宋勁燕+曹建英

[摘要] 目的 建立羅氟司特原料中殘留溶劑的測定方法。 方法 羅氟司特中異丙醇、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺（DMF）的殘留量采用頂空進(jìn)樣氣相色譜法，使用DB-624毛細(xì)管柱，F(xiàn)ID檢測器。采用程序升溫法測定，氮?dú)鉃檩d氣，流速為2.5 ml/min，以二甲基亞砜（DMSO）為溶劑。 結(jié)果 被測溶劑均能得到良好的分離，異丙醇的濃度在199.4～598.1 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9998，平均回收率為96.3%，RSD為2.13%；乙酸乙酯的濃度在200.1～600.2 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9996，平均回收率為98.8%，RSD為1.79%；DMF的濃度在35.2～105.5 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9997，平均回收率為98.8%，RSD為2.42%。 結(jié)論 該方法能夠準(zhǔn)確測定羅氟司特中的殘留溶劑，可用于羅氟司特原料藥有機(jī)溶劑的檢測。

[關(guān)鍵詞] 頂空進(jìn)樣氣相色譜法；羅氟司特；殘留溶劑

[中圖分類號(hào)] O657.7+1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1674-4721（2014）04（c）-0058-03

Residual solvents of roflumilast determined by headspace capillary gas chromatography

SONG Jin-yan CAO Jian-ying

Tianjin Nankai Yungong Pharmaceutical Science and Technology Co.,Ltd.,Tianjin 300384,China

[Abstract] Objective To establish a method for the determination of residual solvents in roflumilast material. Methods The residual solvents of isopropanol,ethyl acetate and N,N-dimethylformamide in roflumilast were determined by headspace gas chromatography,and DB-624 capillary column,FID detector were used.The column was subjected totemperature programming,the carrier gas was nitrogen,the flow rate was 2.5 ml/min,the solvent was dimethyl sulfoxide(DMSO). Results The result shows that the solvents were completely separated.The standard curves of isopropanol was linear in the concentration range of 199.4-598.1 μg/ml,r=0.9998,the average recovery was 96.3%,with RSD of 2.13%.The standard curves of ethyl acetate was linear in the concentration range of 200.1-600.2 μg/ml,r=0.9996,theaverage recovery rate was 98.8%,with RSD of 1.79%.The standard curves of N,N-dimethylformamide waslinear in the concentration range of 35.2-105.5μg/ml,r=0.9997,the average recovery rate was 98.8%,with RSD of 2.42%. Conclusion This method is proved to be accurate and reliable for the accurate determination of residual solvents in roflumilast.It can be used in the detection for the organic solvent of roflumilast crude drug.

[Key words] Headspace gas chromatography;Roflumilast;Residual solvents

羅氟司特是由Nycomed公司生產(chǎn)上市的磷酸二酯酶-4 （ PDE-4） 抑制劑，商品名Daxas。2011年2月28日，羅氟司特經(jīng)美國FDA 批準(zhǔn)上市，用于慢性阻塞性肺?。–OPD）的治療。本品為選擇性PDE-4抑制劑，是10多年來首次獲得歐盟批準(zhǔn)的新一類治療COPD的藥物。本品為一日1 次用藥的口服片劑，須與其他支氣管擴(kuò)張藥合用，適用于有頻繁加重病史的成人患者慢性支氣管炎相關(guān)嚴(yán)重COPD的維持治療。研究證明，本品可顯著改善患者中至重度加重發(fā)作和舒張前FEV1，不管是否與長效β2 激動(dòng)劑聯(lián)用。研究還證明，與安慰劑相比，本品可顯著改善患者的肺功能。本品在合成、精制過程中用到了ICH限制的溶劑，包括三類溶劑異丙醇和乙酸乙酯和及二類溶劑N，N-二甲基甲酰胺（DMF）。本文按照中國藥典2010年版[1]與ICH[2-3]相關(guān)要求，建立了頂空氣相色譜法測定該藥中異丙醇、乙酸乙酯、DMF的殘留量[4-9]。

