黃慶洲，李 科，張志強(qiáng)

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，重慶榮昌402460；2.四川省富順縣畜牧局，四川富順643200）

目前，許多養(yǎng)雞場(chǎng)因疫苗免疫失敗導(dǎo)致傳染性疾病發(fā)生，是危害我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的重要原因之一，疫苗免疫失敗的原因與疫苗抗原性差、保護(hù)率低、或受某些免疫抑制因素的影響、或與機(jī)體自身的免疫功能較低等因素密切相關(guān)[1、2]。探討能促進(jìn)機(jī)體免疫機(jī)能、提高疫苗免疫保護(hù)率的免疫增強(qiáng)劑供生產(chǎn)使用，具有重要的實(shí)踐意義。近年來(lái)中草藥免疫增強(qiáng)劑的研究受到廣泛關(guān)注，特別是補(bǔ)腎壯陽(yáng)類(lèi)中藥對(duì)動(dòng)物免疫機(jī)能的影響研究報(bào)道較多。研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿、巴戟天、肉蓯蓉、菟絲子、補(bǔ)骨脂等能明顯影響鼠和人的機(jī)體免疫功能，對(duì)巨噬細(xì)胞，T、B淋巴細(xì)胞的活性及多種重要的免疫因子具有顯著的調(diào)節(jié)作用[3～5]，但比較研究單味助陽(yáng)中藥對(duì)肉雞免疫機(jī)能及疫苗免疫效果的影響未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)以大發(fā)肉雞為試驗(yàn)動(dòng)物，比較觀察了四種助陽(yáng)中藥淫羊藿、肉蓯蓉、巴戟天、菟絲子對(duì)雞免疫新城疫疫苗后，血清抗體效價(jià)及部分免疫器官發(fā)育的影響，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)用中藥:肉蓯蓉、巴戟天、菟絲子、淫羊藿（購(gòu)自榮昌縣石家藥行），分別4O目粉碎，50℃烘干備用。

1.1.2 雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清：哈爾濱獸醫(yī)研究所生產(chǎn)（20121211）。

1.1.3 主要儀器：電子天平、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、96孔V型板、微量移液器。

1.1.4試驗(yàn)用新城疫疫苗：ND-LasotaVI系弱毒凍干苗 (黑龍江生物制品一廠生產(chǎn)，批號(hào)：20121109)。

1.1.5 試驗(yàn)動(dòng)物：1日齡大發(fā)肉雞180只，雄性（由四川省內(nèi)江種禽場(chǎng)提供）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組、飼養(yǎng)及給藥方法：1日齡大發(fā)肉雞180只，隨機(jī)分為5組，每組36只，分別為肉蓯蓉組、巴戟天組、菟絲子組、淫羊藿組、對(duì)照組。各組隔離常規(guī)飼養(yǎng)，自由采食和飲水，從5日齡開(kāi)始，I～I(xiàn)V組飼料中分別添加2%的肉蓯蓉、巴戟天、菟絲子、淫羊藿中藥粉。整個(gè)試驗(yàn)期為81天，0～30日齡飼喂市售普通內(nèi)江正大小雞飼料，31～81日齡飼喂內(nèi)江正大肉中雞飼料，飼料主要成分：粗蛋白≥21.0%，粗纖維≤5.0%，粗灰分≤7.0%，鈣0.80%～1.30%，總磷≥0.60%，食鹽0.30%～0.80%，水分≤13.0%，蛋氨酸≥0.46%。

1.2.2新城疫苗免疫程序及方法:在3日齡和8日齡分別免疫ND-Lasota弱毒凍干苗，接種方法為點(diǎn)眼滴鼻，各組免疫劑量相同。

1.2.3 觀察指標(biāo)及樣品收集：在肉雞飼喂至6、21、36、51、66、81日齡時(shí)每組隨機(jī)取6只雞，翅靜脈采血液2ml/只，4℃冰箱內(nèi)自然凝固，收集血清備測(cè)；在6、21、51、81日齡時(shí)，上午8～10點(diǎn)之間，每組隨機(jī)取6只雞稱(chēng)重，頸動(dòng)脈放血處死后剖檢，收集法氏囊及脾臟稱(chēng)重，計(jì)算各組法氏囊及脾臟指數(shù)(mg/g)=器官重/體重。

