周琴琴，陳建明(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥物制劑教研室，福建 福州 350108；.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室 上海 00433)

清蛋白(白蛋白)是指相對分子質(zhì)量為6.65×104的血漿蛋白，含585個氨基酸殘基的單鏈多肽，分子中含17個二硫鍵和1個游離的巰基。人血清清蛋白(HSA)為人體內(nèi)源性物質(zhì)，具有安全無毒、無免疫原性、可生物降解、生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)。清蛋白分子中存在多個不同藥物的結(jié)合位點(diǎn)，利于大量藥物結(jié)合到清蛋白上，例如，紫杉醇(PTX)，一個清蛋白分子能與7個紫杉醇分子結(jié)合，又如，一個清蛋白分子能與7條長鏈脂肪酸以不同的親和力結(jié)合[1]，可作為理想的藥物載體，常用的清蛋白包括HSA和BSA。但清蛋白作為藥物載體也存在著一些缺點(diǎn)，如體內(nèi)半衰期短、易被酶降解快速釋藥等。然而，清蛋白分子中存在多種可被化學(xué)修飾的功能基團(tuán)，如氨基、巰基、羧基，以及高親和力或低親和力的非共價結(jié)合位點(diǎn)，可以利用此結(jié)構(gòu)特點(diǎn)對其進(jìn)行表面修飾得以改善。

聚乙二醇(PEG)修飾是延長體內(nèi)循環(huán)時間最常用的方法，它具有生物相容性好、高親水性、無毒無免疫原性等多種優(yōu)點(diǎn)，且被FDA認(rèn)可。在長循環(huán)脂質(zhì)體、納米囊、納米粒等納米藥物傳遞系統(tǒng)中都有較廣泛的應(yīng)用，PEG修飾清蛋白以改善清蛋白作為藥物載體的應(yīng)用也備受研究者的關(guān)注，本文對清蛋白的PEG化修飾作一綜述。

1 清蛋白PEG化分類

清蛋白的PEG化主要分為兩類，即對清蛋白納米粒的修飾和對清蛋白溶液本身的修飾。在已有的報道中，清蛋白作為藥物載體的PEG化主要偏向于對已制備好的清蛋白納米粒進(jìn)行PEG修飾[2-4]，對于清蛋白溶液的PEG化修飾的研究目前主要是關(guān)于PEG修飾清蛋白的制備，以及修飾后PEG-清蛋白溶液與原清蛋白溶液的結(jié)構(gòu)、功能或藥動學(xué)比較的研究[5-7]，而以PEG-清蛋白為原料制備載藥納米粒的研究與在清蛋白納米粒上接PEG相比則很有限。目前，對于不同的修飾方式并沒有優(yōu)劣比較，但是，從已有的研究分析可以看出，對清蛋白溶液進(jìn)行PEG化，以PEG-清蛋白制備納米粒，PEG化修飾會對清蛋白納米粒的制備產(chǎn)生一定的影響，如空間位阻使藥物難以被包載，阻滯藥物結(jié)合位點(diǎn)等。而對清蛋白納米混懸液進(jìn)行PEG化修飾，由于納米混懸液的穩(wěn)定性限制，在PEG化過程中涉及到長時間攪拌等條件，可能會導(dǎo)致納米粒不穩(wěn)定，使藥物泄露、析出。因此，對于清蛋白或其納米粒的PEG化方式的選擇，仍有待更進(jìn)一步的研究。

2 清蛋白經(jīng)PEG化后的作用

2.1改善體內(nèi)穩(wěn)定性及循環(huán)半衰期 清蛋白在體內(nèi)半衰期短主要是以下兩方面原因造成：一方面，清蛋白在體內(nèi)不穩(wěn)定、快速釋放藥物，是因?yàn)槿梭w內(nèi)存在多種酶，清蛋白進(jìn)入體內(nèi)易被酶降解，如在酸性條件下(pH 2)，被胃蛋白酶快速降解，中性條件下，被胰蛋白酶、蛋白水解酶K、組織蛋白酶B以及蛋白酶(朊酶)降解，以至于其中的藥物快速釋放，并很快從體內(nèi)消除；另一方面，清蛋白進(jìn)入體內(nèi)后易被血漿調(diào)理蛋白吸附，進(jìn)而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)識別、吞噬，以至于快速從血液循環(huán)中消除，富集于肝、脾等RES豐富的組織，不僅導(dǎo)致藥物無法繼續(xù)通過血液循環(huán)到達(dá)病變部位，而且對肝、脾產(chǎn)生嚴(yán)重毒副作用。