1 儀器與試劑

Agilent 7820 A氣相色譜儀、Agilent 7697 A頂空自動(dòng)進(jìn)樣裝置、安捷倫色譜工作站；賽多利斯BP211D電子分析天平。異丙醇、乙酸乙酯、DMF、二甲基亞砜（DMSO）均為分析純。羅氟司特原料樣品由天津南開允公醫(yī)藥科技有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 氣相色譜條件

色譜柱為DB-624（30 m×0.32 mm，1.80 μm），柱溫采用程序升溫：30℃保持6 min，以10℃/min升溫至120℃后，再以20℃/min升溫至220℃，保持10 min；采用氮?dú)庾鳛檩d氣，流速為2.5 ml/min，分流比為5∶1；檢測器為FID，溫度為250℃；頂空平衡溫度為110℃，平衡時(shí)間為45 min，進(jìn)樣口溫度為200℃，進(jìn)樣體積為1 ml。

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取異丙醇、乙酸乙酯和DMF各適量，加DMSO溶解并稀釋制成每1 ml中約含異丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF0.088 mg的溶液，精密量取2 ml，置頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備取本品，精密稱定，加二甲基亞砜溶解并稀釋制成每1 ml約含0.1 g的溶液，精密量取2 ml，置頂空瓶中，密封，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取本品對(duì)照品溶液，依法測定，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，由圖1可知，各溶劑峰均能分開，峰形良好。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑峰面積的RSD分別為1.69%、1.75%和2.33%。

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖

2.4線性關(guān)系考察

加DMSO溶解并稀釋制成每1 ml中含異丙醇5.0 mg、乙酸乙酯5.0 mg、DMF0.88 mg的混合溶液。精密量取0.4、0.6 、0.8、1.0、1.2 ml分別置10 ml量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻，依法檢查。以濃度C為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 精密度試驗(yàn)

供試品溶液加入100%指示濃度的各試劑，制備6份，依次測定，記錄色譜圖。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑回收率的RSD分別為2.13%、1.79%和2.42%（表2）。

表2 精密度檢查結(jié)果

2.6 中間精密度試驗(yàn)

另一分析人員獨(dú)立建立系統(tǒng)，供試品溶液加入100%指示濃度的各試劑，制備6份，依次測定，記錄色譜圖。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑回收率的RSD分別為1.03%、1.50%和1.49%。兩人之間回收率的RSD分別為1.86%、1.64%和1.93%，故該方法的重現(xiàn)性良好（表3）。

表3 中間精密度檢查結(jié)果

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱取異丙醇、乙酸乙酯、DMF適量，加供試品溶液溶解，并稀釋制成每1 ml中含異丙醇5 mg、乙酸乙酯5 mg、DMF 0.88 mg的溶液，精密量取上述溶液0.8、1.0、1.2 ml分別置10 ml量瓶中，加供試品稀釋至刻度，搖勻，作為回收率測定供試品溶液；另取對(duì)照品溶液和供試品溶液，依法測定。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑平均回收率分別為96.3%、98.8%和98.8%， RSD分別為2.13%、1.79%和2.42%（表4~表6）。

表4 殘留溶劑異丙醇測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

表5 殘留溶劑乙酸乙酯測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

表6 殘留溶劑N,N-二甲基甲酰胺測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 檢出限確定

精密稱取異丙醇、乙酸乙酯和DMF各適量，分別加DMSO溶解并稀釋制成每1 ml中含異丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF 0.088 mg的3種溶液。分別取以上3種溶液，逐級(jí)稀釋，取信噪比為3∶1時(shí)的進(jìn)樣濃度作為檢出限，異丙醇的檢出限濃度為：0.299 μg/ml；乙酸乙酯的檢出限濃度為0.102 μg/ml；DMF的檢出限濃度為2.110 μg/ml。

2.9 樣品測定

取本品3批依法檢查，結(jié)果見表7。

表7 3批樣品檢查結(jié)果

3 討論

3.1 程序升溫的選擇

異丙醇、乙酸乙酯、DMF3種溶劑中，異丙醇與乙酸乙酯的沸點(diǎn)非常接近，在80℃左右，而DMF的沸點(diǎn)較高，達(dá)到150℃以上，為了達(dá)到有效的分離，采用了程序升溫，在220℃時(shí)保持10 min，保證溶媒DMSO全部被吹出，不會(huì)影響下一次進(jìn)樣的測定。

