程鴻錕

(天津市紅橋區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 300132)

HPLC法測(cè)定單硝酸異山梨酯滴丸含量的不確定度分析*

程鴻錕

(天津市紅橋區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，天津 300132)

目的：對(duì)HPLC法測(cè)定單硝酸異山梨酯滴丸含量的不確定度進(jìn)行評(píng)定分析，找出影響不確定度的因素。方法：通過(guò)建立數(shù)學(xué)模型，對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，確定并簡(jiǎn)化不確定度來(lái)源，量化不確定度分量，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度擴(kuò)展不確定度。結(jié)果：擴(kuò)展不確定度為1.88%(K=2)，置信概率為95%。結(jié)論：本方法可用于該制劑含量的不確定度分析。

HPLC，不確定度分析，單硝酸異山梨酯滴丸

測(cè)量不確定度是一組與測(cè)量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的參數(shù)， 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立測(cè)量不確定度的分析評(píng)定程序，并有能力對(duì)每一項(xiàng)有數(shù)值要求的測(cè)量結(jié)果進(jìn)行測(cè)量不確定度的分析與評(píng)定。為了使測(cè)量數(shù)據(jù)更準(zhǔn)確、客觀，根據(jù)中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)對(duì)認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室在測(cè)量不確定度方面的要求，通過(guò)對(duì)高效液相法測(cè)定單硝酸異山梨酯滴丸含量的不確定度進(jìn)行測(cè)量的分析與評(píng)估，進(jìn)而找出影響不確定度的因素，為評(píng)價(jià)檢測(cè)報(bào)告提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津LC-2010C高效液相色譜儀； LC solution工作站；色譜柱:迪馬C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；賽多利斯BP211D電子天平(德國(guó)，十萬(wàn)分之一)；單硝酸異山梨酯對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)100694-200401)；單硝酸異山梨酯滴丸(天津美倫醫(yī)藥集團(tuán)，規(guī)格：5 mg，批號(hào)810040)；乙腈為色譜純，水為純化水,其他試劑均為分析純。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(18∶82)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫：40 ℃；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：20 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液制備 精密稱取單硝酸異山梨酯對(duì)照品①10.92 mg、②12.00 mg，分別置于200 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2供試品溶液制備 取本品20丸，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量,分別置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻。

3 不確定度的分析與評(píng)定[1]

測(cè)量不確定度評(píng)定步驟：找出所有影響不確定度的影響因子；建立能夠滿足不確定度評(píng)定所需的數(shù)學(xué)模型；分析并計(jì)算各影響因子的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量；將各標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成得到合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度；計(jì)算擴(kuò)展不確定度；給出測(cè)量不確定度報(bào)告。

3.1識(shí)別不確定度來(lái)源 主要包括供試品和對(duì)照品峰面積的響應(yīng)值、對(duì)照品與供試品的稱量與稀釋、對(duì)照品純度、供試品含量均勻度的差異等。

3.2建立數(shù)學(xué)模型

3.3分析并計(jì)算不確定度分量

3.3.1由對(duì)照品引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(S)

=3.1×10-2。

=9.5×10-2；

200 ml量瓶引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel(SV)=9.5×10-2/200=4.8×10-4。

3.3.1.5對(duì)照品溶液峰面積引入的不確定度urel(SA) 該不確定度的產(chǎn)生主要由重復(fù)進(jìn)樣所引起，由儀器給出的進(jìn)樣峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差為隨機(jī)測(cè)量，屬于A類不確定度。2份對(duì)照品分別進(jìn)樣5次和2次，用極差法分別計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)不確定度，重復(fù)測(cè)量的峰面積平均值R1為292 499和R2為321 287，極差R1為1 119，R2為29，當(dāng)n=5時(shí)極差系數(shù)C1=2.33，則標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(SA1)=R1/C1=1 119/2.33=480；當(dāng)n=2時(shí)極差系數(shù)C2=1.13，則標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(SA2)=R2/C2=29/1.13=26；則相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

=1.6×10-3。

合并以上各分量，則對(duì)照品引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

3.3.2供試品引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(T)

3.3.2.1供試品稱量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(Tm) 主要有供試品稱樣量和平均丸重。根據(jù)“3.3.1.1”所述um=3.1×10-2。供試品稱樣2份，分別為42.04和41.33 mg，則供試品稱樣的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為

3.3.2.2供試品稀釋引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(TV) 同“3.3.1.4”項(xiàng)下方法求得其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u(SV)=5.5×10-2，則100 ml量瓶引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel(TV)=5.5×10-2/100=5.5×10-4。

3.3.3供試品含量均勻度引入的不確定度urel(t)

3.3.3.1供試品稀釋引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(fV) 同“3.3.2.2”，則urel(fV)=5.5×10-4。

=8.1×10-3

3.4計(jì)算合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(P) 供試品含量測(cè)定結(jié)果P為101.64%，urel(P)由對(duì)照品引入的不確定度urel(S)和供試品引入的不確定度urel(T)以及供試品的含量均勻度引入的不確定度urel(f)所構(gòu)成，故

3.5計(jì)算擴(kuò)展不確定度(U) 按95%置信概率，取包含因子k=2，則U95=0.94%×2=1.88%。

3.6測(cè)量不確定度報(bào)告 本次實(shí)驗(yàn)單硝酸異山梨酯滴丸的含量為：(101.64±1.88)%。

4 討論

從以上數(shù)據(jù)可以看出，供試品的含量均勻度產(chǎn)生的不確定度所占比重較大，其次為對(duì)照品稱量，在計(jì)算中加入含量均勻度系數(shù)f，其作用是將樣品本身含量的不均勻性所產(chǎn)生的不確定度帶入公式，而與計(jì)算結(jié)果無(wú)關(guān)，故設(shè)其值為1。因此，在實(shí)際操作中，我們應(yīng)將供試品充分研勻，以保證取樣的均勻性，還可適當(dāng)加大對(duì)照品的稱樣量來(lái)減少由此帶來(lái)的不確定度。本次實(shí)驗(yàn)數(shù)學(xué)模型合理，結(jié)果可靠，可為同類方法測(cè)量不確定度評(píng)定提供一種參考思路和模式。

1 曹立全.注射用頭孢地嗪鈉含量測(cè)定的不確定度分析[J].天津藥學(xué)，2011，23(1)：9-10

2 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).CNASGL06化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南[M].北京:中國(guó)計(jì)量出版社，2007：7-8

2013-12-24

R927.11

A

1006-5687(2014)04-0004-03