周思靜　劉桂君　尚宏忠等

摘要：蛹蟲(chóng)草是一種重要的食藥用真菌。本文概述了蛹蟲(chóng)草人工培養(yǎng)技術(shù)的研究進(jìn)展，包括菌種選育、蠶蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)技術(shù)、人工固體培養(yǎng)技術(shù)、液體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)，為蛹蟲(chóng)草在我國(guó)進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)提供參考。

關(guān)鍵詞：蛹蟲(chóng)草；人工培養(yǎng)；固體培養(yǎng)；液體發(fā)酵培養(yǎng)

中圖分類(lèi)號(hào)： S567.3+50.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）07-0013-04

收稿日期：2013-11-05

基金項(xiàng)目：北京市科學(xué)技術(shù)研究院青年骨干計(jì)劃（編號(hào)：201311）；北京市科學(xué)技術(shù)研究院萌芽計(jì)劃。

作者簡(jiǎn)介：周思靜（1985—），女，陜西咸陽(yáng)人，碩士研究生，研究實(shí)習(xí)員，研究方向?yàn)槭乘幱谜婢?。E-mail：zhousijing@hotmail.com。

通信作者：劉桂君，博士研究生，助理研究員，研究方向?yàn)槭乘幱谜婢?。E-mail：Liu_guijun01@163.com。蛹蟲(chóng)草（Cordyceps militaris）別稱(chēng)北蟲(chóng)草、北冬蟲(chóng)夏草，是蟲(chóng)草屬的模式菌，分類(lèi)學(xué)上屬于子囊菌門(mén)（Ascomycota）糞殼菌綱（Sordariomycetes）肉座菌亞綱（Hypocreomycetidae）肉座菌目（Hypocreales）蟲(chóng)草菌科（Cordycipitaceae）蟲(chóng)草屬（Cordyceps）[1]。 蛹蟲(chóng)草作為一種重要的食藥用真菌，營(yíng)養(yǎng)成分豐富，除含有蛋白質(zhì)、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)成分外，還含有多種維生素、磷、鋅、銅、鐵等微量元素及多種藥用有效成分如蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖等，使其具有抗腫瘤，抗病原微生物，抗氧化，調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，抗疲勞及對(duì)肝、腎和呼吸系統(tǒng)具有保護(hù)作用等一系列藥理作用。大量研究表明，蛹蟲(chóng)草有效成分和含量與冬蟲(chóng)夏草類(lèi)似，可作為冬蟲(chóng)夏草的替代品，而冬蟲(chóng)夏草與人參、鹿茸并稱(chēng)為中藥寶庫(kù)中的3大補(bǔ)品。目前冬蟲(chóng)夏草尚不能人工培養(yǎng)，且野生冬蟲(chóng)夏草資源在逐年下降，無(wú)法滿(mǎn)足市場(chǎng)需求。因此，作為冬蟲(chóng)夏草替代品的蛹蟲(chóng)草需求量日益增加。由于蛹蟲(chóng)草對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求較低，可人工培養(yǎng)，目前已經(jīng)形成了蛹蟲(chóng)草人工培養(yǎng)技術(shù)、人工固體培養(yǎng)技術(shù)、液體發(fā)酵培養(yǎng)等3種培養(yǎng)技術(shù)。本文綜述了近年來(lái)上述3種培養(yǎng)技術(shù)的研究進(jìn)展，以期為蛹蟲(chóng)草產(chǎn)業(yè)化、工業(yè)化栽培提供參考。