3.2 溶媒的選擇

根據(jù)羅氟司特的溶解特性——在水中幾乎不溶，同時(shí)考慮沸點(diǎn)與出峰時(shí)間，采用DMSO作為溶媒，增加了本品的溶解度，提高了對(duì)殘留溶劑檢出的靈敏度，異丙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比較理想的分離。

綜上所述，經(jīng)過方法學(xué)考察，本方法專屬性強(qiáng)，經(jīng)過檢測限的測定，說明本方法有較高的靈敏度，能夠保證對(duì)低限度的溶劑進(jìn)行準(zhǔn)確的測定。通過線性試驗(yàn)及回收率試驗(yàn)的測定，進(jìn)一步說明本品能夠?qū)埩羧軇┻M(jìn)行準(zhǔn)確定量。

[參考文獻(xiàn)]

[1]國家藥典委員會(huì).中國藥典.二部.[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄61.

[2]周海均.藥品注冊(cè)的國際技術(shù)要求·質(zhì)量部分[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.

[3]胡昌勤.藥物殘留溶劑分析[Ｍ].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008.

[4]張曉娟，朱曉斌.氣相色譜法測定來曲唑中甲醇、異丙醇、叔丁醇、乙酸乙酯以及DMF的殘留量[J].廣東化工，2012，39（3）：166-167.

[5]顧紅.藥物合成過程中有機(jī)殘留量的檢測[J].天津化工，2004，18（6）：52-54.

[6]江冬英，胡巧云.頂空進(jìn)樣法測定更昔洛韋的殘留溶劑[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，8（25）：56-58.

[7]林斌.氣相色譜法測定他克莫司中的8種殘留溶劑[J].海峽藥學(xué)，2012，24（7）：60-62.

[8]陳麗萍，丁邦東，譚志剛，等.頂空氣相色譜法測定醋酸地塞米松原料藥中殘留溶劑的含量[J].天津藥學(xué)，2012， 24（1）：12-14.

[9]俞建君.氣相色譜法測定奧氮平原料藥中6種殘留溶劑含量[J].廣東化工，2011，10（38）：159-160.

（收稿日期：2014-03-12本文編輯：許俊琴）

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖

2.4線性關(guān)系考察

加DMSO溶解并稀釋制成每1 ml中含異丙醇5.0 mg、乙酸乙酯5.0 mg、DMF0.88 mg的混合溶液。精密量取0.4、0.6 、0.8、1.0、1.2 ml分別置10 ml量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻，依法檢查。以濃度C為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 精密度試驗(yàn)

供試品溶液加入100%指示濃度的各試劑，制備6份，依次測定，記錄色譜圖。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑回收率的RSD分別為2.13%、1.79%和2.42%（表2）。

表2 精密度檢查結(jié)果

2.6 中間精密度試驗(yàn)

另一分析人員獨(dú)立建立系統(tǒng)，供試品溶液加入100%指示濃度的各試劑，制備6份，依次測定，記錄色譜圖。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑回收率的RSD分別為1.03%、1.50%和1.49%。兩人之間回收率的RSD分別為1.86%、1.64%和1.93%，故該方法的重現(xiàn)性良好（表3）。

表3 中間精密度檢查結(jié)果

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱取異丙醇、乙酸乙酯、DMF適量，加供試品溶液溶解，并稀釋制成每1 ml中含異丙醇5 mg、乙酸乙酯5 mg、DMF 0.88 mg的溶液，精密量取上述溶液0.8、1.0、1.2 ml分別置10 ml量瓶中，加供試品稀釋至刻度，搖勻，作為回收率測定供試品溶液；另取對(duì)照品溶液和供試品溶液，依法測定。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑平均回收率分別為96.3%、98.8%和98.8%， RSD分別為2.13%、1.79%和2.42%（表4~表6）。

