劉影 張文真 張國華 李望

·論著·

妊娠期高血壓疾病患者胎盤共刺激分子B7-1和B7-2的研究

劉影 張文真 張國華 李望

目的 探討妊娠期高血壓疾病患者胎盤巨噬細(xì)胞共刺激分子B7-1、B7-2的表達(dá)水平，探討B(tài)7-1、B7-2和B7-1/B7-2在發(fā)病中的作用。方法采集28例子癇前期患者(包括12例輕度和16例重度)，12例妊娠期高血壓患者，12例正常妊娠婦女的胎盤巨噬細(xì)胞，用流式細(xì)胞技術(shù)分別測B7-1、B7-2的表達(dá)率。結(jié)果子癇前期患者B7-1/B7-2(0.75±0.13)均高于其余各組(P<0.05)，子癇前期組胎盤B7-1(19.50±4.05%)高于其它各組(P<0.05)，結(jié)論妊娠期高血壓疾病患者胎盤局部B7-1的過度表達(dá)及B7-2和B7-1/B7-2失衡可能是其發(fā)生的重要原因。

妊娠期高血壓疾病；子癇前期；抗原遞呈細(xì)胞；共刺激分子；B7-1；B7-2；胎盤

妊娠期高血壓疾病是妊娠期特有的疾病，妊娠終止后多數(shù)病理變化可以逆轉(zhuǎn)，說明胎盤這一器官可能在妊娠期高血壓疾病發(fā)病中起到重要作用。胎盤是連接母體與胎兒的主要組織，產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場所，在母胎界面的免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。研究表明妊娠期高血壓疾病時(shí)母體免疫反應(yīng)由T輔助細(xì)胞2型(Th2)占優(yōu)勢(shì)的保護(hù)性反應(yīng)轉(zhuǎn)向了以T輔助細(xì)胞1型(Th1)占優(yōu)勢(shì)的排斥反應(yīng)，即Th1/Th2失衡[1]。本研究使用流式細(xì)胞技術(shù)測定妊娠期高血壓疾病患者抗原遞呈細(xì)胞(antigen presenting cell，APC)外周血單核細(xì)胞共刺激分子B7-1和B7-2的表達(dá)水平，探討它們?cè)赥h1/Th2失衡及誘導(dǎo)妊娠免疫耐受和導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 試驗(yàn)組：選取2004年12月至2005年5月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的妊娠期高血壓疾病患者40例,其中妊娠期高血壓患者12例(妊娠期高血壓組)，子癇前期患者28例(子癇前期組，包括輕度12例和重度16例)。診斷按樂杰主編的全國統(tǒng)編教材《婦產(chǎn)科學(xué)》第6版妊娠期高血壓疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照組：同期住院分娩的正常孕婦12例(正常妊娠組)孕婦均為初孕婦，無多胎妊娠，無慢性高血壓、血糖正常、無反復(fù)流產(chǎn)史、慢性腎病、未經(jīng)生殖技術(shù)幫助、無免疫性疾病、未經(jīng)免疫藥物治療。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 鼠抗人FITC-B7-1、PE-B7-2及陰性對(duì)照均購自美國Becton-Dickinson公司。RPMI-1640粉末：美國GIBCO公司產(chǎn)品。

1.3 方法

1.3.1 胎盤取材及巨噬細(xì)胞分離：3組孕婦胎盤娩出后，取胎盤母面中央1 cm×1 cm×1 cm,用帖壁法分離純化的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞。將制成的單核細(xì)胞懸液在12 h內(nèi)送流式檢驗(yàn)B7-1、B7-2表達(dá)率。

1.3.2 流式法檢測B7-1、B7-2表達(dá)率流式法檢測B7-1和B7-2表達(dá)率：取單細(xì)胞懸液1×106/ml，加入鼠抗人單克隆抗體0.1 ml，室溫孵育30 min，加入PBS 10 ml 洗滌1次，棄上清，加入羊抗鼠二抗0.1 ml，避光室溫孵育30 min，加入PBS 10 ml離心，棄上清以除去未結(jié)合的熒光二抗，同時(shí)設(shè)本底對(duì)照和陰性對(duì)照。應(yīng)用Expo32ADC進(jìn)行免疫熒光數(shù)據(jù)分析。以熒光指數(shù)(FI)表示它們的相對(duì)含量。

2 結(jié)果

2.1 臨床特征 各組實(shí)驗(yàn)對(duì)象在年齡上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)，子癇前期組在分娩孕周、MAP、新生兒體重與后2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，后2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

組別年齡(歲)分娩孕周(周)MAP(mmHg)新生兒體重子癇前期組(n=28)27．7±3．135．3±2．2?#△ 125±10?#△ 2307±512?# 輕度(n=12)28．0±2．936．6±2．6119±5 2596±563 重度(n=16)27．5±3．433．3±3．7128±10 1938±647妊娠期高血壓組(n=12)27．5±3．038．2±0．9#106±4?# 3521±324正常妊娠租(n=12)27．3±2．639．0±1．086±3△ 3539±327

注：與妊娠期高血壓組比較，*P<0.05；與正常妊娠組比較，#P<0.05；與正常未孕組比較，△P<0.05

2.2 各組孕婦胎盤組織巨噬細(xì)胞B7-1、B7-2表達(dá)率及B7-1/B7-2比率 PE組胎盤巨噬細(xì)胞B7-1表達(dá)率高于其它各組(P<0.05)， PE組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。妊娠期高血壓患者B7-1表達(dá)率高于正常妊娠婦女，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。子癇前期組胎盤組織巨噬細(xì)胞B7-2表達(dá)率高于其它各組(P<0.05)；PE組間無顯著性差異(P>0.05)。妊娠期高血壓組與正常妊娠組相似，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。子癇前期患者胎盤組織巨噬細(xì)胞B7-1/B7-2比率均高于其余各組(P<0.05)，重度PE組高于輕度PE組 (P<0.05)。妊娠期高血壓組也高于正常妊娠組(P<0.05)。見表2。

