王希東 范莉莉 李文俊 張正臣

·藥物研究·

康腎口服液的最佳制備工藝研究

王希東 范莉莉 李文俊 張正臣

目的 研究康腎口服液的最佳制備工藝。方法比較水提法、雙提法、醇提法3種提取方法，并對優(yōu)者用正交設(shè)計法進行優(yōu)化，考察提取溫度、提取時間和提取次數(shù)3個因素。每個因素確定為2水平，選擇L8(27)表。并按獲得的最佳制備工藝進行連續(xù)3批試制。結(jié)果提取溫度為最大影響因素，然后依次為提取時間、提取次數(shù)；連續(xù)試制3批，效果穩(wěn)定。結(jié)論所得康腎口服液最佳制備工藝，方法穩(wěn)定可靠。

康腎口服液；正交設(shè)計；制備工藝

康腎口服液是根據(jù)中醫(yī)理論和現(xiàn)代藥理研究成果擬定的院內(nèi)協(xié)定處方。本制劑由人參、黃芪、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、山藥、地龍、紅花、金櫻子、芡實、甘草為原料制備而成，具有益氣溫陽，固本澀精，活血通絡(luò)的作用和功效。用于慢性腎炎、腎病綜合征、陽痿早瀉。為了保證制劑質(zhì)量，本文對其最佳提取工藝進行研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 人參、黃芪、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、山藥、地龍、紅花、金櫻子、芡實、甘草均符合《中國藥典》2010年版一部有關(guān)規(guī)定，購自河南省新鄉(xiāng)市藥材公司。人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品，中國藥品生物制品檢定所提供。高效液相色譜儀HP1100，美國惠普公司生產(chǎn)。

1.2 實驗內(nèi)容

1.2．1 提取方法

1.2.1.1 水煎煮提?。航?jīng)預(yù)試驗，根據(jù)正交設(shè)計選出了最佳提取條件，即按處方比例稱取各味藥材共175 g，粉碎成10目粗粉，加水煎煮3次，40 min/次，水提液部分趁熱濾過，濾液濃縮至相對密度為1.31～1.34的稠膏(70℃)，干燥。得樣品A。

1.2.1.2 雙提法提?。航?jīng)預(yù)試驗，根據(jù)正交設(shè)計選出了最佳提取條件，即按處方稱取各味藥材共175 g,粉碎成10目粗粉，加水煎煮3次，40 min/次，水提液部分趁熱濾過，濾液濃縮至適量，放冷，加入95%乙醇使其達含醇量60%，靜置24 h，取上清液，回收乙醇至無醇昧，濃縮至相對密度為1.31～1.34的稠膏(70℃)，干燥。得樣品B。

1.2.1.3 不同濃度乙醇提取[1，2]：稱取1/2量上述各味藥材各3份，分別用20%、40%、50%、60%、70%、85%、90% 乙醇提取2次，溶媒量為8倍，每次提取時間為2 h。醇提取液合并，回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為1.31～1.34的稠膏(70℃)，干燥。得樣品 C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7。

1.2.2 考察指標(biāo)及方法

1.2.2.1 樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量測定方法：人參為方中主要藥味，本法采用高效液相法對方中人參以人參皂苷Rg1、人參皂苷Re為指標(biāo)進行含量測定。①色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱為Diamonsil C18(4.6×150 mm，5 μm)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(18∶82)為流動相；流速為1.0 ml/min；柱溫為30℃；檢測波長為 203 nm。理論板數(shù)按人參皂苷Rg1計算應(yīng)不低于6 000。②對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每毫升各含0.2 mg的混合溶液，搖勻，即得。③供試品溶液的制備 取本品10 ml,用水飽和正丁醇振搖提取3次(30、20、10 ml)，合并正丁醇液，依次用氨試液20 ml，水20 ml洗滌，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。④測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算出供試品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量，即得。

1.2.2.2 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量測定線性關(guān)系試驗 取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re混合對照品溶液(含人參皂苷Rg1為0.53 mg/ml、含人參皂苷Re為0.37 mg/ml)，精密量取1、2、3、4、5 ml，置10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取各10 μl，分別注入液相色譜儀，人參皂苷Rg1回歸方程為Y=1E+06X，相關(guān)系數(shù)r=0.9996；人參皂苷Re回歸方程為Y=2E+06X，相關(guān)系數(shù)r=0.9997。測定峰面積，結(jié)果見表1。以峰面積(X)對進樣濃度(C，mg/ml)進行線性回歸，人參皂苷Rg1濃度在0.053～0.265 mg/ml范圍內(nèi)，峰面積與濃度線性關(guān)系良好，人參皂苷Re濃度在0.037～0.185 mg/ml范圍內(nèi)，峰面積與濃度線性關(guān)系良好。

