崔殿波，王興剛，朱艷華，王鳳儒

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

植物博落回屬于罌粟科博落回屬多年生草本植物，又名號(hào)筒桿、山梧桐、三錢三、山號(hào)筒等。在我國分布于長江中下游各省市地區(qū)，生長于海拔2000m以下的低山、路邊及溝邊。博落回主要成分為生物堿類物質(zhì)，其中白屈菜紅堿為一種異喹啉衍生物堿。白屈菜紅堿(chelerythrine，CHE)還存在于飛龍掌血、白屈菜、血水草等植物中。CHE具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、殺蟲等多種藥理活性，特別是抗腫瘤活性，倍受人們的關(guān)注，CHE的分子結(jié)構(gòu)的特殊性決定了其抗癌活性。利用白屈菜紅堿治療腫瘤疾病的研究也較多，本研究是將博落回總堿制成胃內(nèi)漂浮片發(fā)揮其在胃內(nèi)長時(shí)間滯留，達(dá)到治療胃癌的作用。

1 儀器與試藥

島津公司LC－2010AHT型高效液相色譜儀;德國Sartorius公司Sartorius BT25S電子天平;北京國藥龍立科技有限公司DP－30型單沖打片機(jī);白屈菜紅堿對(duì)照品(深圳美荷生物有限公司);博落回總堿(寶雞鴻源生物有限公司);博落回總堿胃內(nèi)漂浮片(本實(shí)驗(yàn)室自制);乙腈為色譜純;水為超純水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為迪馬公司Diamonsil C18(5μm，250mm×4.6mm);流動(dòng)相為乙腈 － 水 － 磷酸(25∶75∶0.1);流速為1.0mL/min;檢測(cè)波長270nm;進(jìn)樣量10μL;柱溫為35℃。

2.2 溶液制備

白屈菜紅堿對(duì)照品溶液制備:精密稱取白屈菜紅堿對(duì)照品10.03mg，置10mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，即得1.00mg/mL對(duì)照品溶液。

供試品溶液制備:取博落回總堿胃內(nèi)漂浮片10片，研細(xì)，混勻，取粉末約50mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加乙腈40mL超聲提取30min，加乙腈定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，以0.45μm 的微孔濾膜濾過，濾液即為供試品溶液。

陰性供試品溶液的制備:按處方比例取不含博落回總堿的制劑輔料50.06mg，置于10mL容量瓶中，制成陰性供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性實(shí)驗(yàn)

精密量取供試品溶液和陰性供試品溶液，按照2.1條件項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣10μL作HPLC分析。色譜圖見圖1。由圖可見，輔料對(duì)白屈菜紅堿的測(cè)定無干擾。

2.3.2 線性關(guān)系考察

分別精密吸取2.2項(xiàng)下的白屈菜紅堿對(duì)照品溶液100、300、500、700、900μL 加乙腈定容至 10mL 量瓶中，制成濃度為 10.00、30.00、50.00、70.00、90.00μg/mL的白屈菜紅堿對(duì)照品溶液，分別精密吸取注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:A=81794C－21495(R=0.9999)。圖2表明，白屈菜紅堿在濃度為10.00～90.00μg/mL之間具有良好的線性關(guān)系。

圖1 空白胃內(nèi)漂浮片和博落回總堿胃內(nèi)漂浮片的HPLC色譜圖

2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液按照2.1條件項(xiàng)下進(jìn)樣10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得對(duì)照品溶液白屈菜紅堿的平均峰面積為2465753，RSD=2.71%，表明精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取2.2 項(xiàng)下制備的供試品溶液分別于0、2、4、6、8、12h，進(jìn)行HPLC分析，記錄峰面積。結(jié)果峰面積無明顯變化，計(jì)算RSD為2.79%，表明樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

平行稱取適量樣品6份，精密稱定，按照2.2項(xiàng)下操作得供試品溶液，測(cè)定峰面積。結(jié)果白屈菜紅堿的平均含量為3.21%，RSD為2.97%，表明重現(xiàn)性良好。

2.3.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取片重差異檢測(cè)合格的博落回總堿胃內(nèi)漂浮片10片，研細(xì)，混勻，精密稱取9份，每份約25mg，按照2.2項(xiàng)下操作得供試品溶液，分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)品0.64、0.80、0.96mg 進(jìn)樣測(cè)定，進(jìn)樣量為 10μL，測(cè)得白屈菜紅堿的平均回收率為99.10%，RSD=1.91%。表明該方法加樣回收率合格。結(jié)果見表1。

回收率(%)=(測(cè)得白屈菜紅堿總量－樣品中白屈菜紅堿的含量)/加入白屈菜紅堿對(duì)照品量×100%

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 供試品含量測(cè)定

精密稱取供試品3批，按照2.2項(xiàng)下操作，得樣品溶液。然后按照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定3次取平均值，計(jì)算含量。結(jié)果見表2。

表2 三批樣品測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)在查閱大量白屈菜紅堿含量檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上［1－3］，通過實(shí)驗(yàn)考察，確定了一種漂浮片劑中白屈菜紅堿的含量測(cè)定方法，該法簡便快速、準(zhǔn)確可靠，可作為博落回總堿胃內(nèi)漂浮片的質(zhì)量控制方法。

［1］李曉蒙，程力惠，劉慧瓊.HPLC法測(cè)定博落回藥材不同器官白屈菜紅堿含量［J］.亞熱帶植物科學(xué)，2008，37(2):41 －43.

［2］王曙光，滑培玲，王涵磊，等.HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地博落回中白屈菜紅堿和血根堿含量［J］.安徽醫(yī)藥，2011，15(4):434 －436.

［3］左金梁，白璐，宋欣鑫，等.Rp－HPLC法同時(shí)測(cè)定白屈菜藥材中血根堿、小檗堿和白屈菜紅堿的含量［J］.藥物分析雜志，2008，28(6):903－905.