王喆 劉麗芳 邊虹錚 王樂 趙永芳

目的建立測定補中益氣丸中甘草苷含量的方法。方法采用高效液相色譜法。C18柱，乙腈-0.05%醋酸溶液(20∶80)為流動相，流速1.0 ml/min，檢測波長276 nm，柱溫：室溫。結(jié)果在0.025～0.150 μg范圍內(nèi)，甘草苷進樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)；平均回收率為99.25%，RSD為1.3%(n=9)。結(jié)論該方法靈敏度高、重復(fù)性好，可用于補中益氣丸中甘草苷含量的測定。

補中益氣丸；高效液相色譜法；甘草苷；含量測定

補中益氣丸源自李東垣《脾胃論》中的“補中益氣湯”，由君藥黃茂，臣藥黨參、白術(shù)、甘草，佐藥當(dāng)歸、陳皮，使藥升麻、柴胡組成。具有補中益氣、升陽舉陷，健脾潤腸等功效。藥理學(xué)研究表明補中益氣丸對免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等均有良好的調(diào)節(jié)作用，并能增強機體非特異性抵抗力、抗菌、抗病毒等。補中益氣丸在2010年版藥典一部的質(zhì)量標準中只有黃芪甲苷的含量測定，為更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，完善和提高質(zhì)量標準，本文利用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)對補中益氣丸中的甘草苷進行了含量測定方法學(xué)研究。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 LC-10ATvp型溶劑輸送泵，SPD-10ATvp型紫外檢測器(日本島津公司)；日本島津色譜工作站(Lcsolution Lite)；數(shù)控超聲波清洗機(昆山市超聲儀器有限公司)；BP211D電子天平(SARTORIUS AG)。色譜純乙腈；水為純凈水；其它試劑均為分析純；甘草苷(批號：110781-200612，中檢所)；補中益氣丸(天津某藥廠，批號：110801)。

1.2 甘草苷的含量測定

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈- 0.05%醋酸溶液(20∶80)為流動相；檢測波長為276 nm；理論板數(shù)按甘草苷峰計算應(yīng)不低于4 000。

1.2.2 干擾性試驗：按照處方制備不含炙甘草的陰性樣品，按擬定的含量測定方法制備陰性對照液，進樣分析。

1.2.3 線性關(guān)系試驗：取甘草苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為5.0 μg/ml，10.0 μg/ml，15.0 μg/ml，20.0 μg/ml和30.0 μg/ml的溶液，分別吸取5 μl進樣分析。在上述色譜條件下，記錄色譜圖，測定峰面積。以對照品進樣量(μg)為橫坐標，以峰面積值為縱坐標作圖，制得甘草苷回歸方程。

1.2.4 回收率試驗：稱取已知含量的樣品約0.75 g，平行9份，其中3份分別加入濃度為24.48 μg/ml甘草苷對照品溶液各5 ml，3份分別加入41 μg/ml甘草苷對照品溶液各5 ml，3份分別加入57.24 μg/ml甘草苷對照品溶液各5 ml，照“供試品溶液制備”項下操作，測定，以下式計算方法的回收率。

1.2.5 溶液穩(wěn)定性試驗：稱取樣品約1.5 g，精密稱定，照確定的方法制備供試品溶液，取上述供試液，分別于0、2、4、8、12 h時，進樣5 μl，測得樣品中甘草苷峰面積值。

1.2.6 精密度試驗：精密吸取濃度為15.0 μg/ml的甘草苷對照品溶液各5 μl，重復(fù)進樣5次，測定其峰面積。

1.2.7 重復(fù)性試驗：按擬定的含量測定方法，對同一批樣品，分別制備5份供試品溶液，分別進樣5 μl，測定峰面積值并計算含量。

2 結(jié)果

2.1 干擾性試驗 按照處方制備不含炙甘草的陰性樣品，按擬定的含量測定方法制備陰性對照液，進樣分析。結(jié)果顯示對照品溶液和供試品溶液甘草苷峰相同保留時間位置陰性未見有峰干擾，說明補中益氣丸中其他藥材及輔料對本方法測定甘草苷的含量無干擾。

2.2 線性關(guān)系試驗 實驗條件下，以對照品進樣量(μg)為橫坐標，以峰面積值為縱坐標作圖，制得甘草苷回歸方程為：Y=10080X+2612.5，r=0.9999；以上結(jié)果表明：在0.025～0.150 μg范圍內(nèi)，甘草苷進樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系，實際樣品測定結(jié)果準確、可靠。實驗中對樣品的測定采用外標一點法計算甘草苷的含量。

2.3 回收率試驗 試驗結(jié)果表明，平均回收率為99.25%，RSD為1.3%，加樣回收率良好。見表1。

表1 甘草苷含量回收率試驗結(jié)果

2.4 溶液穩(wěn)定性試驗 實驗條件下，測得樣品中甘草苷峰面積值。試驗結(jié)果證明，樣品溶液在12 h內(nèi)基本保持穩(wěn)定。見表2。

表2 供試品溶液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.5 精密度試驗 實驗條件下測定其峰面積，試驗結(jié)果表明，精密度良好，RSD為1.4%。見表3。

表3 精密度試驗結(jié)果

2.6 重復(fù)性試驗 實驗條件下測定峰面積值并計算含量。見表4。

3 討論

中藥組方成分復(fù)雜，中藥的質(zhì)量控制亦是世界范圍內(nèi)的熱點問題。由于客觀條件所限，仿照西藥的標準，設(shè)定單一的成分作為質(zhì)量控制的標準是目前的主流方式，但具有很大局限性，不能全面評價中藥組方的藥理學(xué)作用和臨床療效。補中益氣丸源自于經(jīng)典名方，能增強機體非特異性抵抗力、抗菌、抗病毒等[1]。目前國家標準只是規(guī)定了黃芪中黃芪甲苷的含量限度，檢測手段單一，不能全面反映含有多種成分的補中益氣丸的質(zhì)量，在一定程度上影響其臨床評價。有文獻報道了芒柄花黃素、橙皮苷及甘草酸的含量測定方法[2-4]，尚未見甘草苷的含量測定，本文建立了甘草苷的HPLC含量測定方法，方法簡單易行，重現(xiàn)性好，回收率和精密度較高，方法結(jié)果可靠，為補中益氣丸的質(zhì)量研究提供了重要依據(jù)。

1 孫國祥,蔡新鳳.補中益氣丸高效液相色譜數(shù)字化指紋圖譜研究.中南藥學(xué)，2010,8:226-230.

2 董秀麗,李洪娟.HPLC法測定補中益氣丸中芒柄花黃素的含量.中國藥房,2012,23:3440-3441.

3 李洪剛,熊勝元,楊修齊,等.高效液相色譜法測定補中益氣丸中甘草酸含量.中國藥業(yè),2005,14:43.

4 徐端瓊.高效液相色譜法測定補中益氣丸中橙皮營的含量.海峽藥學(xué),2007,19:48-50.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.15.055

054000 河北省邢臺市疾病預(yù)防控制中心(劉福寶)；河北省疾病預(yù)防控制中心(梁良、王喆)；河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院(劉麗芳、邊虹錚、王樂)；河北省任丘市人民醫(yī)院內(nèi)三科(趙永芳)

梁良，050021 石家莊市，河北省疾病預(yù)防控制中心；

E-mail：1127514740@qq.com

R 932

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1002-7386(2014)15-2365-03

2014-01-13)