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        黃芩對制劑微生物限度檢查方法的影響

        2014-08-08 23:11:53朱廣平徐曉玲
        無線互聯(lián)科技 2014年6期
        關(guān)鍵詞:黃芩

        朱廣平 徐曉玲

        摘要:目的 探討黃芩抑菌作用對制劑微生物限度檢查方法的影響,同時建立平哮合劑微生物限度與控制菌的檢查方法。方法 采用常規(guī)法對中藥制劑進(jìn)行微生物限度方法驗證,采用直接接種法進(jìn)行控制菌方法驗證。結(jié)論 黃芩的抑菌作用對制劑微生物限度檢查的影響與制劑中黃芩的濃度有關(guān),平哮合劑通過試驗未見影響。結(jié)果 平哮合劑可用常規(guī)法進(jìn)行微生物檢驗。

        關(guān)鍵詞:黃芩;微生物限度方法驗證;平哮合劑1儀器和材料

        1.1 儀器

        DNP-9082電熱恒溫培養(yǎng)箱和MJX-150霉菌培養(yǎng)箱(上海申賢儀器設(shè)備廠)、YXQ.SG41.280手提式消毒鍋(上海醫(yī)用核子儀器有限公司),100級潔凈工作臺。

        1.2 試劑

        培養(yǎng)基:營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG、培養(yǎng)基pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液。上述除供試品外均由北京三藥科技開發(fā)公司生產(chǎn),適應(yīng)性檢查均符合2010年版《中國藥典》一部附錄要求,可用于微生物限度檢查。供試品平哮合劑 (批號:130527),江蘇省中醫(yī)院配制。菌株:大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌驗證、黑曲霉,以上由南京市藥檢所提供,實驗所用的菌株均為第3代。

        2方法和結(jié)果

        2.1 供試液制備

        吸取供試品10ml,加入pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液90 ml,搖勻,作為1:10供試液。

        2.2 菌液制備

        接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,于30~35℃培養(yǎng)18~24小時;接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中,于23~28℃培養(yǎng)24~48小時,上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液10倍稀釋至相應(yīng)濃度制成每1ml含菌數(shù)為30~100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中,培養(yǎng)5~7天,加入3~5ml 0.9%無菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫。然后,吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi),用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50~100cfu的孢子懸液。

        2.3 微生物限度方法驗證

        2.3.1 試驗組

        按照2010年版《中國藥典》一部附錄要求,取供試液1ml,分別加入試驗菌液1ml,立即傾注15ml相應(yīng)培養(yǎng)基,平行制備2個平皿,待凝固后置規(guī)定溫度培養(yǎng),細(xì)菌培養(yǎng)3d,霉菌培養(yǎng)5d,觀察結(jié)果,記錄菌落數(shù)。

        2.3.2 菌液組

        按照2010年版《中國藥典》一部附錄要求,每平皿分別加入試驗菌液1ml,立即傾注瓊脂培養(yǎng)基15ml相應(yīng)培養(yǎng)基,待凝固后相應(yīng)溫度條件下倒培養(yǎng),計數(shù)。每株試驗菌平行制備2個平皿。

        2.3.3 供試品對照組

        按照2010年版《中國藥典》一部附錄要求,取供試液1ml,平行制備2個平皿,立即傾注相應(yīng)培養(yǎng)基15ml,凝固后于相應(yīng)溫度條件下培養(yǎng),按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。

        根據(jù)下式計算回收率,結(jié)果見表1。

        回收率(%)=(實驗組平均菌落數(shù)-供試品對照組平均菌落數(shù))/菌液組平均菌落數(shù)×100%。

        每種試驗菌進(jìn)行3次獨立的平行試驗,并分別計算各試驗菌每次試驗的回收。

        2.3.4 回收率驗證結(jié)果

        回收率均高于70%。

        2.4 控制菌驗證方法

        1ml大腸埃希菌(含菌數(shù)為10~100cfu),加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,經(jīng)35~37℃培養(yǎng)24小時。

        2.4.1 試驗組

        取供試液10ml及10-100cfu的大腸埃希菌液加入100ml膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基中檢查,35℃-37℃培養(yǎng)18h-24h,取上述增菌液0.2ml加入5mlMUG試管中,置35℃-37℃培養(yǎng)5h-24h,觀察熒光,再加入靛基質(zhì)試劑觀察結(jié)果。

        2.4.2 供試品組

        與試驗組同法,不加陽性菌液

        2.4.3 陰性組

        取pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液10ml,加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,后面與供試品組同法操作。

        2.4.4 空白組

        取100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基,經(jīng)35~37℃培養(yǎng)24小時后,后面同前。

        2.4.5 控制菌驗證結(jié)果

        3討論

        制劑對微生物限度檢驗時抑菌作用的產(chǎn)生,與制劑中的中藥材品種以及該品種的濃度有關(guān),平哮合劑中黃芩的生藥濃度為0.05g/ml,因為濃度較低,其抑菌作用未對微生物檢驗方法產(chǎn)生影響,可以用常規(guī)法檢驗。

        [參考文獻(xiàn)]

        [1]趙敏,譚鋼文,唐小異,等.十種中藥提取物與抗生素合用對銅綠假單胞菌最小抑菌濃度影響的體外實驗[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)報),2011,8(4):80-82.

        [2]國家藥典委員會.中國藥典2010年版[S].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄79-88.

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