1.2.4 雞新城疫血清HI效價(jià)測(cè)定：采用微量HI試驗(yàn)方法進(jìn)行[6]，雞新城疫4單位抗原、1%公雞紅細(xì)胞懸液實(shí)驗(yàn)室自行制備。結(jié)果以-Log2的幾何均值表示雞新城疫血清HI效價(jià)。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理：應(yīng)用SPSS11軟件對(duì)不同日齡組間法氏囊、脾臟指數(shù)及HI效價(jià)進(jìn)行顯著性t檢驗(yàn)，比較組間差異性。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 四種中藥對(duì)大發(fā)肉雞血清ND抗體效價(jià)的影響

6日齡時(shí)各組間血清ND-HI抗體效價(jià)基本一致，組間無(wú)顯著差異；21日齡時(shí)HI效價(jià)達(dá)到高峰，且各試驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；21至81日齡階段各組HI效價(jià)呈下降趨勢(shì)，但肉蓯蓉；巴戟天組降低的速度較對(duì)照組慢，特別是肉蓯蓉組；66日齡時(shí)仍顯著或極顯著高于其它各組（P＜0.05或0.01）；36至81日齡階段，巴戟天組、淫羊藿組、菟絲子組與對(duì)照組間差異不顯著

表1 不同日齡肉雞血清中ND-HI 抗體效價(jià)變化（-log2，X±SD，N=6）

（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 四種中藥對(duì)大發(fā)肉雞法氏囊、脾臟指數(shù)的影響法氏囊指數(shù)在6、21、51日齡階段時(shí)各組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；81日齡時(shí)，肉蓯蓉組和菟絲子組法氏囊指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，巴戟天組、淫羊藿組、對(duì)照組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。脾指數(shù)在6、51日齡時(shí)各組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；21日齡時(shí)，肉蓯蓉組、巴戟天組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，菟絲子組和淫羊藿組有增高趨勢(shì)，但與對(duì)照組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）；81日齡時(shí)，肉蓯蓉、菟絲子組脾指數(shù)顯著高于巴戟天組及對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

3 討論與分析

3.1 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，四種中藥對(duì)肉雞免疫新城疫苗后血清中和抗體效價(jià)的影響，主要表現(xiàn)在兩方面，一是可提高抗體水平，二是可延長(zhǎng)血清抗體高水平維持時(shí)間，但四種中藥間存在著一定的差異，以肉蓯蓉的作用效果最強(qiáng)，巴戟天次之，菟絲子與淫羊藿的這一作用僅表現(xiàn)在21日齡以前。四種壯陽(yáng)中藥對(duì)機(jī)體免疫功能的影響可能主要與其多糖活性成分相關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉多糖可提高T、B淋巴細(xì)胞增殖率，活化NK細(xì)胞，提高T細(xì)胞亞群CD3＋、CD4+、CD8+的含量[7、8]，能促進(jìn)正常小鼠抗體分泌細(xì)胞（PFC）的合成，增強(qiáng)小鼠的體液免疫功能[9、10]；巴戟天多糖對(duì)T、B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化增殖有促進(jìn)作用，并能提高小鼠刀豆蛋白誘導(dǎo)的脾細(xì)胞分泌IL-2和INF的活性[11]，菟絲子多糖能使小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)增強(qiáng)、抗體形成細(xì)胞數(shù)目明顯增加[12]；淫羊藿多糖對(duì)小鼠脾細(xì)胞有較強(qiáng)的有絲分裂原樣作用，能明顯促進(jìn)脾細(xì)胞的增殖，增加小鼠脾臟抗體生成細(xì)胞(PEC)數(shù)[13]。

表2 不同日齡肉雞法氏囊指數(shù)（X±SD，N=6）

3.2 動(dòng)物免疫器官重量的增加是由于其自身細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和分裂增殖所致，因此以免疫器官重量為參照值的免疫器官指數(shù)在一定程度上能表明機(jī)體免疫機(jī)能狀況[14]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，四種中藥對(duì)肉雞脾臟和法氏囊指數(shù)的影響主要表現(xiàn)在51-81日齡階段，但不同藥物的作用效果不同，對(duì)法氏囊指數(shù)的影響以肉蓯蓉和菟絲子的效果較好，對(duì)脾臟指數(shù)的影響以肉蓯蓉、菟絲子效果顯著，淫羊藿次之，巴戟天有一定的效果但不顯著。試驗(yàn)結(jié)果與戴遠(yuǎn)威等[15]、丁雁[16]等報(bào)道基本吻合。從免疫器官發(fā)育上說(shuō)明四種中藥對(duì)肉雞免疫機(jī)能具有促進(jìn)作用，且以肉蓯蓉的效果最為明顯。

表3 不同日齡肉雞脾臟指數(shù)（X±SD，N=6）

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