清蛋白經(jīng)PEG化后之所以能改善這些缺點(diǎn)，是由于在其表面形成親水性的空間位阻。PEG化不改變清蛋白的二、三級結(jié)構(gòu)[5]，但是由于其空間位阻的存在，故能：①阻礙體液中酶的降解及與其他蛋白質(zhì)的作用，從而提高其在體內(nèi)的穩(wěn)定性，使藥物從納米粒中釋放減慢；②阻礙調(diào)理素吸附，躲避網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的識別和吞噬作用，從而改善在體內(nèi)的分布，并延長在體內(nèi)的半衰期。

目前已有較多關(guān)于清蛋白經(jīng)PEG化后由于PEG親水性空間位阻存在而對藥物釋放、體內(nèi)分布與體內(nèi)循環(huán)時間產(chǎn)生較大影響的報道。Wu等[8]通過藥物釋放試驗(yàn)結(jié)果表明，由于PEG的修飾形成親水空間位阻，阻礙了酶對清蛋白納米粒的降解，使得藥物RB從納米粒中釋放速率降低。Hasan等[2]經(jīng)體外藥物釋放試驗(yàn)也表明mPEG-BSA納米粒中5-氟尿嘧啶的釋放速率較牛血清清蛋白(BSA)納米粒慢。Franco等[9]通過小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明mPEG偶合物較游離藥物分布更慢、消除更慢，且HSA-PTX經(jīng)PEG化后肝和脾中分布減少，而血漿中分布增加且消除更慢。Pedro等[10]比較了HSA(濃度分別為5%、10%)和PEG-HSA(濃度為4%)用于出血性休克復(fù)蘇術(shù)對系統(tǒng)參數(shù)和微血管血流動力學(xué)的影響，結(jié)果顯示PEG-HSA組系統(tǒng)和微血管的恢復(fù)最好、最快，且只有PEG-HSA的恢復(fù)作用持續(xù)超過90 min，說明PEG修飾起到了長循環(huán)的作用。Zhao等[6，7]研究顯示，PEG-HSA的半衰期是原HSA半衰期的2.2倍，另一方面，125I-PEG-HSA 的清除比原來減少2/3，AUC也明顯增加，這些結(jié)果都表明PEG-HSA在血液循環(huán)中保留的時間更長。

2.2降低非HSA的免疫原性 面對HSA原料緊張、價格昂貴及血源感染等難題，雖然有制備rHSA替代，但用BSA代替HSA是一種較可靠的解決方法，然而，BSA用于人體具有一定的免疫原性，目前已有研究表明PEG化可以降低甚至消除其免疫原性。Moghimi[11]通過免疫擴(kuò)散研究結(jié)果顯示，抗BSA抗體與BSA發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng)，但不和BSA-mPEG反應(yīng)，表明mPEG化掩蔽BSA的抗原位點(diǎn)，降低甚至消除BSA的免疫原性。周莉等[12]用mPEG-1900修飾牛血清清蛋白游離氨基數(shù)在90%左右時，可使牛血清清蛋白完全喪失免疫原性，用mPEG-5000修飾時，修飾率達(dá)50%左右便可使牛血清清蛋白在動物體上失去產(chǎn)生免疫抗體的能力，一些生物指標(biāo)檢查結(jié)果證明，修飾后牛血清清蛋白有可能成為臨床人血清清蛋白制劑的代用品。