表4 殘留溶劑異丙醇測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

表5 殘留溶劑乙酸乙酯測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

表6 殘留溶劑N,N-二甲基甲酰胺測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 檢出限確定

精密稱取異丙醇、乙酸乙酯和DMF各適量，分別加DMSO溶解并稀釋制成每1 ml中含異丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF 0.088 mg的3種溶液。分別取以上3種溶液，逐級(jí)稀釋，取信噪比為3∶1時(shí)的進(jìn)樣濃度作為檢出限，異丙醇的檢出限濃度為：0.299 μg/ml；乙酸乙酯的檢出限濃度為0.102 μg/ml；DMF的檢出限濃度為2.110 μg/ml。

2.9 樣品測定

取本品3批依法檢查，結(jié)果見表7。

表7 3批樣品檢查結(jié)果

3 討論

3.1 程序升溫的選擇

異丙醇、乙酸乙酯、DMF3種溶劑中，異丙醇與乙酸乙酯的沸點(diǎn)非常接近，在80℃左右，而DMF的沸點(diǎn)較高，達(dá)到150℃以上，為了達(dá)到有效的分離，采用了程序升溫，在220℃時(shí)保持10 min，保證溶媒DMSO全部被吹出，不會(huì)影響下一次進(jìn)樣的測定。

3.2 溶媒的選擇

根據(jù)羅氟司特的溶解特性——在水中幾乎不溶，同時(shí)考慮沸點(diǎn)與出峰時(shí)間，采用DMSO作為溶媒，增加了本品的溶解度，提高了對(duì)殘留溶劑檢出的靈敏度，異丙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比較理想的分離。

綜上所述，經(jīng)過方法學(xué)考察，本方法專屬性強(qiáng)，經(jīng)過檢測限的測定，說明本方法有較高的靈敏度，能夠保證對(duì)低限度的溶劑進(jìn)行準(zhǔn)確的測定。通過線性試驗(yàn)及回收率試驗(yàn)的測定，進(jìn)一步說明本品能夠?qū)埩羧軇┻M(jìn)行準(zhǔn)確定量。

[參考文獻(xiàn)]

[1]國家藥典委員會(huì).中國藥典.二部.[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄61.

[2]周海均.藥品注冊(cè)的國際技術(shù)要求·質(zhì)量部分[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.

[3]胡昌勤.藥物殘留溶劑分析[Ｍ].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008.

[4]張曉娟，朱曉斌.氣相色譜法測定來曲唑中甲醇、異丙醇、叔丁醇、乙酸乙酯以及DMF的殘留量[J].廣東化工，2012，39（3）：166-167.

[5]顧紅.藥物合成過程中有機(jī)殘留量的檢測[J].天津化工，2004，18（6）：52-54.

[6]江冬英，胡巧云.頂空進(jìn)樣法測定更昔洛韋的殘留溶劑[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，8（25）：56-58.

[7]林斌.氣相色譜法測定他克莫司中的8種殘留溶劑[J].海峽藥學(xué)，2012，24（7）：60-62.

[8]陳麗萍，丁邦東，譚志剛，等.頂空氣相色譜法測定醋酸地塞米松原料藥中殘留溶劑的含量[J].天津藥學(xué)，2012， 24（1）：12-14.

[9]俞建君.氣相色譜法測定奧氮平原料藥中6種殘留溶劑含量[J].廣東化工，2011，10（38）：159-160.

（收稿日期：2014-03-12本文編輯：許俊琴）

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖

2.4線性關(guān)系考察

加DMSO溶解并稀釋制成每1 ml中含異丙醇5.0 mg、乙酸乙酯5.0 mg、DMF0.88 mg的混合溶液。精密量取0.4、0.6 、0.8、1.0、1.2 ml分別置10 ml量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻，依法檢查。以濃度C為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 線性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 精密度試驗(yàn)

供試品溶液加入100%指示濃度的各試劑，制備6份，依次測定，記錄色譜圖。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑回收率的RSD分別為2.13%、1.79%和2.42%（表2）。

表2 精密度檢查結(jié)果

2.6 中間精密度試驗(yàn)

另一分析人員獨(dú)立建立系統(tǒng)，供試品溶液加入100%指示濃度的各試劑，制備6份，依次測定，記錄色譜圖。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑回收率的RSD分別為1.03%、1.50%和1.49%。兩人之間回收率的RSD分別為1.86%、1.64%和1.93%，故該方法的重現(xiàn)性良好（表3）。

