王 倩

胎膜早破(premature rupture of membranes，PROM)是產(chǎn)科常見并發(fā)癥之一，約占足月妊娠的10%、早產(chǎn)的2.0%～3.5%[1]，可使早產(chǎn)、新生兒死亡、感染、產(chǎn)后出血比例升高，對妊娠和分娩不利。因此，預(yù)防胎膜早破對改善母兒結(jié)局有重要意義。胎膜早破的發(fā)生可能與MMPs水解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)，使其結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，導(dǎo)致胎膜的張力和彈性發(fā)生改變繼而導(dǎo)致破裂。我們采用免疫組化的方法檢測胎膜早破組和對照組胎膜組織中MMP-9和Collagen III的表達(dá)，探討MMP-9和Collagen III與胎膜早破發(fā)生中的作用。

1 資料與方法

1.1資料 收集2011年1月-2011年12月我院婦產(chǎn)科住院分娩的孕周為28～42周、單胎頭先露產(chǎn)婦60例，其中妊娠28-36+6周的未足月胎膜早破(pPROM)20例，37～42周的足月胎膜早破(tPROM)20例;對照組20例(早產(chǎn)10例，正常足月分娩10例)。標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，每個標(biāo)本各切3片，分別檢測MMP-9，Collagen III的表達(dá)。

1.2方法 試劑：兔抗人MMP-9多克隆抗體、Collagen III多克隆抗體、S-P試劑盒和液體DAB酶底物顯色試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。操作方法：MMP-9，Collagen III免疫組化檢測均采用S-P法：石蠟切片脫蠟和水化，微波抗原修復(fù)，分別加入過氧化酶溶液和非免疫性動物血清，孵育后加入兔抗人MMP-9多克隆抗體、Collagen III多克隆抗體，最后加入二抗和鏈霉菌抗生物素·過氧化酶溶液，DAB染色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水、封片，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3結(jié)果判斷 MMP-9胞漿內(nèi)見棕黃色顆粒沉著，Collagen III定位于ECM中，呈棕黃色線狀及細(xì)顆粒狀結(jié)構(gòu)為陽性信號，隨機(jī)選擇l0個高倍視野(×400)，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，共計數(shù)1000個細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞百分率。<10% 為(-)；10%～50%為(+)，>50%為(++)。分析時(-)歸為陰性表達(dá)；(+)、(++)均歸為陽性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件，各組間MMP-9，Collagen III表達(dá)及MMP-9，Collagen III的表達(dá)與PROM間關(guān)系的分析采用χ2檢驗和Spearman相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1MMP-9在各組中的表達(dá) 正常足月組陽性表達(dá)率為30.0%，早產(chǎn)組表達(dá)率為40.0%，pPROM組和tPROM組陽性表達(dá)率均為90.0%。PROM和對照組，MMP-9陽性表達(dá)率相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=22.12，P<0.01)。進(jìn)一步作兩兩比較結(jié)果顯示，tPROM和pPROM、對照組中的早產(chǎn)和足月產(chǎn)兩者差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值>0.05)。見表1、圖1。

表1 MMP-9在各組中的表達(dá)

圖1 MMP-9在胎膜早破組織中陽性表達(dá)

2.2Collagen III在各組中的表達(dá) 正常足月組陽性表達(dá)率為80.0%，早產(chǎn)組表達(dá)率為60.0%，pPROM陽性表達(dá)率為25.0%，tPROM陽性表達(dá)率為35.0%。PROM和對照組，Collagen III陽性表達(dá)率相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=10.64，P<0.05)。兩兩比較顯示，tPROM和pPROM、對照組中的早產(chǎn)和足月產(chǎn)兩者差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2、圖2。

表2 Collagen III在各組中的表達(dá)

2.3MMP-9和Collagen III的相關(guān)性 PROM組織中MMP-9的表達(dá)與Collagen III的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.612,P<0.05)。

圖2 Collagen III組織中陽性表達(dá)

3 討論

胎膜由羊膜層、絨毛膜層以及兩者相連的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)所組成。ECM是一類由纖維連接蛋白 (fibronectin,FN)、膠原蛋白(Collagens)、 層粘連蛋白(Laminin,LN)、玻連蛋白 (vitronectin,Vn)和血小板反應(yīng)蛋白 (thrombospondin,Tsp)等多種糖蛋白、蛋白多糖和膠原組成的動態(tài)網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，能調(diào)節(jié)組織和細(xì)胞生理活動[2]。羊膜ECM由膠原蛋白、非膠原蛋白和蛋白多糖三大類組成，而Collagen III為膠原蛋白的主要成分，能維持正常妊娠中胎膜的張力和彈性[3]。MMP-9是一類含有金屬離子的蛋白水解酶，可水解膠原、彈性蛋白、氨基葡聚糖等多種細(xì)胞外基質(zhì)。本實驗結(jié)果表明在PROM患者中MMP-9表達(dá)明顯高于對照組，而Collagen III的表達(dá)明顯低于對照組，提示MMP-9的高表達(dá)和Collagen III的低表達(dá)可能在PROM的發(fā)生中起重要作用，PROM的發(fā)生可能與MMP-9破壞ECM的結(jié)構(gòu), 造成Collagen III的流失，胎膜失去支持，導(dǎo)致胎膜的張力和彈性改變而破裂[4]，從而導(dǎo)致PROM的發(fā)生。但本實驗中MMP-9和Collagen III表達(dá)在pPROM組和tPROM組中的表達(dá)并無差異性，可能與實驗方法，標(biāo)本量較小有關(guān)。也有報道[5]表明MMP-9與早產(chǎn)有關(guān)，但本實驗中的早產(chǎn)組中MMP-9的表達(dá)與正常足月分娩組無統(tǒng)計學(xué)差異，兩者均低于PROM組，可能與對照組標(biāo)本量小有關(guān)，仍有待進(jìn)一步研究。

【 參 考 文 獻(xiàn) 】

[1] 樂 杰，主編．婦產(chǎn)科學(xué)[M]．第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：145-146.

[2] Sachlos E，Auguste DT．Embryoid body morphology influences diffusive transport of inductive biochemicals:a strategy for stem cell differentiation[J].Biomaterials,2008,29(34):4471-4480．

[3] Liu J,Liu T,Zheng Y，et al.Early responses of osteoblast-like cells to different mechanical signals through various signaling pathways[J].Biochem Biophys Res Commun,2006，348(3):1167-1173.

[4] Weiss A,Goldman S,Shalev E.The matrix metalloproteinases (MMPS) in the decidua and fetal membranes[J].Front Biosci,2007,12: 649-659.

[5] I Tency,H Verstraelen,I Kroes,et al.Imbalances between Matrix Metalloproteinases (MMPs) and tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMPs) in maternal serum during preterm labor[J].PloS one,2012，7(11):.