1菌種的選育

蛹蟲(chóng)草在培養(yǎng)過(guò)程中極易出現(xiàn)菌種退化，進(jìn)而導(dǎo)致子實(shí)體原基減少，出草畸形，產(chǎn)量、質(zhì)量下降等問(wèn)題，因此優(yōu)良菌株的選育和復(fù)壯是蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。研究認(rèn)為，導(dǎo)致蛹蟲(chóng)草菌種退化的原因主要是兩方面，一是菌種的遺傳背景因素，二是外界的不良條件。遺傳背景導(dǎo)致菌種退化的機(jī)理有核型改變、基因突變、胞內(nèi)有害物質(zhì)積累等，核型改變是目前比較認(rèn)同的機(jī)理。汪虹等為探明蛹蟲(chóng)草菌種退化的遺傳背景，根據(jù)蛹蟲(chóng)草交配型基因的序列設(shè)計(jì)3對(duì)特異性引物，對(duì)收集到的13株蛹蟲(chóng)草正常菌株和退化菌種進(jìn)行PCR鑒定；結(jié)果表明，3株正常菌株含有MAT-HMG、MAT-alpha兩類(lèi)交配型基因，判定為異核體；11株退化菌株僅含有MAT-HMG或MAT-alpha交配型基因，判定為同核體；由此作者推測(cè)導(dǎo)致蛹蟲(chóng)草產(chǎn)生不形成子實(shí)體的菌種退化的原因之一是核相發(fā)生了變化，即異核體變成了同核體[2]。譚琦等研究也表明，菌種退化是因?yàn)楹讼喟l(fā)生變化，由異核型變?yōu)橥诵蚚3]。

建立退化菌種的鑒定方法有助于提前淘汰退化菌種，減少經(jīng)濟(jì)損失。目前可根據(jù)生理生化特征來(lái)鑒定退化菌株[4]。如可根據(jù)脫氫酶活性進(jìn)行鑒定，正常菌株的酶活高于退化菌株；可利用溴麝香草酚藍(lán)指示劑法進(jìn)行鑒定，退化菌株為藍(lán)色或綠色。此外，適當(dāng)?shù)谋２胤椒ㄓ兄诜乐咕N退化。夏鳳娜等比較了5種保藏條件下保藏半年、1年后菌絲活化的情況以及菌絲活化后的深層培養(yǎng)和固體培養(yǎng)長(zhǎng)勢(shì)情況，結(jié)果表明適合蛹蟲(chóng)草的最佳保藏溫度為（4±2） ℃[5]。方華舟等研究了保藏溫度、時(shí)間及代次對(duì)蛹蟲(chóng)草菌種質(zhì)量的影響，發(fā)現(xiàn) 4 ℃ 保藏1～2個(gè)月為佳，10 ℃保藏1個(gè)月為佳，菌種傳代以3代內(nèi)為佳[6]。

菌種選育是篩選蛹蟲(chóng)草菌株的關(guān)鍵，常用方法有菌落形態(tài)觀察法、海選法、化學(xué)誘變、物理誘變、原生質(zhì)體融合、基因改良等。孫軍德等通過(guò)對(duì)比5株蛹蟲(chóng)草的菌絲形態(tài)、生長(zhǎng)速率、液體培養(yǎng)生物量和胞外多糖、人工栽培和子實(shí)體中活性物質(zhì)蟲(chóng)草多糖和蟲(chóng)草素，篩選出6號(hào)菌株，該菌株菌絲的生長(zhǎng)速率比其他菌株快，液體培養(yǎng)生物量和胞外多糖含量明顯高于其他菌株，人工培養(yǎng)的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體頭部大，子囊殼豐富，顏色橘黃，出草整齊均勻，出草率高，子實(shí)體中蟲(chóng)草多糖、蟲(chóng)草素含量均高于其他菌株[7]。王蕾等通過(guò)對(duì)14株蛹擬青霉菌株進(jìn)行搖瓶液體培養(yǎng)試驗(yàn)，篩選出蟲(chóng)草素產(chǎn)量最高的蛹蟲(chóng)草菌株CM001[8]。在蛹蟲(chóng)草的化學(xué)誘變選育方面，翟景波等采用亞硝基胍誘變，成功選育出1株高產(chǎn)蛹蟲(chóng)草誘變菌株H4025[9]；莫紅麗利用吖啶橙誘變選育出高產(chǎn)蟲(chóng)草素的誘變菌株[10]。物理誘變選育是目前蛹蟲(chóng)草選育中較常見(jiàn)的選育手段，主要包括紫外誘變選育、輻射誘變選育及航天誘變選育。王陶等利用離子束注入誘變，選育出富鍺能力強(qiáng)的蛹蟲(chóng)草10號(hào)菌株，該菌株誘變后的鍺含量高達(dá)1 201 μg/g，比誘變前增加了61.25%[11]。李文等采用低能離子束注入，當(dāng)注入劑量為2.6×1015 ions/cm3時(shí)，篩選出15株蟲(chóng)草素含量較高的蛹蟲(chóng)草菌株，通過(guò)70%乙醇微波-超聲提取，紫外分光光度檢測(cè)，15株菌株中蟲(chóng)草素含量最高可達(dá)（11.924±0.063） mg/g，比原始菌株增長(zhǎng)了近30%[12]。Das等通過(guò)離子束輻照誘變獲得高產(chǎn)蟲(chóng)草素的蛹蟲(chóng)草突變菌株G81-3[13]。利用基因手段進(jìn)行蛹蟲(chóng)草優(yōu)良菌種的選育方面，目前雖有一些研究，但取得的成果不是很顯著。熊承慧等報(bào)道，利用基因工程方法可以改善蛹蟲(chóng)草菌株繼代穩(wěn)定性[14]。周洪英等利用滅活原生質(zhì)體融合法進(jìn)行蛹蟲(chóng)草優(yōu)良菌株的選育[15]。