3 PEG化對清蛋白制劑性質(zhì)的影響

PEG化使清蛋白或其制劑表面存在親水性的空間位阻，雖然對半衰期、釋藥以及分布等都有一定的改善，同時對于其他性質(zhì)也有或大或小、或利或弊的影響，如清蛋白制劑(主要包括清蛋白微球、清蛋白納米粒)的粒徑、ζ電位、載藥量、穩(wěn)定性及釋藥特性等。

3.1粒徑 理論上講，如果在清蛋白納米粒上接有PEG鏈，伸展的PEG鏈應(yīng)該會使納米粒的粒徑有明顯的增加，但研究顯示，PEG化清蛋白納米粒粒徑與原納米粒無明顯變化[2]。對于這一奇怪現(xiàn)象，研究發(fā)現(xiàn)，PEG鏈在納米粒表面的存在狀態(tài)包括伸展的“刷子”構(gòu)型和折疊的“蘑菇云”構(gòu)型，主要取決于接的PEG密度，當(dāng)納米粒表面PEG密度較低時，PEG鏈形成“蘑菇云”構(gòu)型，相反則伸展為“刷子”結(jié)構(gòu)[13]，見圖1。當(dāng)PEG以蘑菇云構(gòu)型包裹在納米粒表面時，對納米粒的粒徑?jīng)]有明顯的影響，而當(dāng)其在納米粒表面以“刷子”結(jié)構(gòu)伸張開時，納米粒粒徑明顯增加。因此，PEG化納米粒粒徑變化情況，主要取決于PEG鏈在納米粒表面的存在狀態(tài)。

當(dāng)PEG鏈以“蘑菇云”的構(gòu)型存在時，在緩沖溶液條件下，PEG化對納米粒粒徑?jīng)]有明顯的改變，PEG化前BSA納米粒粒徑為210 nm，而PEG化后為217 nm，僅有微弱的變化[2]。而在血漿中，因蛋白質(zhì)對納米粒的吸附作用不同，未PEG化的清蛋白與血漿中蛋白質(zhì)的相互作用較強(qiáng)，較多的吸附使粒徑較在緩沖溶液中增大，而PEG化后其親水的空間位阻使其吸附作用減弱，粒徑增大相對較少。例如，Wu等[14]研究顯示，未修飾的清蛋白納米球在含有大鼠血漿的溶液中孵育，隨著血漿濃度的增加，粒徑明顯增加，相反，經(jīng)PEG修飾后的清蛋白納米球，粒徑僅發(fā)生了微弱的變化。孫誠誼等[15]比較了PEG修飾與未修飾磁性5-氟尿嘧啶清蛋白微球的粒徑，分別為(1.32±0.17) μm和 (1.28±0.14) μm，也幾乎沒有變化。

圖1 PEG鏈在納米粒表面的構(gòu)型

3.2電位 納米粒電位的明顯改變是影響納米粒穩(wěn)定性的主要因素之一，納米粒表面較高的電荷以保證納米粒間的靜電斥力，防止納米粒的聚集、沉降。清蛋白或清蛋白-聚合物偶聯(lián)物經(jīng)PEG化后，部分電荷被屏蔽，雙電層的剪切面發(fā)生移動，電位絕對值明顯減小，特別是相對于粒徑的改變而言，PEG化后納米粒ζ電位的改變更為明顯。例如，BSA納米粒電位-31.7 mV，而mPEG-BSA納米粒卻增加到-14 mV[2]，PEG-PEI-BSA納米粒電位較PEI-BSA納米粒電位絕對值減小[3]。另外，Wu等[14]研究顯示，mPEG 5 000質(zhì)量比為20%和50%時，清蛋白納米粒的ζ電位無明顯差異，而當(dāng)mPEG 5 000質(zhì)量比為20%時的ζ電位絕對值卻為mPEG 2 000質(zhì)量比為40%時的1/2，可見，清蛋白納米粒PEG化到一定程度時，增加其修飾程度對ζ電位將不再有明顯的影響，而PEG鏈長似乎是納米粒ζ電位更重要的影響因素。

