★ 李素梅 畢曉黎 羅文匯

(廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院 廣東 廣州 510095)

復(fù)方三芪丹膠囊由三七、黃芪、丹參、桑葚四味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰，活血祛瘀之功效。主要用于氣陰兩虛、瘀血阻滯所致疲倦乏力、腰膝酸軟、口干多飲善饑、小便頻數(shù)，以及2型糖尿病并發(fā)心腦血管病、腎病等，具有療效確切，毒副作用較小等特點(diǎn)。為提高復(fù)方三芪丹膠囊的質(zhì)量控制，增加其中丹參所含有效成分丹參酮ⅡA的定量測定，采用高效液相色譜法測定制劑中所含丹參酮ⅡA含量。

1 儀器、試劑與試樣

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀(美國)；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；Mettler XS205DU電子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)。

1.2 試劑與試樣 丹參酮ⅡA對照品(批號：110766-200619)，購于中國食品藥品檢定研究院；復(fù)方三芪丹膠囊(批號：20130506、20130507、20130508)由廣東省第二中醫(yī)院制劑室提供)；甲醇為色譜純試劑(一級)，水為屈臣氏蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對照品10.15mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取貯備液2mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，制得每1mL含丹參酮ⅡA16.24μg的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品內(nèi)容物約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率50kHz)30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例，取缺丹參的其他各味藥，按制備工藝加工制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.2 色譜條件[1]色譜柱：Agilent Extend C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫：20℃；流動相：甲醇-水(75∶25)；流速：0.8mL/min；檢測波長：270nm；進(jìn)樣量：5μL。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA計算應(yīng)不低于2000。在上述色譜條件下，丹參酮ⅡA色譜峰與其他色譜峰能較好分離，陰性對照溶液在丹參酮ⅡA色譜峰相應(yīng)位置上無吸收峰，說明陰性對照無干擾，色譜圖見圖1。

A.丹參酮ⅡA對照品；B.供試品；C.陰性對照

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取上述對照品貯備液0.5mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL置25mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋定容至刻度，分別制成濃度為4.06，8.12，16.24，24.36，32.528，40.6μg/mL的對照品溶液，各進(jìn)樣5μL，按上述色譜條件測定，以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。得回歸方程為Y=7823.5X+0.2381(r=1.0000)。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA在0.0203～0.203μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 取復(fù)方三芪丹膠囊(批號：20130506)，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液5μL注入液相色譜儀，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件分析，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定樣品中丹參酮ⅡA峰面積。結(jié)果丹參酮ⅡA峰面積RSD為0.14%，表明儀器精密度良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批次復(fù)方三芪丹膠囊(批號：20130506)，精密稱取6份，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件分析，測定每份樣品中丹參酮ⅡA含量，結(jié)果樣品中丹參酮ⅡA平均含量為0.53mg/g，RSD為0.63%，表明本方法重現(xiàn)性好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別精密吸取同一份供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h進(jìn)樣5μL，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件分析，測定樣品中丹參酮ⅡA峰面積。結(jié)果丹參酮ⅡA峰面積RSD為0.21%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的樣品(批號：20130506)約0.75g，9份，精密稱定重量，精密加入一定量的丹參酮ⅡA對照品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 丹參酮ⅡA加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.8 樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，計算含量。結(jié)果見表2。

表2 丹參酮ⅡA含量測定結(jié)果(n=3，/mg·g-1)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)參照《中國藥典》2010年版一部丹參藥材項(xiàng)下方法丹參酮ⅡA含量測定方法，并稍作調(diào)整，建立了HPLC法測定復(fù)方三芪丹膠囊中丹參酮ⅡA含量的方法。實(shí)驗(yàn)過程中對比了超聲處理和加熱回流提取效果，結(jié)果丹參酮ⅡA提取量差別不大，故選擇較為簡便易行的超聲處理。流動相流速方面，分別考察了1mL/min、0.8mL/min，供試品的分離情況，結(jié)果以0.8mL/min分離效果較好，其他成分峰對丹參酮ⅡA峰不產(chǎn)生干擾。實(shí)驗(yàn)證明，本方法簡便、準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，適用于復(fù)方三芪丹膠囊中丹參酮ⅡA的含量測定，可用于復(fù)方三芪丹膠囊的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中國藥典(2010年版一部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：70.