2蠶蛹蟲(chóng)草人工培養(yǎng)技術(shù)

1987年梁曼逸等率先以家蠶和柞蠶為寄主培養(yǎng)蛹蟲(chóng)草，獲得了與天然蛹蟲(chóng)草相似的子實(shí)體[16]。后來(lái)蛹蟲(chóng)草相繼在桑蠶、蓖麻蠶（馬桑蠶）、天蠶、茶蠶、斜紋夜蛾（Spodoptera litura）、煙蚜夜蛾（Heliothis virescens）、豆天蛾、甘藍(lán)夜蛾（Mamestra brassicae）、玉米螟蛹等寄主上成功進(jìn)行培養(yǎng)[17]。

蠶蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)技術(shù)主要包括蠶蛹的選擇、接種、培養(yǎng)等步驟。一般選擇化蛹2～4 d的蠶蛹，剔除不良蠶蛹，對(duì)蛹體表面進(jìn)行適當(dāng)消毒，接種蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)，將消毒接種過(guò)的蠶蛹放入培養(yǎng)室，在溫度15～25 ℃、濕度60%～80%、自然光照、通風(fēng)條件下培養(yǎng)12～20 d，待蛹體長(zhǎng)出子實(shí)體原基后，置于溫度21～24 ℃、濕度65%～95%、光照12 h/d的環(huán)境中，直到子實(shí)體成熟。李亞潔等研究了柞蠶蛹蟲(chóng)草高產(chǎn)條件，結(jié)果表明采用孢子分離技術(shù)選育菌種保證了蟲(chóng)草高產(chǎn)；接種液體菌種效果好，硬化率高，產(chǎn)量高；接種劑量在0.3～0.5 mL時(shí)蛹體完全僵蛹時(shí)間明顯短，產(chǎn)量高；菌絲生長(zhǎng)期25 ℃恒溫培養(yǎng)，蛹體完全變硬時(shí)改20 ℃恒溫培養(yǎng)，蛹體硬化快，子實(shí)體分布均勻，長(zhǎng)勢(shì)好，產(chǎn)量較高[18]。申鴻等以蛹蟲(chóng)草菌株YCC-XD-2為目標(biāo)菌，比較了家蠶蛹、蛾培養(yǎng)基和蛹粉代料培養(yǎng)基上蛹蟲(chóng)草的生長(zhǎng)情況和蟲(chóng)草素含量；結(jié)果表明蛹蟲(chóng)草菌種在蠶體和蛹粉代料培養(yǎng)基上均生長(zhǎng)良好，其中蠶體培養(yǎng)基以蠶蛾培養(yǎng)基上的蛹蟲(chóng)草生長(zhǎng)較好；蛹粉代料培養(yǎng)基以糯米+蛹粉培養(yǎng)基上的蛹蟲(chóng)草生長(zhǎng)較好；蠶體培養(yǎng)基培育的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體中的蟲(chóng)草素含量顯著高于蛹粉代料培養(yǎng)基培育的蛹蟲(chóng)草，其中蠶蛾培養(yǎng)基培育蛹蟲(chóng)草子實(shí)體中的蟲(chóng)草素含量高達(dá) 21.97 mg/g，在相同培養(yǎng)條件下，蛹蟲(chóng)草子實(shí)體中的蟲(chóng)草素含量高于菌絲體和培養(yǎng)基質(zhì)；利用家蠶蛹、蛾培養(yǎng)基可以生產(chǎn)出高品質(zhì)蛹蟲(chóng)草[19]。