3.3載藥量 載藥量是納米粒制劑學(xué)考察的重要指標(biāo)之一，一種理想的藥物載體必須能達(dá)到較高的載藥量。但是清蛋白經(jīng)PEG化后載藥量明顯減小[8]，之所以如此，一方面是由于空間位阻的阻礙作用，另一方面，也由于PEG化使清蛋白的活性結(jié)合位點(diǎn)發(fā)生了改變。Bitten等[5]研究表明BSA具有高親和力和低親和力的結(jié)合位點(diǎn)，而PEG-BSA僅具有低親和力結(jié)合位點(diǎn)。Wu等[8]用微量量熱法研究表明HSA和藥物RB間的相互作用為三級配體結(jié)合模式，而HSA-mPEG與RB僅為二級結(jié)合模式?？梢?，mPEG修飾清蛋白使其部分活性結(jié)合位點(diǎn)被阻滯?；诖?，目前已有的改善載藥量的方法是在PEG化的清蛋白中加入一定量未修飾的清蛋白，Wu等[15]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在PEG化的BSA中加入一定量的未修飾BSA，基本可以達(dá)到未修飾BSA的載藥量，同時也能滿足藥物的緩慢釋放。雖然如此，關(guān)于PEG化后清蛋白載藥量減小及其解決辦法的相關(guān)研究仍然需要有更多的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探討，特別是有效提高其載藥量的研究目前還很欠缺，亦或者存在更好的PEG化方式，以盡可能減少對清蛋白與藥物相互作用的影響，都有待于進(jìn)一步、更系統(tǒng)全面的研究探討。

3.4穩(wěn)定性 制劑能否在一定的時間內(nèi)穩(wěn)定存在會直接影響其質(zhì)量及應(yīng)用。清蛋白納米?；蛭⑶蚪?jīng)PEG化后，ζ電位絕對值明顯降低，不利于其穩(wěn)定存在，但表面PEG的空間位阻又有利于其穩(wěn)定性?？梢?，PEG化修飾對于納米?；蛭⑶蚍€(wěn)定性的影響是一個復(fù)雜的過程，受多種因素共同作用。因此，在制備PEG化的清蛋白制劑時，當(dāng)有利因素與不利因素達(dá)到平衡后，清蛋白制劑仍然可以在一定時間內(nèi)穩(wěn)定存在，甚至更穩(wěn)定，如5-氟尿嘧啶清蛋白微球經(jīng)PEG修飾后，因親水性增加，在生理鹽水中穩(wěn)定性增高[15]。Zhang等[3]研究顯示，PEI-BSA納米粒隨著PEG加入量的改變，PEG-PEI-PEG或穩(wěn)定存在，或發(fā)生聚集。另外，從體內(nèi)方面考慮，PEG化形成的空間位阻，妨礙酶對納米?；蛭⑶虻目焖俳到夂脱獫{蛋白在納米粒表面的吸附，增加納米粒在體內(nèi)的穩(wěn)定性，從而有利于控制藥物的釋放及在體內(nèi)的滯留。

以PEG-清蛋白作為藥物載體制備PEG化的清蛋白納米制劑也是納米制劑PEG化方式之一，PEG化對清蛋白穩(wěn)定性的影響也將直接影響到后續(xù)納米制劑的制備。有關(guān)研究表明[5]，PEG化將影響清蛋白對溫度的敏感性，使得清蛋白結(jié)構(gòu)的折疊或展開狀態(tài)隨溫度的變化發(fā)生改變，很可能影響其荷載藥物的穩(wěn)定性，出現(xiàn)藥物泄露等情況。Beatriz等[16]研究顯示，大分子的PEG(Mr為8 000～10 000)能穩(wěn)定清蛋白本身的緊密狀態(tài)，但PEG與清蛋白間相互作用，在熱力學(xué)上處于不利狀態(tài)。因此對于清蛋白連接PEG后其穩(wěn)定性的變化情況，以及將對其他性質(zhì)、制劑制備等過程產(chǎn)生怎樣的影響也是必須考慮的因素。

