呂 瑩，張 棟，張 超，張大方*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)春 130021；2.倫敦大學(xué)學(xué)院，英國(guó) 倫敦；3.澳門(mén)大學(xué)，中國(guó) 澳門(mén))

附子、干姜是溫陽(yáng)祛寒最常用的藥材，源于《傷寒雜病論》的四逆湯，二者相須為用，有增強(qiáng)回陽(yáng)救逆之功效。通過(guò)觀察附子干姜以不同比例配伍對(duì)急性心衰大鼠神經(jīng)激素釋放的調(diào)控作用，進(jìn)一步探討附子干姜配伍緩解心衰癥狀的機(jī)理。

1 實(shí)驗(yàn)材料

SD大鼠64只，雌雄各半，240～260 g，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(動(dòng)物許可證號(hào):SCXK-(吉)2007-0003)，飼養(yǎng)條件：室溫(22±2) ℃，濕度40%～60%，動(dòng)物自由進(jìn)食及飲水，自然晝夜節(jié)律。附子(黑順片)、干姜藥材購(gòu)于長(zhǎng)春宏檢藥業(yè)，質(zhì)量符合《中國(guó)藥典》2010版一部規(guī)定,受試藥由本校藥劑實(shí)驗(yàn)室提取制備。參附注射液(雅安三九藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，專(zhuān)利號(hào)：ZL96117458.7，規(guī)格:10 mL/支)。戊巴比妥鈉(上海愛(ài)紫特生物科技有限公司，批號(hào)：060719)。烏拉坦(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào):T2009081)。NT-proBNP、ANP、PRA、AngⅡ、ALD試劑盒:北京伊普瑞斯科技有限公司。16道生理記錄儀MP-150系統(tǒng)(美國(guó)Biopac公司)；MP-2003注射泵(上海雷恩醫(yī)療器械有限公司)；小動(dòng)物呼吸機(jī)HX-100E(成都泰盟科技有限公司);臺(tái)式低溫高速離心機(jī)：GL-21B，上海飛鴿儀器廠；電子天平：JY4001，上海精密科學(xué)儀器有限公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組 將64只大鼠隨機(jī)分成8組,即空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、參附注射液陽(yáng)性對(duì)照組、附子提取液組、干姜提取液組、附子∶干姜=1∶0.5組、附子∶干姜=1∶1組、附子∶干姜=1∶2組。

2.2 急性心衰模型的建立 參照文獻(xiàn)方法[1]略加改進(jìn)，20%烏拉坦腹腔注射麻醉，將動(dòng)物固定在手術(shù)臺(tái)上，進(jìn)行左心室插管，當(dāng)顯示器上的波形由血壓波變成下沿達(dá)0 mmHg附近具有明顯舒張期而峰頂平坦的波形時(shí)表明導(dǎo)管已經(jīng)通過(guò)主動(dòng)脈瓣進(jìn)入左室腔內(nèi)。觀察指標(biāo)：左室內(nèi)壓(LVSP)、左室內(nèi)壓最大上升速率(dp/dtmax)、左室內(nèi)壓最大下降速率(dp/dtmin)、左室舒張末期壓(LVEDP)，記錄各組的正常指標(biāo)后，開(kāi)胸并連接呼吸機(jī),穩(wěn)定后股靜脈恒速注射1.5%戊巴比妥納(6 mL/h)，當(dāng)dp/dtmax降到正常值的20%～40%，穩(wěn)定后以0.5%戊巴比妥鈉4 mL/h保證模型穩(wěn)定，模型穩(wěn)定5 min以上即視為心衰模型成功。

2.3 給藥 各組大鼠均于十二指腸給予受試藥物，陽(yáng)性對(duì)照藥舌下靜脈注射給藥，模型組給予等量的蒸餾水，各組動(dòng)物均于十二指腸給藥后60 min于腹主動(dòng)脈取血，分離血漿，按試劑盒方法，測(cè)定血漿ANP、NT-proBNP、PRA、AngⅡ、ALD的含量。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

造模后，與空白組比較，NT-proBNP、ANP、PRA、AngⅡ、ALD含量均明顯升高(P<0.001)。

3.1 血漿NT-proBNP測(cè)定結(jié)果 給藥治療后，各給藥組大鼠血漿NT-proBNP含量均有所降低，尤以附子、干姜1∶0.5組和1∶1組作用最強(qiáng)(P<0.05)。

3.2 心鈉素(ANP)測(cè)定結(jié)果 給藥后,ANP含量有所下降。且附子、干姜配伍后，對(duì)ANP的調(diào)節(jié)作用有所增強(qiáng)，其中，附子、干姜1∶2組作用顯著(P<0.05),附子、干姜1∶1組作用較強(qiáng)，與模型組比較有極顯著性差異(P<0.01)。

3.3 對(duì)急性心衰大鼠腎素—血管緊張素—醛固酮系統(tǒng)的影響

3.3.1 腎素(PRA)測(cè)定結(jié)果 給藥后，各給藥組PRA含量均有所下降，其中以附子、干姜1∶0.5組和1∶1組作用顯著(P<0.05)。

3.3.2 血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)測(cè)定結(jié)果 給藥組與模型組相比,3個(gè)配伍組含量均有不同程度的下降(P<0.05)，尤以1∶1組效果顯著(P<0.01)。