以蠶蛹為培養(yǎng)基質(zhì)生長(zhǎng)的蛹蟲(chóng)草中氨基酸總量及人體必需的8種氨基酸總量均高于人工栽培的蛹蟲(chóng)草，具有一定抗氧化、延緩衰老的作用。蓖麻蠶蛹蟲(chóng)草中的蟲(chóng)草素含量明顯高于野生蛹蟲(chóng)草，而腺苷含量與野生蛹蟲(chóng)草相當(dāng)[20]。此外，家蠶在醫(yī)學(xué)上有許多用途，是一種非常重要的藥用昆蟲(chóng)，有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。因此，將蠶作為宿主接種蛹蟲(chóng)草菌進(jìn)行半人工培養(yǎng)以及藥化等方面的研究，為養(yǎng)蠶業(yè)開(kāi)辟了一條效益更好的新途徑，也為蟲(chóng)草生產(chǎn)提供了新資源。

3人工固體培養(yǎng)技術(shù)

蠶蛹雖是蛹蟲(chóng)草的理想培養(yǎng)基，但其生產(chǎn)具有一定的季節(jié)性，且蠶蛹在處理時(shí)較為復(fù)雜，易染雜菌，因此，尋找合適的有機(jī)培養(yǎng)基替代蠶蛹更有利于蛹蟲(chóng)草的大規(guī)模種植。1932年日本的小林等最先成功采用米飯?zhí)砑悠渌袡C(jī)物制成的培養(yǎng)基，成功培養(yǎng)出蛹蟲(chóng)草子座[1]，此后許多學(xué)者開(kāi)始了蛹蟲(chóng)草代料人工固體培養(yǎng)技術(shù)的研究。

目前，人工固體培養(yǎng)蛹蟲(chóng)草的培養(yǎng)基是以大米、小麥、高粱米、玉米、豆粉、木屑、棉籽殼粉等為主要基質(zhì)，并添加其他營(yíng)養(yǎng)成分，生產(chǎn)周期為45～60 d，且可采用玻璃瓶栽和淺盤(pán)栽培。在人工固體培養(yǎng)蛹蟲(chóng)草過(guò)程中，培養(yǎng)基的組分、環(huán)境因素及前體物質(zhì)的添加對(duì)蛹蟲(chóng)草子實(shí)體的生長(zhǎng)、產(chǎn)量及活性物質(zhì)含量均有影響。