表1 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re線性關(guān)系試驗結(jié)果

1.2.2.3 精密度試驗：取線性關(guān)系試驗項下的3號溶液，精密量取10 μl，連續(xù)測定6次。峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差RSD<2%。見表2。

表2 精密度試驗結(jié)果

1.2.2.4 回收率測定：取已知含量的樣品，加人參皂苷Rg1對照品溶液(0.53 mg/ml)2.5 ml和人參皂苷Re對照品溶液(0.37 mg/ml)2 ml，按供試品溶液制備方法制備，測定峰面積，計算測得量，結(jié)果平均回收率為99.12%，RSD為1.02%。見表3。

表3 回收率測定結(jié)果

1.2.2.5 穩(wěn)定性試驗：取同一批樣品，按含量測定項下方法制備樣品，得樣品供試品溶液；取供試品溶液與對照品溶液，于0 h、1 h、2 h、4 h、8 h及24 h分別進樣，每次進樣量10 μl，記錄峰面積值。見表4。

2 結(jié)果

2.1 3種方法人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量比較 水提取法中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re損失較大，原因是常規(guī)水提法提取人參皂苷時，過濾十分困難，是由于人參中粘多糖與濾紙纖維形成一種膜狀物質(zhì)阻礙了提取液的抽濾。雙提法對康腎口服液中主要藥味人參的有效成分提取較完全，而不同提取溫度、不同提取時間、不同提取次數(shù)提取，效果不同，因此對雙提法工藝進行優(yōu)化。見表5。

表4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

表5 三種方法人參皂苷Rg1、人參皂苷Re含量的比較

2.2 因素-水平的確定 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re溶于水中，采用水作溶媒進行提取。重點考察因素為提取溫度、提取時間和提取次數(shù)3個因素。每個因素確定為2水平。見表6。

表6 正交實驗因素水平表

2.3 正交設(shè)計表的選擇 根據(jù)因素-水平及自由度，試驗次數(shù)為8，考慮因素之間的交互作用，選擇L8(27)表，根據(jù)正交設(shè)計表及因素-水平表。見表7。

2.4 試驗方差分析 只有A因素效應(yīng)獲顯著性意義(P<0.01)；其他均未獲顯著性意義，故可認(rèn)為影響提取工藝的主要因素是A因素，獲得提取工藝相對最優(yōu)組合以提取量最高者為好，即A2B2C2，在100℃提取40 min，提取次數(shù)為3次。見表8。

表7 正交試驗實施方案及計算表

表8 正交試驗方差分析

注：經(jīng)查F值表，F(xiàn)0.05(1,2)=18.5，F(xiàn)0.01(1,2)=98.5，F(xiàn)0.05(1,4)=7.71，F(xiàn)0.01(1,4)=21.2

3 討論

人參為康腎口服液的主要藥材，關(guān)于其提取很多報道。本實驗分別用水煎煮法、雙提法、醇提法進行比較研究，發(fā)現(xiàn)由于常規(guī)水提法提取人參皂苷時，過濾十分困難，是由于人參中粘多糖與濾紙纖維形成一種膜狀物質(zhì)阻礙了提取液的抽濾。同時，不同提取溫度、不同提取時間、不同提取次數(shù)提取，效果不同，因此對雙提法工藝進行優(yōu)化。得最佳制備工藝，并連續(xù)3批按法試制，結(jié)果穩(wěn)定可靠。

1 吳清，李云谷，杜守穎，等.當(dāng)歸、川芎提取工藝研究.中國實驗方劑學(xué)雜志，1995，5：17-18.

2 張品，陳全成，鄭毅丹,等.不同提取方法對人參皂苷提取率的影響.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2003,25：71-72.

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10.3969/j.issn.1002-7386.2014.03.054

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張正臣，453000 中國人民解放軍第371中心醫(yī)院；

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1002-7386(2014)03-0437-03

2013-07-22)