巢蓓，史偉峰，張麗榮，張志堅(jiān)

（1.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；2.常州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州213003）

2型糖尿病腎病患者血清sTWEAK蛋白含量的測(cè)定及其臨床意義

巢蓓1，史偉峰2，張麗榮2，張志堅(jiān)1

（1.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江212013；2.常州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇常州213003）

目的：探討測(cè)定血清腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑（serum TNF like weak inducer of apoptosis，sTWEAK）的含量在診斷糖尿病腎病以及評(píng)價(jià)治療效果方面的臨床意義。方法：將研究對(duì)象按診斷標(biāo)準(zhǔn)分為健康對(duì)照組40例（健康組，來(lái)自體檢人群），單純2型糖尿病組60例（T2DM組），2型糖尿病合并腎病患者組103例（T2DN組）。另根據(jù)腎臟損害程度的Mogensen分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，將T2DN組分為3個(gè)亞組：正常白蛋白尿組（NAU）、微量白蛋白尿組（MAU）和大量白蛋白尿組（MaAU）。用ELISA法測(cè)定上述各組患者血清中sTWEAK的含量。觀察T2DN組不同等級(jí)2型糖尿病腎病患者sTWEAK含量的動(dòng)態(tài)變化，以及治療后患者血清sTWEAK含量的恢復(fù)情況。結(jié)果：在上述各組人群的血清中均可測(cè)出不同水平的sTWEAK。T2DN組和T2DM組sTWEAK含量明顯低于健康組（P＜0.01）；T2DN組血清sTWEAK含量明顯低于T2DM組（P＜0.01）。隨著腎臟損害程度的增加，T2DN組患者血清sTWEAK濃度相應(yīng)降低（P＜0.01），治療后血清sTWEAK濃度較治療前明顯提高（P＜0.05）。結(jié)論：動(dòng)態(tài)檢測(cè)血清內(nèi)sTWEAK含量對(duì)于觀察2型糖尿病腎病的病情以及評(píng)價(jià)臨床治療效果具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

2型糖尿病腎??；血清腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑；Mogensen分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

目前糖尿病患者中腎病的發(fā)病率為30%～40%，在終末期腎病需要透析的患者中，糖尿病腎病占50%以上［1］。但是目前糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制尚不明確，臨床上仍缺乏早期檢測(cè)方法及有效防治手段。尋找新的實(shí)驗(yàn)室診斷和臨床療效評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)于提高糖尿病腎病的診斷和治療水平具有重要的實(shí)用價(jià)值。腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑（TNF like weak inducer of apoptosis，TWEAK）作為T(mén)NF家族的新成員，具有介導(dǎo)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、凋亡，調(diào)節(jié)機(jī)體炎性反應(yīng)和血管生成等多重生物學(xué)作用［2］，在動(dòng)脈硬化［3］、炎癥［4］、腫瘤［5］等疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。動(dòng)態(tài)檢測(cè)患者血清中TWEAK（sTWEAK）水平的變化，對(duì)于上述疾病的早期診斷和病情監(jiān)測(cè)具有重要的臨床意義。但是在2型糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，患者（特別是中國(guó)人群）sTWEAK水平呈現(xiàn)怎樣的變化規(guī)律，目前尚不明確。我們通過(guò)測(cè)定sTWEAK在健康人群、單純2型糖尿病患者和2型糖尿病腎病患者血清中的含量，比較3組間的差異，探討其在診斷糖尿病腎病以及評(píng)價(jià)該疾病的治療效果方面的臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

收集2012年1月至2013年10月住院患者中，經(jīng)過(guò)臨床確診的單純2型糖尿病合并腎病患者103例（T2DN組），其病程均為2～4期，排除心血管系統(tǒng)并發(fā)癥；單純2型糖尿病組60例（T2DM組），排除對(duì)腎臟排泄有影響的疾病及心血管系統(tǒng)并發(fā)癥；正常人40例作為健康對(duì)照組（健康組），選自門(mén)診體檢的健康人群，均排除糖尿病，腎臟疾病，自身免疫性疾病，冠心病，高血壓等對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有影響的疾病。3組年齡30～65歲，性別不限。根據(jù)腎臟損害程度的Mogensen分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，再將T2DN組分為3個(gè)亞組：正常白蛋白尿組（NAU，n＝48）、微量白蛋白尿組（MAU，n＝35）和大量白蛋白尿組（MaAU，n＝20）。對(duì)T2DN組患者采用降糖、降壓、調(diào)脂等綜合治療3個(gè)月后跟蹤隨訪，選取尿蛋白指標(biāo)好轉(zhuǎn)者36例，測(cè)定sTWEAK濃度，并與治療前比較。