3.1不同培養(yǎng)基對(duì)蛹蟲(chóng)草人工固體培養(yǎng)的影響

選擇合適的培養(yǎng)基有助于提高子實(shí)體產(chǎn)量，增加出草率以及降低生產(chǎn)成本。目前針對(duì)培養(yǎng)基優(yōu)化的研究結(jié)果不盡一致，其原因可能是所選蛹蟲(chóng)草菌株不同、培養(yǎng)條件不同等造成的。張顯科等認(rèn)為，大米是栽培蛹蟲(chóng)草的最佳培養(yǎng)基，此外高粱米、小米、玉米渣、蠶蛹等也可代替大米栽培蛹蟲(chóng)草[21]。馮景剛等研究認(rèn)為，小麥培養(yǎng)基培養(yǎng)的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體干重大，出草質(zhì)量好，優(yōu)于大米、玉米、小米等[22]。鐘冬暉等研究認(rèn)為，以大米為主要培養(yǎng)基，添加麥麩、玉米等混料培養(yǎng)基，更有利于子實(shí)體的萌發(fā)[23]。王栩等利用大米加豬血作為培養(yǎng)基，可提高蛹蟲(chóng)草子實(shí)體的產(chǎn)量[24]。以大米、小米等作為主要培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加一些碳源、氮源等更有利于子實(shí)體的萌發(fā)、生長(zhǎng)。在碳源方面，添加小分子的碳源如蔗糖、葡萄糖；在氮源方面，有機(jī)氮源優(yōu)于無(wú)機(jī)氮源，有機(jī)氮源中蠶蛹粉優(yōu)于蛋白胨、魚(yú)粉、蛋清液。

3.2環(huán)境因素對(duì)蛹蟲(chóng)草人工固體培養(yǎng)的影響

在蛹蟲(chóng)草子實(shí)體生長(zhǎng)過(guò)程中，除了培養(yǎng)基組成對(duì)其生長(zhǎng)產(chǎn)生影響外，環(huán)境因子濕度、溫度、光照、pH值、氧氣等對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲分化、子實(shí)體生長(zhǎng)都會(huì)產(chǎn)生一定影響。

有關(guān)光照的研究表明，蛹蟲(chóng)草菌絲體生長(zhǎng)階段不需要光照，強(qiáng)光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)有抑制作用，子實(shí)體分化階段則須要適當(dāng)光照處理。王菊鳳等研究認(rèn)為，蛹蟲(chóng)草菌絲體生長(zhǎng)要求黑暗的無(wú)光條件，子實(shí)體分化形成要求光照在150 lx以上，日光燈強(qiáng)光對(duì)子實(shí)體的生長(zhǎng)發(fā)育沒(méi)有不良影響；自然光光照度與子實(shí)體生物量呈負(fù)相關(guān)；子實(shí)體生長(zhǎng)過(guò)程中，日光燈光照度、溫度與子實(shí)體中的蟲(chóng)草素含量呈正相關(guān)；在子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，黑暗處理可增加子實(shí)體重量和直徑[25]。高曉梅等研究表明，50～100 lx弱光對(duì)蛹蟲(chóng)草原基分化、子實(shí)體誘導(dǎo)有促進(jìn)作用，光強(qiáng)1 000 lx條件下子實(shí)體生長(zhǎng)好、產(chǎn)量高，橙黃光條件下子實(shí)體的質(zhì)量和產(chǎn)量都有所提高[26]。Chen等研究發(fā)現(xiàn)，在子實(shí)體生長(zhǎng)階段進(jìn)行12 h黑暗/光照循環(huán)交替后，再進(jìn)行18 h或24 h的光照，比一直進(jìn)行光照培養(yǎng)更有利于子實(shí)體生長(zhǎng)[27]。付鳴佳等研究發(fā)現(xiàn)，藍(lán)光誘導(dǎo)有利于蛹蟲(chóng)草菌絲體類(lèi)胡蘿卜素含量的積累[28]。趙博等研究發(fā)現(xiàn)，生物磁效應(yīng)有助于蛹蟲(chóng)草中活性物質(zhì)蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草酸、多糖含量的積累[29]。

