★ 徐駿軍 王國(guó)偉 熊友香* 尤志勉

(浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 浙江 杭州 310053)

了哥王為瑞香科蕘花屬南嶺蕘花Wikstroemiaindica(L.)C.A.Mey.的干燥根皮，性味苦寒、微辛，有毒，主治跌打損傷，散瘀止痛；分布于江西、浙江、湖南、廣東、廣西等地[1]，為民間常用中草藥?，F(xiàn)代藥理及臨床研究表明，了哥王具有消炎、解毒、鎮(zhèn)痛等功效，用于治療支氣管炎、肺炎、扁桃體炎、乳腺炎、蜂窩組織炎等癥[2-5]。通過(guò)蛋清法致小鼠足腫脹預(yù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)乙酸乙酯層、正丁醇層、水層提取物抗炎效果進(jìn)行了預(yù)篩選，結(jié)果顯示乙酸乙酯層和水層與空白組比較有顯著差異(P<0.05)。本研究通過(guò)蛋清法致小鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)及炎癥部位PGE2含量測(cè)定，確定了哥王的抗炎有效部位。

1 材料

1.1 藥物與試劑 阿司匹林腸溶片(南京白敬宇制藥有限責(zé)任有限公司，批號(hào)：060912)；甲醇(杭州化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20070509)；氫氧化鈉(杭州蕭山化學(xué)試劑廠，批號(hào)：20040522)；了哥王乙酸乙酯層提取物(自制)。

1.2 儀器 UV-2450紫外分光光度計(jì)(日本島津公司生產(chǎn))。

1.3 動(dòng)物 昆明種小鼠(20±2)g，SPF級(jí)，浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試藥物的制備 取了哥王藥材粗粉50g置于圓底燒瓶，加入石油醚500mL，水浴回流提取3 h，至石油醚呈無(wú)色，棄去石油醚層；將藥材中的溶劑揮干，再用500mL乙酸乙酯水浴回流提取至無(wú)色，合并提取液，將乙酸乙酯提取物濃縮至干，置真空干燥箱內(nèi)干燥至恒重，得乙酸乙酯層提取物3.2 g，得率為6.4%。用蒸餾水配成不同濃度的混懸液(生藥含量分別為：0.72，0.54，0.36 g/mL)。

2.2 陽(yáng)性對(duì)照藥物的制備 取6片阿司匹林腸溶片(0.25 mg/片)，研成粉末，用10 mL蒸餾水溶解得阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照藥物溶液(0.15 mg/mL)。

2.3 蛋清法致小鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)[6]取昆明種小鼠50只，雄性，按體重隨機(jī)分成5組，分別為了哥王乙酸乙酯提取物高、中、低三個(gè)劑量組(生藥含量分別為：0.72，0.54，0.36 g/mL)、阿司匹林陽(yáng)性藥組(0.15 mg/mL)、空白對(duì)照組。每組給藥量均為0.2 mL/10g，空白對(duì)照組按0.2 mL/10g給予蒸餾水；每天灌胃1次，連續(xù)灌胃7 d，末次給藥后1 h后于每鼠右側(cè)足皮下注射1%蛋清0.05 mL，4 h后沿踝關(guān)節(jié)剪切左右兩足，稱重，計(jì)算腫脹度(左右足重量差值)和抑制率。抑制率=(1-用藥組腫脹度均值/空白對(duì)照組腫脹度均值)×100%。

2.4 對(duì)炎癥小鼠腫脹足中PGE2含量影響實(shí)驗(yàn)[6,7]剪碎由2.3項(xiàng)得到的腫脹足，加生理鹽水5 mL浸泡1 h，取出，離心浸泡液，吸取上清液0.1 mL，加0.5 mol/L甲醇溶液2 mL，在50℃下異構(gòu)化20min，用甲醇稀釋至20mL，置紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(λ=278nm)測(cè)定OD值，以每克炎性組織相當(dāng)?shù)腛D值表示PGE2的含量。

2.5 結(jié)果 蛋清法致小鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)和炎癥小鼠腫脹足中PGE2含量影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

表1 各組小鼠足腫脹度、腫脹抑制率比較

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05。

表2 對(duì)炎癥小鼠腫脹足中PGE2含量的影響

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05。

3 討論

本研究通過(guò)蛋清法致小鼠足腫脹預(yù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)乙酸乙酯層、正丁醇層、水層提取物抗炎效果進(jìn)行了預(yù)篩選，結(jié)果顯示乙酸乙酯層和水層與空白組比較有顯著差異(P<0.05)；結(jié)合抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果[8]，本課題選取乙酸乙酯部位進(jìn)行抗炎藥效研究。通過(guò)小鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)，測(cè)定足腫脹度、腫脹抑制率，及小鼠炎癥部位中PGE2含量來(lái)研究乙酸乙酯層提取物的抗炎作用，并探討其初步機(jī)制。

結(jié)果表明，高劑量組和中劑量組小鼠足腫脹度明顯降低(P<0.05)，腫脹抑制率分別為44.75%、38.49%、29.26%。由以上結(jié)果推斷，了哥王乙酸乙酯部位對(duì)蛋清法致小鼠足腫脹具有顯著抑制作用。高劑量組和中劑量組小鼠腫脹足中PGE2含量明顯降低(P<0.05)，可以推測(cè)其抗炎機(jī)制是通過(guò)抑制炎癥部位PGE2的分泌而起作用。

[1]浙江植物志編委.浙江植物志·第四卷[M].杭州:浙江科學(xué)技術(shù)出版社,1998:255-256.

[2]柯雪紅,王麗新,黃可兒,等.了哥王片抗炎消腫及鎮(zhèn)痛作用研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2003,14(10):603-604.

[3]李雨田,顧雪竹,張村,等.了哥王的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(24):252-255.

[4]楊振宇,杜智敏.了哥王水煎液的抑菌作用研究[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006,40(5):362-364.

[5]方鋁,朱令元,劉維蘭,等.了哥王片抗炎抑菌作用的試驗(yàn)研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2000,7(1):28-29.

[6]李勇文,李麗,李植飛,等.五味藤抗炎作用及其機(jī)制初探[J].中國(guó)中醫(yī)急癥,2006,15(8):898-900.

[7]邢建峰,侯家玉,鄒節(jié)明,等.潰結(jié)康膠囊的抗炎作用機(jī)制[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2005,25(9):817-820.

[8]熊友香,尤志勉,程?hào)|慶,等.了哥王不同提取部位抑菌作用研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2008,15(10):42-43.