王 猛 孫 妍

（哈爾濱一洲制藥有限公司·150086）

左歸丸由熟地黃、山茱萸、川牛膝、山藥、枸杞、菟絲子等組成。山茱萸主要用于補(bǔ)益肝腎，收斂固澀、固精縮尿止帶、止崩、止汗，此外還可用于生津止渴等癥，還具有抗炎、抗菌、抗氧化、降脂等功效。山茱萸中含有揮發(fā)性成分、環(huán)烯醚萜類成分、鞣質(zhì)和黃酮等4 大類成分，其中環(huán)烯醚萜類成分具有抗炎、抗氧化的作用，還對(duì)心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)都具有很好的療效，而環(huán)烯醚萜類成分中的馬錢苷最具有代表性，在中國(guó)藥典中已經(jīng)記載了馬錢苷作為山茱萸中藥的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)采用了高效液相色譜法對(duì)左歸丸中的馬錢苷進(jìn)行了含量測(cè)定方法的研究。

1 儀器與試劑

Waters2695e 高效液相色譜儀(美國(guó)沃特世公司，自動(dòng)進(jìn)樣器)；empower 色譜工作站；紫外檢測(cè)器2489；METTLER AE240 電子分析天平；AS20500BDT 型超聲波清洗器；SunfireC18 色譜柱(150mm×4.6mm，5um)。

馬錢苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所111640－200604) 甲醇、乙腈為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純；左歸丸批號(hào)(101003、110202、110614 )。

2 測(cè)定方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS（5μm，4.6mm×150mm）；流動(dòng)相：乙腈－0.1%磷酸溶液(15：85；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：236nm。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取馬錢苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml 含50ug 的溶液，即得。

2.3 提取方法的確定

2.3.1 提取溶媒的確定 在供試品溶液的制備過程中，分別選用了甲醇、乙醇、50%甲醇進(jìn)行回流提取，結(jié)果表明50%甲醇提取分離效果、峰形及含量為最好，所以選擇50%甲醇為提取溶劑。

2.3.2 提取時(shí)間的選擇 取供試品適量，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇超聲處理15分鐘使溶散，分別加熱回流提取0.5、1、1.5、2 小時(shí)，放冷，濾過，濾液作為供試品溶液。含量測(cè)定結(jié)果表明：四種提取時(shí)間的含量無明顯差異，為節(jié)約成本及縮短處理時(shí)間，故選用50%甲醇加熱回流提取1 小時(shí)。

2.3.3 供試品溶液的制備 取供試品，研細(xì)，稱取1.0g，置干燥具塞錐形瓶中，密封，加50%甲醇25ml超聲處理15min使溶散，加熱回流提取1 小時(shí)，放冷，濾過，即得。

2.4 專屬性考察

依照處方取除山茱萸以外的藥材，按樣品制備工藝制備陰性對(duì)照樣品，照2.3.3 供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置檢測(cè)出馬錢苷，陰性對(duì)照液無干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密量取上述對(duì)照品溶液0.5、1、2、4、6、9、10ul，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：Y=117358.6609X+15499.26087 r=0.9992。結(jié)果表明馬錢苷的進(jìn)樣量在0.00271～0.04878ug。

2.6 精密度考察

精密吸取馬錢苷對(duì)照品溶液10ul，按照上述的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄色譜峰.結(jié)果，以馬錢苷峰面積計(jì)算RSD ＝1.0%，表明儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性考察

稱取同一批號(hào)的樣品6 份，按供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定，計(jì)算供試品中馬錢苷含量，其RSD ＝1.7%，表明本方法的重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性考察

取同一供試品溶液分別在制備后0、1、4、8、12、16、24小時(shí)進(jìn)樣10ul，測(cè)定峰面積，以馬錢苷峰面積計(jì)算RSD ＝2.5%，結(jié)果顯示，供試品溶液在24 小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率考察

精密稱取已知含量的同一批的樣品6 份，每份約0.5g，每份分別精密加入5ml 的馬錢苷對(duì)照品溶液，在精密加入20ml 的甲醇，按照供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備，結(jié)果平均回收率為99.64%，RSD ＝1.5%，見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.10 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定左歸丸三批樣品中馬錢苷的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為0.4887mg·g－1、0.4904mg·g－1、0.4856mg·g－1。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)表明此方法可用于左歸丸中馬錢苷含量測(cè)定，左歸丸中馬錢苷的含量為每克不低于0.4856mg。

[1] 衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].中藥成方制劑.第一冊(cè)，1993：54－54.

[2] 中國(guó)藥典[S].一部，2010：26-26.

[3] 樊琪.左歸丸中毛蕊花糖苷含量測(cè)定[J].中國(guó)科技縱橫，2012，(6)：254-254.

[4] 常玲彬.山茱萸多糖提取工藝優(yōu)化及馬錢苷含量測(cè)定[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技，2011(11)，26-29.

[5] 宴桂敏，林燕飛，孫靜蕓,等.山茱萸中馬錢苷的樣品處理方法改進(jìn)[J].中國(guó)藥業(yè)，2005（10）：38-39.