杜雙田等報(bào)道，蛹蟲(chóng)草發(fā)菌階段的最適溫度為22.7 ℃，轉(zhuǎn)色階段最適溫度為20.2 ℃，高溫、低溫均不利于轉(zhuǎn)色；當(dāng)子實(shí)體分化階段溫度為18.1 ℃時(shí)，子座雖然生長(zhǎng)較慢，但形成的子座粗而長(zhǎng)，產(chǎn)量高且商品性好，且適當(dāng)溫差有利于子實(shí)體原基的分化[30]。在蛹蟲(chóng)草菌絲體生長(zhǎng)階段最適pH值為 5.5～6.5，子實(shí)體生長(zhǎng)階段最適pH值為6.0左右。蛹蟲(chóng)草生長(zhǎng)過(guò)程中基質(zhì)含水量應(yīng)調(diào)控在60%～65%[1]。

3.3添加因子對(duì)蛹蟲(chóng)草生長(zhǎng)的影響

植物激素中的2，4-D、檸檬酸銨、秋水仙素、玉米素等，礦物質(zhì)元素中的K+、Mg2+、Ca2+等以及一些生物素可促進(jìn)子實(shí)體的生長(zhǎng)。肖正華研究了不同添加劑（2，4-D、玉米粉、檸檬酸三銨、秋水仙素、鏈霉素）對(duì)蛹蟲(chóng)草子實(shí)體生長(zhǎng)分化的影響，認(rèn)為2，4-D、檸檬酸三銨可縮短蛹蟲(chóng)草的生長(zhǎng)周期，提高子實(shí)體產(chǎn)量，玉米粉對(duì)提高蛹蟲(chóng)草子實(shí)體產(chǎn)量的影響不明顯，秋水仙素、鏈霉素可誘導(dǎo)原基分化，增強(qiáng)培養(yǎng)基的抑菌能力，同時(shí)提高子實(shí)體產(chǎn)量[31]。步嵐等研究發(fā)現(xiàn)，真菌激發(fā)子疫霉（Phytophthora sp.）YL粗提物可提高蟲(chóng)草素含量[32]。張緒璋研究認(rèn)為，添加中草藥淫羊藿可提高蛹蟲(chóng)草的蛋白質(zhì)、氨基酸含量。此外，赤霉素以及吲哚乙酸、玉米素等植物激素均對(duì)子實(shí)體生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用[33]。

4液體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)

液體發(fā)酵培養(yǎng)一般用來(lái)生產(chǎn)蛹蟲(chóng)草菌絲體，也有報(bào)道指出，靜置發(fā)酵可生產(chǎn)蛹蟲(chóng)草子實(shí)體。

液體發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)較人工固體培養(yǎng)技術(shù)具有明顯的優(yōu)點(diǎn)。一是菌絲生長(zhǎng)速度快，菌絲體產(chǎn)量高；二是可以提高蛹蟲(chóng)草的代謝產(chǎn)物（蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖等）的產(chǎn)量；液體培養(yǎng)克服了直接從蛹蟲(chóng)草子實(shí)體中提取代謝產(chǎn)物勞動(dòng)量大、耗時(shí)多、產(chǎn)量低等缺點(diǎn)；三是便于工業(yè)化生產(chǎn)。由于蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵技術(shù)的理化條件易于控制、便于機(jī)械化操作、生產(chǎn)工藝規(guī)范、生產(chǎn)周期短、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定、產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)，使得蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵技術(shù)受到廣泛研究。研究還表明，液體深層發(fā)酵得到的菌絲體不但具有與子實(shí)體相當(dāng)?shù)臓I(yíng)養(yǎng)價(jià)值及藥用效果，還可以得到胞外多糖等子實(shí)體所不具備的營(yíng)養(yǎng)保健成分。

近年來(lái)對(duì)蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵培養(yǎng)的研究表明，不同碳源、氮源、碳氮比、無(wú)機(jī)元素以及培養(yǎng)基溫度、pH值等環(huán)境因素對(duì)于蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)和活性物質(zhì)的產(chǎn)量均有影響。