1.2 方法

用血清管抽取各組患者早晨空腹靜脈血，離心分離出血清待用。采用ELISA法檢測(cè)sTWEAK；高壓液相離子交換層析法檢測(cè)糖化血紅蛋白（HbA1c）；酶試劑法檢測(cè)三酰甘油和膽固醇；快速法檢測(cè)高密度脂蛋白（HDL-C）；普通法檢測(cè)低密度脂蛋白（LDL-C）；尿素酶-谷氨酸脫氫酶法檢測(cè)血尿素氮濃度；苦味酸法檢測(cè)血肌酐濃度；葡萄糖氧化酶法檢測(cè)空腹血糖；免疫比濁法檢測(cè)尿微量蛋白。主要檢測(cè)儀器為酶聯(lián)免疫分光光度儀（Multiskan MK3型，芬蘭Thermo Labsystems公司產(chǎn)品）；血生化檢測(cè)儀（日立7600）；HbAlc測(cè)定儀（日本東芝公司HLC-723型）和IMMAGE 800尿微量蛋白檢測(cè)儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，符合正態(tài)分布或近似正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)用±s表示，對(duì)非正態(tài)分布數(shù)據(jù)用M（P25～P75）表示。兩組定量資料的比較采用t檢驗(yàn)，多組間定量資料比較采用方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般臨床資料與生化指標(biāo)比較

各組平均年齡、性別之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；3組間膽固醇、三酰甘油、HDL-C、LDLC的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與健康組比較，T2DM組和T2DN組的HbA1c和空腹血糖明顯增高（P＜0.05）；T2DM組和T2DN組HbA1c和空腹血糖間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 T2DN組、健康組和T2DM組sTWEAK含量的比較

在健康人群、單純2型糖尿病患者及2型糖尿病合并腎病患者中均可測(cè)出sTWEAK。T2DN組sTWEAK含量［（246.8±142.1）pg／mL］及T2DM組sTWEAK含量［（598.0±209.3）pg／mL］均低于健康組［（756.9±246.7）pg／mL］；T2DN組與健康組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝2.712，P＜0.01）；T2DM組與健康組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；T2DN組與T2DM組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝2.693，P＜0.01）。

表1 各組臨床資料與生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果比較

2.3 2型糖尿病合并腎病組內(nèi)各亞組患者sTWEAK含量以及腎功能指標(biāo)的比較

比較3個(gè)亞組患者sTWEAK含量以及腎功能指標(biāo)，結(jié)果表明，隨著腎臟損害程度的加重，血尿素氮和肌酐含量呈明顯上升趨勢(shì)；與此相反，sTWEAK的含量呈明顯下降趨勢(shì)。組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 不同亞組的2型糖尿病腎病患者sTWEAK含量和腎功能指標(biāo)的比較

2.4 T2DN治療前后sTWEAK含量的變化

對(duì)選取的36例研究對(duì)象治療前后的sTWEAK含量進(jìn)行比較。結(jié)果表明，治療后sTWEAK含量［（379.1±135.4）pg／mL］較治療前［（237.2± 143.2）pg／mL］明顯升高（t＝2.243，P＜0.05）。