表3 中間精密度檢查結(jié)果

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱取異丙醇、乙酸乙酯、DMF適量，加供試品溶液溶解，并稀釋制成每1 ml中含異丙醇5 mg、乙酸乙酯5 mg、DMF 0.88 mg的溶液，精密量取上述溶液0.8、1.0、1.2 ml分別置10 ml量瓶中，加供試品稀釋至刻度，搖勻，作為回收率測定供試品溶液；另取對(duì)照品溶液和供試品溶液，依法測定。異丙醇、乙酸乙酯和DMF各溶劑平均回收率分別為96.3%、98.8%和98.8%， RSD分別為2.13%、1.79%和2.42%（表4~表6）。

表4 殘留溶劑異丙醇測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

表5 殘留溶劑乙酸乙酯測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

表6 殘留溶劑N,N-二甲基甲酰胺測定回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 檢出限確定

精密稱取異丙醇、乙酸乙酯和DMF各適量，分別加DMSO溶解并稀釋制成每1 ml中含異丙醇0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg、DMF 0.088 mg的3種溶液。分別取以上3種溶液，逐級(jí)稀釋，取信噪比為3∶1時(shí)的進(jìn)樣濃度作為檢出限，異丙醇的檢出限濃度為：0.299 μg/ml；乙酸乙酯的檢出限濃度為0.102 μg/ml；DMF的檢出限濃度為2.110 μg/ml。

2.9 樣品測定

取本品3批依法檢查，結(jié)果見表7。

表7 3批樣品檢查結(jié)果

3 討論

3.1 程序升溫的選擇

異丙醇、乙酸乙酯、DMF3種溶劑中，異丙醇與乙酸乙酯的沸點(diǎn)非常接近，在80℃左右，而DMF的沸點(diǎn)較高，達(dá)到150℃以上，為了達(dá)到有效的分離，采用了程序升溫，在220℃時(shí)保持10 min，保證溶媒DMSO全部被吹出，不會(huì)影響下一次進(jìn)樣的測定。

3.2 溶媒的選擇

根據(jù)羅氟司特的溶解特性——在水中幾乎不溶，同時(shí)考慮沸點(diǎn)與出峰時(shí)間，采用DMSO作為溶媒，增加了本品的溶解度，提高了對(duì)殘留溶劑檢出的靈敏度，異丙醇、乙酸乙酯和DMF得到了比較理想的分離。

綜上所述，經(jīng)過方法學(xué)考察，本方法專屬性強(qiáng)，經(jīng)過檢測限的測定，說明本方法有較高的靈敏度，能夠保證對(duì)低限度的溶劑進(jìn)行準(zhǔn)確的測定。通過線性試驗(yàn)及回收率試驗(yàn)的測定，進(jìn)一步說明本品能夠?qū)埩羧軇┻M(jìn)行準(zhǔn)確定量。

[參考文獻(xiàn)]

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[2]周海均.藥品注冊(cè)的國際技術(shù)要求·質(zhì)量部分[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.

[3]胡昌勤.藥物殘留溶劑分析[Ｍ].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008.

[4]張曉娟，朱曉斌.氣相色譜法測定來曲唑中甲醇、異丙醇、叔丁醇、乙酸乙酯以及DMF的殘留量[J].廣東化工，2012，39（3）：166-167.

[5]顧紅.藥物合成過程中有機(jī)殘留量的檢測[J].天津化工，2004，18（6）：52-54.

[6]江冬英，胡巧云.頂空進(jìn)樣法測定更昔洛韋的殘留溶劑[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，8（25）：56-58.

[7]林斌.氣相色譜法測定他克莫司中的8種殘留溶劑[J].海峽藥學(xué)，2012，24（7）：60-62.

[8]陳麗萍，丁邦東，譚志剛，等.頂空氣相色譜法測定醋酸地塞米松原料藥中殘留溶劑的含量[J].天津藥學(xué)，2012， 24（1）：12-14.

[9]俞建君.氣相色譜法測定奧氮平原料藥中6種殘留溶劑含量[J].廣東化工，2011，10（38）：159-160.

（收稿日期：2014-03-12本文編輯：許俊琴）