4.1培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分

培養(yǎng)基組成直接影響蛹蟲(chóng)草菌絲體的生長(zhǎng)及生物活性物質(zhì)產(chǎn)量，因此尋找最優(yōu)的培養(yǎng)基組成一直是蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)研究的重點(diǎn)。由于蛹蟲(chóng)草菌株篩選的優(yōu)化指標(biāo)及采用優(yōu)化方法不同，所篩選出的最佳營(yíng)養(yǎng)配方也各有差異。國(guó)內(nèi)外很多學(xué)者針對(duì)蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)基進(jìn)行了大量研究，其中大多數(shù)是以蛹蟲(chóng)草菌絲體為篩選指標(biāo)進(jìn)行的，此外還有以生物活性物質(zhì)蟲(chóng)草素及胞外多糖含量等為指標(biāo)進(jìn)行篩選的。

Park等研究認(rèn)為，蔗糖、玉米粉為蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)產(chǎn)菌絲體的最適碳源和氮源[34]。陳晉安等以菌絲體生長(zhǎng)為指標(biāo)，得出最適蛹蟲(chóng)草發(fā)酵的液體培養(yǎng)基組分為蔗糖50 g/L、玉米漿30 g/L、酵母膏 5 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、KH2PO4 0.5 g/L[35]。牛帥科等以菌體干重為指標(biāo)，研究認(rèn)為適合蛹蟲(chóng)草菌的液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基為葡萄糖 53.36 g/L、蛋白胨 26.72 g/L、MgSO4·7H2O 2.20 g/L、KH2PO4 0.5 g/L[36]。文庭池等研究發(fā)現(xiàn)，蔗糖、蛋白胨、MgSO4·7H2O、KH2PO4、NAA（萘乙酸）為蛹蟲(chóng)草生長(zhǎng)的最佳碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽及生長(zhǎng)因子[37]。

Mao等研究認(rèn)為，有利于蛹蟲(chóng)草蟲(chóng)草素積累的最佳氮源為蛋白胨，最佳碳源為葡萄糖，當(dāng)碳氮比為2.65時(shí)（42.0 g/L葡萄糖和15.8 g/L蛋白胨），蟲(chóng)草素含量達(dá)到最大值[38]。Shih等研究表明，適合蛹蟲(chóng)草菌株（cordyceps militaris CCRC 32219）高產(chǎn)蟲(chóng)草素液體培養(yǎng)的氮源為45 g/L酵母提取物[39]。Cui等研究發(fā)現(xiàn)，適合胞外多糖的最優(yōu)培養(yǎng)基為葡萄糖48.67 g/L、蛋白胨12.56 g/L、KH2PO4 1 g/L、酵母提取物 10 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L[40]。此外，于田田等研究了富硒蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)基，認(rèn)為最適培養(yǎng)基為大豆粉30 g/L、蔗糖 40 g/L、KH2PO4 1.5 g/L、硫胺素50 μg/L、Na2SeO3 12 mg/L[41]。通過(guò)對(duì)上述文獻(xiàn)進(jìn)行總結(jié)，發(fā)現(xiàn)適合蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)的碳源為小分子碳源，主要為蔗糖、葡萄糖；而氮源方面用得較多的為蛋白胨和酵母提取物。

4.2培養(yǎng)條件

液體培養(yǎng)條件主要涉及培養(yǎng)溫度、pH值、通風(fēng)量、發(fā)酵時(shí)間、光照等條件。 鄭婷婷等研究認(rèn)為，接種量10%（V/V）、初始pH值 7.0、發(fā)酵溫度27 ℃、發(fā)酵時(shí)間4 d為蛹蟲(chóng)草菌絲體液體培養(yǎng)的最適條件[42]。歐陽(yáng)召等研究了適合蟲(chóng)草素積累的蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)條件，發(fā)現(xiàn)最適條件為pH值 7.0、溫度 25 ℃、光照時(shí)間12 h[43]。Kwon等研究發(fā)現(xiàn)最適產(chǎn)胞外多糖的蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)條件為24 ℃、pH值自然、200 r/min、1.5 vvm的通氣量[44]。研究還發(fā)現(xiàn)，不同波長(zhǎng)的光對(duì)蟲(chóng)草素含量、腺苷含量以及菌絲體生長(zhǎng)產(chǎn)生重要影響；對(duì)于蟲(chóng)草素積累來(lái)說(shuō)，藍(lán)光>粉紅色光>白光、黑暗、紅光；對(duì)于腺苷積累來(lái)說(shuō)，紅光>粉紅色光、黑暗、白光、藍(lán)光；對(duì)于菌絲體生長(zhǎng)來(lái)說(shuō)，紅光>粉紅色光、黑暗、白光>藍(lán)光[45]。