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病常見(jiàn)的并發(fā)癥，是糖尿病全身性微血管病變表現(xiàn)之一。由于該疾病患者體內(nèi)存在復(fù)雜的代謝紊亂，腎臟損傷一旦發(fā)展到終末期，往往比其他腎臟疾病的治療更加棘手。目前臨床上對(duì)糖尿病腎病仍缺乏早期檢測(cè)手段及有效防治方法。腎功能的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)，如尿微量蛋白，血尿素氮，血肌酐等都不能及早發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病。本研究數(shù)據(jù)顯示在糖尿病腎病早期（NAU組）血尿素氮，血肌酐，尿微量白蛋白基本還在正常范圍，而sTWEAK水平已經(jīng)明顯低于健康人群，提示sTWEAK可成為一種早期診斷糖尿病腎病的敏感指標(biāo)。TWEAK定位于17號(hào)染色體P13.1，內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞都可表達(dá)TWEAK蛋白，TWEAK全長(zhǎng)蛋白可被蛋白酶水解為可溶性的sTWEAK。sTWEAK與TWEAK具有類(lèi)似的生物學(xué)活性，通過(guò)與細(xì)胞表面的特異性受體Fn14結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，致血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌趨化因子和炎性因子［6］。sTWEAK蛋白與血管內(nèi)皮細(xì)胞功能密切相關(guān)，是其損傷的標(biāo)志物［7］。而內(nèi)皮細(xì)胞受損及低度炎癥反應(yīng)均是糖尿病腎病的可能發(fā)病機(jī)制。因此，sTWEAK極有可能以腎病的血管內(nèi)皮細(xì)胞作為靶細(xì)胞，參與糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展。

本研究結(jié)果表明，T2DN組sTWEAK含量明顯低于健康組和T2DM組（P＜0.01）；隨著腎臟損害程度的增加，sTWEAK濃度相應(yīng)降低（P＜0.01）；治療后sTWEAK濃度較治療前有所升高（P＜0.05）。由此推測(cè)，腎臟損傷后，機(jī)體通過(guò)某些代謝途徑使sTWEAK水平降低，但具體機(jī)制目前尚不明確。Winkles［8］提出，正常生理情況下，腎臟中Fn14受體表達(dá)相對(duì)較低，但病理情況下，F(xiàn)n14表達(dá)增強(qiáng)，sTWEAK與Fn14結(jié)合增多可能導(dǎo)致sTWEAK濃度降低。內(nèi)皮細(xì)胞損傷時(shí)sTWEAK分泌減少，也可能影響其血清含量。也有研究提出，因?yàn)閟TWEAK與巨噬細(xì)胞表面的受體CD163結(jié)合，使TWEAK的清除增加，導(dǎo)致sTWEAK濃度下降［9］。本研究發(fā)現(xiàn)sTWEAK的含量隨著T2DN組的Mogensen等級(jí)增高而降低，提示TWEAK在糖尿病腎病的發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。比較同一患者治療前后sTWEAK含量，發(fā)現(xiàn)治療后尿蛋白指標(biāo)好轉(zhuǎn)的患者，其含量有所回升。上述結(jié)果提示，當(dāng)糖尿病腎病患者的病情進(jìn)展時(shí)，因炎性反應(yīng)加重，巨噬細(xì)胞活性增強(qiáng)，細(xì)胞表面的受體CD163表達(dá)增加，結(jié)合和清除TWEAK能力增強(qiáng)；與此同時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞損傷加重，sTWEAK分泌減少。上述因素共同導(dǎo)致sTWEAK含量降低；反之，當(dāng)通過(guò)治療使腎功能好轉(zhuǎn)時(shí)，機(jī)體炎性反應(yīng)減輕，巨噬細(xì)胞活性下降，TWEAK的清除減少，同時(shí)內(nèi)皮細(xì)胞得以部分修復(fù)，sTWEAK分泌相應(yīng)增加，sTWEAK含量即隨之增高。已有研究證實(shí)sTWEAK與腎臟疾病患者微炎癥狀態(tài)相關(guān)［10］，我們的研究結(jié)果進(jìn)一步提示TWEAK參與腎臟微血管病變的形成過(guò)程。

綜上所述，我們認(rèn)為可以將sTWEAK作為監(jiān)測(cè)糖尿病腎病的病理進(jìn)程和評(píng)價(jià)臨床治療效果的一項(xiàng)敏感的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)。關(guān)于糖尿病腎病患者sTWEAK含量發(fā)生變化的內(nèi)在分子機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。

［1］李敏州，高彥彬，馬鳴飛，等.糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（22）：165－169.