表2 各組胎盤B7-1、B7-2及B7-1/B7-2比率比較

注：與妊娠期高血壓組比較，*P<0.05；與正常妊娠組比較，#P<0.05；與子癇前期組比較，△P<0.05

2.3 不同分娩孕周的分組情況 根據(jù)分娩孕周不同，將子癇前期組分為<37周和≥37周2組，2組比較各數(shù)值均差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

周別孕周B7?1(%)B7?2(%)B7?1/B7?2<37周(n=17)34．0±1．410．8±2．818．9±3．20．58±0．09≥37周(n=11)38．1±1．310．0±1．119．2±2．10．55±0．08

3 討論

胚胎是一半同種異物，妊娠成功有賴于胎兒-母體間的免疫平衡，如這種平衡一旦失調(diào)，即可導(dǎo)致發(fā)生排斥反應(yīng)，導(dǎo)致妊娠并發(fā)癥妊娠期高血壓疾病的發(fā)生[2]。胎盤作為一個(gè)免疫器官，一個(gè)母體與胎兒直接接觸面，是發(fā)生和影響免疫反應(yīng)的重要部位。胎兒從未與母體組織直接接觸，母胎免疫調(diào)控機(jī)制可能僅發(fā)生于胎盤的母胎界面處[3]。 胎盤中免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子在維持正常妊娠中均起著重要的免疫調(diào)節(jié)作用。其中胎盤巨噬細(xì)胞表達(dá)MHC-II類抗原，執(zhí)行抗原遞呈功能，其還可分泌多種細(xì)胞因子和某些生物活性物質(zhì)，胎盤巨噬細(xì)胞被認(rèn)為母胎界面局部影響免疫反應(yīng)的最重要的免疫細(xì)胞。

本研究發(fā)現(xiàn)，正常晚期妊娠時(shí)B7-2表達(dá)水平升高，B7-1的表達(dá)處于低水平，妊娠期高血壓疾病患者胎盤巨噬細(xì)胞B7-1的表達(dá)顯著高于正常妊娠組，而B7-2的表達(dá)低于正常妊娠組。在子癇前期尤其如此。因此我們推斷這一變化使Th2免疫反應(yīng)減弱，Th1免疫反應(yīng)增強(qiáng)，使Th1/Th2比率失衡，血清中Th1型細(xì)胞因子如TNF-α等濃度升高，滋養(yǎng)細(xì)胞功能受損，胎盤床血管重鑄障礙，胎盤循環(huán)缺血、缺氧，血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，從而引起一系列的細(xì)胞因子的異常變化，導(dǎo)致全身小血管痙攣而致妊娠期高血壓疾病的發(fā)生。因?yàn)?，已?jīng)證實(shí)， B7-1主要刺激CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，而B7-2主要協(xié)同刺激CD4+T細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化[4]。這一結(jié)果也正好用來解釋為何正常妊娠是Th2偏離現(xiàn)象[5]。這一結(jié)論為妊娠期高血壓疾病的臨床治療開辟新的途徑。

本研究還發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓組和正常妊娠組患者胎盤表達(dá)B7-1/B7-2有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說明 B7-1/B7-2這一比率在妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中也具有重要的作用。妊娠期高血壓組和正常妊娠組患者胎盤表達(dá)B7-1和B7-2的含量的變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因可能與樣本數(shù)量少有關(guān)，也可能是分娩孕周的差異影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但在PE組中不同的分娩孕周其B7-1、B7-2及B7-1/B7-2比率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無明顯差異，其原因有待于進(jìn)一步研究。

通過本研究我們認(rèn)為：母胎界面局部免疫失調(diào)，尤其是B7-1的過度表達(dá)，B7-2受抑制以及B7-1/B7-2比率失衡可能是妊娠期高血壓疾病發(fā)生的始動(dòng)因子。B7-1/B7-2比率更為嚴(yán)重的失衡在一定程度上反映了妊娠期高血壓疾病患者的局部細(xì)胞免疫功能的變化，可能是其發(fā)病的關(guān)鍵。

1 Darmochwal-Kolarz D,Rolinski J,Leszczynska-Goarzelak B,et al.The expressions of intracellular cytokines in the lymphocytes of preeclamptic patients.Am J Reprod Immunol，2002，48:381-386.

2 chao G.Innately moving away from the Th1/Th2 paradigm in pregnancy.Clin Exp Immunol，2003,131:393-395.

3 Sylive F,Francoise L.Cutting edge:soluble HLA-G triggers CD95/CD95 ligand-mediated apoptosis in activated CD8+ cells by interacting with CD8.Immunol,2000,164:6100.

4 Boussiotis VA,Freeman GJ,Gribben JG,et al.The role of B7-1/B7-2:CD28/CTLA4 pathways in the prevention of anergy,induction of productive immunity and down- regulation of the immune response.Immunol Rev,1996,153:5-26.

5 Wegmann TG,Lin H,Guilbert L,et al.Bidirectionnal cytokine interactions in the matenal-fetal relationship:is successful pregnancy a TH2 phenomenon ? Immunol Today,1993,14:256-353.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.03.031

050031 河北省石家莊市第四醫(yī)院產(chǎn)9科(劉影、張國華、李望)；河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科(張文真)

R 714.246

A

1002-7386(2014)03-0393-02

2013-06-20)