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        黃芩對(duì)制劑微生物限度檢查方法的影響

        2014-08-08 23:11:53朱廣平徐曉玲
        無(wú)線互聯(lián)科技 2014年6期
        關(guān)鍵詞:黃芩

        朱廣平 徐曉玲

        摘要:目的 探討黃芩抑菌作用對(duì)制劑微生物限度檢查方法的影響,同時(shí)建立平哮合劑微生物限度與控制菌的檢查方法。方法 采用常規(guī)法對(duì)中藥制劑進(jìn)行微生物限度方法驗(yàn)證,采用直接接種法進(jìn)行控制菌方法驗(yàn)證。結(jié)論 黃芩的抑菌作用對(duì)制劑微生物限度檢查的影響與制劑中黃芩的濃度有關(guān),平哮合劑通過(guò)試驗(yàn)未見(jiàn)影響。結(jié)果 平哮合劑可用常規(guī)法進(jìn)行微生物檢驗(yàn)。

        關(guān)鍵詞:黃芩;微生物限度方法驗(yàn)證;平哮合劑1儀器和材料

        1.1 儀器

        DNP-9082電熱恒溫培養(yǎng)箱和MJX-150霉菌培養(yǎng)箱(上海申賢儀器設(shè)備廠)、YXQ.SG41.280手提式消毒鍋(上海醫(yī)用核子儀器有限公司),100級(jí)潔凈工作臺(tái)。

        1.2 試劑

        培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、MUG、培養(yǎng)基pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液。上述除供試品外均由北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn),適應(yīng)性檢查均符合2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄要求,可用于微生物限度檢查。供試品平哮合劑 (批號(hào):130527),江蘇省中醫(yī)院配制。菌株:大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌驗(yàn)證、黑曲霉,以上由南京市藥檢所提供,實(shí)驗(yàn)所用的菌株均為第3代。

        2方法和結(jié)果

        2.1 供試液制備

        吸取供試品10ml,加入pH 7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液90 ml,搖勻,作為1:10供試液。

        2.2 菌液制備

        接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,于30~35℃培養(yǎng)18~24小時(shí);接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中,于23~28℃培養(yǎng)24~48小時(shí),上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液10倍稀釋至相應(yīng)濃度制成每1ml含菌數(shù)為30~100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中,培養(yǎng)5~7天,加入3~5ml 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液,將孢子洗脫。然后,吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi),用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)為50~100cfu的孢子懸液。

        2.3 微生物限度方法驗(yàn)證

        2.3.1 試驗(yàn)組

        按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄要求,取供試液1ml,分別加入試驗(yàn)菌液1ml,立即傾注15ml相應(yīng)培養(yǎng)基,平行制備2個(gè)平皿,待凝固后置規(guī)定溫度培養(yǎng),細(xì)菌培養(yǎng)3d,霉菌培養(yǎng)5d,觀察結(jié)果,記錄菌落數(shù)。

        2.3.2 菌液組

        按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄要求,每平皿分別加入試驗(yàn)菌液1ml,立即傾注瓊脂培養(yǎng)基15ml相應(yīng)培養(yǎng)基,待凝固后相應(yīng)溫度條件下倒培養(yǎng),計(jì)數(shù)。每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿。

        2.3.3 供試品對(duì)照組

        按照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄要求,取供試液1ml,平行制備2個(gè)平皿,立即傾注相應(yīng)培養(yǎng)基15ml,凝固后于相應(yīng)溫度條件下培養(yǎng),按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底菌數(shù)。

        根據(jù)下式計(jì)算回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。

        回收率(%)=(實(shí)驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組平均菌落數(shù))/菌液組平均菌落數(shù)×100%。

        每種試驗(yàn)菌進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn),并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收。

        2.3.4 回收率驗(yàn)證結(jié)果

        回收率均高于70%。

        2.4 控制菌驗(yàn)證方法

        1ml大腸埃希菌(含菌數(shù)為10~100cfu),加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,經(jīng)35~37℃培養(yǎng)24小時(shí)。

        2.4.1 試驗(yàn)組

        取供試液10ml及10-100cfu的大腸埃希菌液加入100ml膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基中檢查,35℃-37℃培養(yǎng)18h-24h,取上述增菌液0.2ml加入5mlMUG試管中,置35℃-37℃培養(yǎng)5h-24h,觀察熒光,再加入靛基質(zhì)試劑觀察結(jié)果。

        2.4.2 供試品組

        與試驗(yàn)組同法,不加陽(yáng)性菌液

        2.4.3 陰性組

        取pH 7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液10ml,加入100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基中,后面與供試品組同法操作。

        2.4.4 空白組

        取100ml膽鹽乳糖培養(yǎng)基,經(jīng)35~37℃培養(yǎng)24小時(shí)后,后面同前。

        2.4.5 控制菌驗(yàn)證結(jié)果

        3討論

        制劑對(duì)微生物限度檢驗(yàn)時(shí)抑菌作用的產(chǎn)生,與制劑中的中藥材品種以及該品種的濃度有關(guān),平哮合劑中黃芩的生藥濃度為0.05g/ml,因?yàn)闈舛容^低,其抑菌作用未對(duì)微生物檢驗(yàn)方法產(chǎn)生影響,可以用常規(guī)法檢驗(yàn)。

        [參考文獻(xiàn)]

        [1]趙敏,譚鋼文,唐小異,等.十種中藥提取物與抗生素合用對(duì)銅綠假單胞菌最小抑菌濃度影響的體外實(shí)驗(yàn)[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)報(bào)),2011,8(4):80-82.

        [2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2010年版[S].一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄79-88.

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