［2］Chorianopoulos E，Jarr K，Steen H，et al.Soluble TWEAK ismarkedly upregulated in patientswith ST-elevation myocardial infarction and relatde to an adverse short-term outcome［J］.Atherosclerosis，2010，211（1）：322－326.

［3］Jasiewicz M，Kowal K，Kowal-Bielecka O，etal.Serum levels of CD163 and TWEAK in patientswith pulmonary arterial hypertension［J］.Cytokine，2014，66（1）：40－45.

［4］夏志銀，馬玉華，董海英，等.促紅素促進(jìn)慢性腎功能不全患者STWEAK蛋白表達(dá)［J］.四川醫(yī)學(xué)，2013，34（12）：1877－1880.

［5］高智亭，潘海洋，劉殿昌，等.腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑在原發(fā)性肝癌患者血清中的表達(dá)及其意義［J］.中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展，2013，16（2）：112－116.

［6］王其磊，任滿(mǎn)意，王德金，等.TWEAK通過(guò)P38MAPK途徑促進(jìn)大鼠心肌成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原和MMP-1的表達(dá)［J］.山東大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2012，50（11）：134－136.

［7］Yilmaz MI，Carrero JJ，Ortiz A，et al.Soluble TWEAK plasma levels as a novek biomarker of endothelial function in patientswith chronic kideney disease［J］.Clin J Am Soc Nephrol，2009，4（11）：1716－1723.

［8］Winkles JA.The TWEAK-Fn14 cytokine-receptor axis：discovery，biology and therapeutic targeting［J］.Nat Rev Drug Discov，2008，7（5）：411－425.

［9］Bover LC，Cardo-Vila M，Kuniyasu A，et al.A previously unrecognized protein-protein interaction between TWEAK and CD163：potential biological implications［J］.J Immunol，2007，178（12）：8183－8194.

［10］張文文.腹膜透析患者血清TWEAK水平與微炎癥狀態(tài)及動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性研究［D］.蘇州：蘇州大學(xué)，2012.

Exam ination of sTWEAK in type 2 diabetic patients w ith nephropathy and its clinical significances

CHAO Bei1，SHIWei-Feng2，ZHANG Li-rong2，ZHANG Zhi-jian1
（1.School of Medicine，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013；2.Department of Clinical Laboratory，the First People′s Hospital of Changzhou，Changzhou Jiangsu 213003，China）

Objective：To explore the clinical significances of the serum TNF likeweak inducer of apoptosis（sTWEAK）in the diagnosis of diabetic nephropathy and the evaluation of the therapeutic efficacy of the disease.M ethods：The objectswere divided into 40 cases of healthy control group（group NC）；60 cases of simple type 2 diabetesmellitus group（group T2DM）；and 103 cases of type 2 diabetic patients with nephropathy group（group T2DN）.According to the Mogensen classification of kidney damage degree，the T2DN group was further divided into three subgroups：normal albuminuria group（NAU），microalbuminuria group（MAU）and macroalbuminuria group（MaAU）.The concentrations of sTWEAK in the serum of three groupswere examined by ELISA method.In addition，the concentrations of sTWEAK in T2DN patients，before and after treatment，were compared.Results：Different levels of the sTWEAK in the three groups could be detected.In T2DN group and T2DM group，the contents of sTWEAK were significantly lower than that in NC group（P＜0.01）；in T2DN group，the content of sTWEAK was significantly lower than that in T2DM group（P＜0.01）.Along with the increase of the degree of renal damage，the concentration of sTWEAK decreased（P＜0.01）；after treatment，the concentration of sTWEAK increased obviously（P＜0.05）.Conclusion：Examination of sTWEAK in type 2 diabetic patientswith nephropathy had the clinicalsignificances in the diagnosis and the evaluation of the therapeutic efficacy of the disease.

type 2 diabetic nephropathy；serum TNF like weak inducer of apoptosis；Mogensen grade standard

R587.1

A

1671－7783（2014）04－0320－04

10.13312／j.issn.1671-7783.y140120

巢蓓（1981—），女，江蘇常州人，主管技師，主要從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作；張志堅(jiān)（通訊作者），副研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail：zzj＠ujs.edu.cn

2014－05－08 ［編輯］陳海林