3.3.3 醛固酮(ALD)測(cè)定結(jié)果 經(jīng)治療后，附子、干姜1∶1組和1∶2組ALD含量下降(P<0.05)，其余各給藥組均有不同程度的下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1 血漿NT-proBNP、ANP、PRA、AngⅡ、ALD含量測(cè)定結(jié)果

注:與模型組比較,#P<0.01,##P<0.05;與空白組比較,△△△P<0.001

4 討論

附子具有強(qiáng)心、抑制心室顫動(dòng)，改善學(xué)流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，緩解心衰的治療作用[2-6]，而在心衰的發(fā)展變化中，神經(jīng)激素的釋放也起著重要作用，探討其與心衰的相關(guān)性，有利于更進(jìn)一步分析附子抗心衰作用的機(jī)制。

B型鈉尿肽(BNP)是一種在心室中合成的神經(jīng)激素，它的分泌是在心室壓力增高的情況下由preproBNP被酶分解而來(lái)，在它生成過(guò)程中同時(shí)生成了等摩爾量的NT-pro BNP，而由于后者的半衰期較前者更長(zhǎng)，所以在血漿中的濃度也較前者更穩(wěn)定。有研究發(fā)現(xiàn)，BNP和NT-proB NP的代謝能直接反映心室的壓力，其濃度和心室舒張末期的壓力和體積成正比，所以血漿NT-pro BNP水平可能與心衰的嚴(yán)重程度密切相關(guān)[7-9]。本研究結(jié)果表明,造模后，NT-pro BNP含量明顯升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。給藥治療后,大鼠血漿NT-pro BNP含量與模型組比較均有所降低，尤以附子、干姜1∶0.5組和1∶1組作用最強(qiáng)(P<0.05)。提示附子、干姜配伍后能顯著糾正神經(jīng)內(nèi)分泌激素釋放失衡狀態(tài)，調(diào)節(jié)NT-pro BNP的釋放作用，而附子、干姜1∶1組及1∶2組NT-pro BNP含量略比附子、干姜1∶0.5組高，則可能由于神經(jīng)激素激活，模型動(dòng)物處于代償調(diào)節(jié)期?？梢?jiàn)，NT-pro BNP可作為反映心臟功能的生物學(xué)標(biāo)志物。

心鈉素又稱(chēng)心房利鈉因子，它主要是由心房合成、貯存和分泌的一種活性肽[10]，作用于腎、血管平滑肌等靶器官，產(chǎn)生強(qiáng)大的利尿、排鈉、擴(kuò)張血管及抑制腎素和醛固酮作用[11]。研究表明：心鈉素與心衰的發(fā)生與嚴(yán)重程度高度相關(guān)，且心鈉素的含量與心功能不全是成正比的。測(cè)定血漿ANP可用于判斷心衰程度及預(yù)測(cè)患者的預(yù)后情況[12-13]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:給藥后，ANP含量有所下降。且附子干姜配伍后，對(duì)ANP的調(diào)節(jié)作用有所增強(qiáng)，尤以附子、人參1∶1組作用最為明顯，與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),說(shuō)明附子、干姜的強(qiáng)心作用可能與改善ANP的釋放有關(guān)。

在人體內(nèi)RAAS是維持水、電解質(zhì)、血壓、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要體系之一，而在心衰時(shí)，除循環(huán)RAAS活性上升外，心臟局部的RAAS也激活[14]。RAAS在心力衰竭早期對(duì)心功能起到積極的代償作用,但持久激活使心臟負(fù)荷過(guò)重導(dǎo)致心功能惡化。腎素(PRA)是由腎近球細(xì)胞合成和分泌的一種酸性蛋白酶，血漿中的腎素底物，即血管緊張素原，在腎素的作用下水解為血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)。在血漿和組織中，AngⅠ水解為AngⅡ，AngⅡ可刺激腎上腺皮質(zhì)球狀帶合成和分泌醛固酮(ALD)[15]。大量研究表明,心衰患者的PRA、AngⅡ和ALD濃度均增高[16]，且AngⅡ、ALD濃度均明顯升高，以AngⅡ升高更穩(wěn)定，其增高幅度與心衰的嚴(yán)重程度相關(guān),故PRA、AngⅡ、ALD水平能反映心衰失代償后的嚴(yán)重狀態(tài)[17-22]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，造模后,模型大鼠血漿中PRA、AngⅡ、ALD顯著上升。表明造模后激活了神經(jīng)激素的釋放功能，使血液中PRA、AngⅡ、ALD的含量增加。給予治療后,各組均有所改善，尤以附子、干姜1∶1組和1∶2組作用明顯(P<0.05)，PRA、AngⅡ、ALD含量降低，提示治療藥對(duì)心衰有緩解作用。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，附子與干姜按適當(dāng)比例配伍后可能通過(guò)提高心肌功能，反饋調(diào)節(jié)急性心衰大鼠血漿NT-pro BNP、ANP、PRA、AngⅡ、ALD的含量，從而更好的達(dá)到回陽(yáng)救逆，改善、緩解心功能的作用。

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