4.3添加物

液體培養(yǎng)基組成除了基本碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽成分外，常添加一些添加物以提高蛹蟲(chóng)草產(chǎn)活性物質(zhì)的產(chǎn)量。研究發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基中添加蟲(chóng)草素的前體物質(zhì)腺嘌呤、腺苷酸、甘氨酸、精氨酸、L-天門(mén)冬氨酸、L-谷氨酰胺可提高蟲(chóng)草素含量[46]。Mn、Fe、Se、Cu、Zn、Ca等金屬元素及NH+4也有助于蟲(chóng)草素的生成[39，47-48]。植物油中的葵花籽油有助于胞外高分子聚合物的分泌，橄欖油有助于菌絲體生長(zhǎng)；油酸和棕櫚酸能促進(jìn)胞外高分子聚合物的分泌，亞油酸能顯著促進(jìn)菌絲體的生長(zhǎng)和胞外高分子聚合物的分泌[49]。此外，家蠶蛾油對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲體的生長(zhǎng)及胞外高分子聚合物的分泌也有促進(jìn)作用，并可增加菌絲體中胞內(nèi)多糖的含量和發(fā)酵液中胞內(nèi)多糖的產(chǎn)量[50]。昆蟲(chóng)激素中蛻皮激素能促進(jìn)蟲(chóng)草素的產(chǎn)生，一定劑量的保幼激素Ⅲ可加快蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)過(guò)程中的生長(zhǎng)代謝，使胞內(nèi)多糖含量、胞外多糖含量和蟲(chóng)草素含量的最大值提前出現(xiàn)。植物生長(zhǎng)素中萘乙酸對(duì)蟲(chóng)草素提高也有促進(jìn)作用。

5研究展望

蛹蟲(chóng)草作為一種重要的、具有較高保健價(jià)值的食藥用真菌，對(duì)其研究和開(kāi)發(fā)已成為國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。人工固體培養(yǎng)技術(shù)是目前替代蠶蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)技術(shù)獲得子實(shí)體的市場(chǎng)化培養(yǎng)技術(shù)，但在人工固體培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基組成及培養(yǎng)條件是影響子實(shí)體質(zhì)量和產(chǎn)量的關(guān)鍵因素。由于液體培養(yǎng)技術(shù)具有接種方便、發(fā)菌快速、生產(chǎn)期短、易于控制等優(yōu)點(diǎn)，是目前獲得菌絲體及提取蛹蟲(chóng)草活性物質(zhì)的主要培養(yǎng)技術(shù)，特別是隨著蛹蟲(chóng)草中活性物質(zhì)蟲(chóng)草素的保健價(jià)值和藥用價(jià)值被不斷證實(shí)，使得市場(chǎng)對(duì)于蟲(chóng)草素產(chǎn)量的需求日趨增加，因此快速、高效獲得蟲(chóng)草素的液體培養(yǎng)技術(shù)具有極大的發(fā)展?jié)摿?。此外，蛹蟲(chóng)草菌種的退化問(wèn)題是蛹蟲(chóng)草培養(yǎng)過(guò)程中的關(guān)鍵性技術(shù)難題，因此未來(lái)可加大對(duì)蛹蟲(chóng)草菌種退化機(jī)制的研究，進(jìn)而選育出高產(chǎn)、穩(wěn)定以及具有特定功能（如高蟲(chóng)草素）的蛹蟲(chóng)草優(yōu)良菌種。

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