徐穎潔

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳與種質(zhì)創(chuàng)新國家重點實驗室，江蘇南京 210095)

三唑類農(nóng)藥具有高效、廣譜、長效、內(nèi)吸性強以及立體選擇性等特點。自第1個商品化的三唑類農(nóng)藥——三唑酮問世后，該類農(nóng)藥引起廣泛關(guān)注并發(fā)展迅速，已有近30個品種商品化［1－4］。隨著三唑類農(nóng)藥在蔬菜、水果中的施用量逐漸加大，由其殘留引發(fā)的食品安全問題也越來越受到人們的廣泛關(guān)注。美國、日本、歐盟等發(fā)達(dá)國家均已制定嚴(yán)格的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)并實施殘留監(jiān)控。特別是日本“肯定列表”制度實施后，我國出口日本的蔬菜中多次被查出三唑類農(nóng)藥殘留超標(biāo)，其中涉及氟硅唑、苯醚甲環(huán)唑、三唑醇等。

國內(nèi)外雖然已有基于高效液相色譜法［5－8］、液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法［9－11］、氣相色譜法［12－13］、氣相色譜－質(zhì)譜法［14－20］等檢測手段的三唑類農(nóng)藥殘留檢測的文獻(xiàn)報道，但個別方法的檢測限不能完全滿足最高殘留限量(MRL)要求;同時有些方法的檢測技術(shù)和樣品前處理技術(shù)相對落后。鑒于此，筆者以目前在蔬菜上廣泛使用的6種三唑類農(nóng)藥(腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑和三唑醇)為研究對象，采用SPE-GC-μECD方法測定了蘿卜、黃瓜、青菜中上述6種三唑類農(nóng)藥殘留，以期為蔬菜中上述6種三唑類農(nóng)藥殘留的檢測提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗材料。蘿卜、黃瓜、青菜樣品購于超市。

1.1.2 試劑。乙腈:色譜純;氯化鈉:優(yōu)級純;無水硫酸鈉:分析純，用前在650℃灼燒4 h，貯于干燥器中，冷卻后備用;正己烷:色譜純;丙酮:分析純，重蒸;Innovation Florisil固相萃取柱:6 ml，0.5 g，使用前需用5 ml正己烷活化，無錫科奧美萃生物科技有限公司生產(chǎn);微孔濾膜:0.45 μm，有機相;腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、三唑醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):純度大于或等于99%，購于德國Dr.Ehrenstorfer公司。淋洗液:丙酮+正己烷(10+90，體積比);洗脫液:丙酮+正己烷(20+80，體積比)。

1.1.3 儀器。氣相色譜儀:配有微電子捕獲檢測器(μECD)，美國Agilent公司生產(chǎn);分析天平:感量為0.000 1 g和0.010 0 g。

1.2 方法

1.2.1 試樣的提取。稱取25 g試樣(精確至0.01 g)于100 ml錐形瓶中，向錐形瓶中加入50 ml乙腈，將錐形瓶置于超聲波清洗器中超聲提取20 min，過濾，將濾液轉(zhuǎn)移到100 ml具塞量筒中，加入5 g氯化鈉，劇烈振蕩3 min，靜置30 min。準(zhǔn)確移取10 ml上層清液，使之通過裝有2 cm厚的無水硫酸鈉層的濾紙進入100 ml錐形瓶Ⅱ，并用5 ml乙腈洗滌無水硫酸鈉層，收集、合并乙腈于錐形瓶Ⅱ，于65℃水浴中氮氣吹干，用2 ml淋洗液溶解殘渣，待凈化。

1.2.2 試樣的凈化。將待凈化液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中，調(diào)節(jié)裝置使淋洗液流速約為2 ml/min，用12 ml淋洗液分3次洗滌錐形瓶Ⅱ，待液面到達(dá)固相萃取柱填料上層時，將洗滌液加入柱中，棄流出液。待液面到達(dá)固相萃取柱填料上層時，加入10 ml洗脫液，收集洗脫液于100 ml錐形瓶Ⅲ，于40℃水浴中用氮氣吹干。用1.0 ml洗脫液溶解殘渣，有機微孔濾膜過濾，待測。

1.2.3 氣相色譜條件。色譜柱:石英毛細(xì)管色譜柱DB-1ms，30 m ×0.25 mm ×0.25 μm;柱溫:150 ℃，保持 2 min，以5℃/min升溫至220℃，再以20℃/min升溫至300℃，保持4 min;進樣口溫度:250℃;檢測器溫度:320℃;載氣:N2，純度99.999%，流速1.2 ml/min;進樣方式:分流進樣，分流比40∶1;進樣量:1.0 μl。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。分別稱取腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、三唑醇各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)約0.025 g(精確至0.000 2 g)于25 ml容量瓶中，加淋洗液超聲振蕩溶解，定容，搖勻，配制成單一標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 氣相色譜條件的選擇 腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、三唑醇6種農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)中均含有電負(fù)性原子，而微電子捕獲檢測器對含電負(fù)性原子的物質(zhì)具有很強的響應(yīng)。為了能實現(xiàn)較低的檢測限，在該研究中選擇微電子捕獲檢測器對腈菌唑等6種殺菌劑進行同時測定。

參考相關(guān)文獻(xiàn)［13］，選用DB-1ms石英毛細(xì)管色譜柱作為腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、三唑醇的分析測試色譜柱。為了保證6種三唑類農(nóng)藥合適的保留時間和較好的分離度，進行不同柱溫的分離試驗。通過不同柱溫的分離試驗，確定柱溫條件為:150℃保持2 min，以5℃/min升溫至220℃，再以20℃/min升溫至300℃，保持4 min。該條件下，6種三唑類農(nóng)藥均達(dá)到基線分離，出峰時間在12～21 min，從而可有效避免樣品中其他雜質(zhì)的干擾。

在“1.2.3”色譜條件下，腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、三唑醇的色譜及保留時間見圖1。

圖1 6種三唑類農(nóng)藥的氣相色譜

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別配制不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)混合工作溶液，在“1.2.3”氣相色譜條件下對系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進行測定。由表1可知，6種三唑類農(nóng)藥的線性關(guān)系均良好。三唑酮、戊菌唑、三唑醇、腈菌唑、丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑的檢出限分別為 0.013、0.013、0.210、0.057、0.010 和0.025 mg/kg。

表1 6種三唑類農(nóng)藥的線性方程和相關(guān)系數(shù)

表2 樣品中的添加水平、回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.3 回收率和精密度 在不含6種待測三唑類農(nóng)藥的蘿卜、青菜、黃瓜3種樣品中添加6種三唑類農(nóng)藥，進行添加回收試驗，添加3個濃度水平，每個濃度水平重復(fù)6次。由表2可知，該方法的平均加標(biāo)回收率在72.90% ～98.80%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍在1.18% ～9.88%，符合農(nóng)藥殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)論

采用氣相色譜測定蔬菜(蘿卜、黃瓜和青菜)中腈菌唑等6種三唑類殺菌劑的殘留量，該方法簡便、快速、可操作性很強，準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度等指標(biāo)均符合農(nóng)藥殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)。該研究中建立的檢測方法為蔬菜中腈菌唑等6種三唑類殺菌劑殘留的檢測提供了技術(shù)參考。

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