4 清蛋白PEG化修飾位點(diǎn)及修飾劑的選擇

清蛋白結(jié)構(gòu)中存在多種PEG化修飾位點(diǎn)，但PEG本身不具有反應(yīng)活性，在此之前需對其進(jìn)行活化，獲得相應(yīng)的活性PEG修飾劑。清蛋白PEG化位點(diǎn)的選擇主要包括氨基PEG化、巰基PEG化、C端PEG化等[17]，目前應(yīng)用較多的為-NH2和-SH的PEG化，其中-NH2修飾包括非特異氨基修飾和特異的N末端氨基修飾。

4.1非特異氨基修飾 非特異氨基修飾包括賴氨酸的ε-氨基和N末端α-氨基修飾，是清蛋白等多種蛋白質(zhì)進(jìn)行PEG化修飾最早采用的修飾方式，反應(yīng)條件溫和、易發(fā)生、迅速，常用的修飾劑為mPEG的琥珀酰亞胺活性酯(mPEG-NHS酯)，如mPEG-SPA、mPEG-SC等，為酰基化PEG衍生物。以mPEG-NHS酯作為PEG化修飾劑修飾清蛋白或其他蛋白質(zhì)的相關(guān)研究，例如，Hasan等[2]、Marion等[4]分別以mPEG-SPA(Mr為5 000)修飾BSA及HSA，徐超[18]以mPEG-SC(Mr為5 000)修飾HSA，制備mPEG-HSA納米微球。另外，Liu等[19]、Hou等[20]分別以mPEG-SC(Mr為5 000)、mPEG-SC(Mr為20 000)修飾胰蛋白酶和重組水蛭素。此種修飾反應(yīng)一般在堿性條件下進(jìn)行，增大pH值反應(yīng)活性增加，但堿性越強(qiáng)，mPEG-NHS酯越易水解，生成不具有反應(yīng)活性的mPEG，故反應(yīng)一般選擇pH=7～9條件下進(jìn)行。然而，由于清蛋白等蛋白質(zhì)中游離的氨基較多，均可參與到反應(yīng)中，故非特異性氨基修飾所得的產(chǎn)物為復(fù)雜的隨機(jī)多修飾與單修飾混合物，很難甚至于無法分離。但由于其反應(yīng)易發(fā)生，產(chǎn)物穩(wěn)定，且副產(chǎn)物為小分子、無毒，仍然是PEG化的一種重要方式。

4.2特異的N末端氨基修飾 特異的N末端氨基修飾是一種常用的定點(diǎn)修飾，它利用N末端α-氨基與賴氨酸殘基的ε-氨基pKa值不同。PEG與蛋白質(zhì)上氨基酸殘基的結(jié)合反應(yīng)取決于氨基酸殘基的親核性，只有當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液的pH值接近于或高于殘基的pKa時，反應(yīng)才容易進(jìn)行，而N末端α-氨基pKa值約為8，賴氨酸ε-氨基殘基pKa值約為10[17]，故控制反應(yīng)條件使賴氨酸ε-氨基殘基被質(zhì)子化，且使用反應(yīng)活性較低的PEG化試劑，可達(dá)到較好的N末端α-氨基的特異性修飾。N末端修飾最常用的修飾劑為mPEG-醛(mPEG-AL)，為烷基化PEG衍生物，在硼氫化鈉的還原作用下，能較特異性地與N末端α-氨基結(jié)合。Hu等[22]在酸性條件下比較mPEG-AL和PEG-NHS的N末端修飾的特異性，結(jié)果顯示PEG-AL具有更高的特異性。Zhao等[7]用mPEG-丙醛(Mr為20 000)修飾HSA，通過SDS-PAGE分析原HSA和反應(yīng)混合物，根據(jù)新出現(xiàn)條紋的分子大小可知，每個HSA分子上僅結(jié)合了一個PEG鏈。但此種修飾方式反應(yīng)慢、耗時長，常需幾個甚至幾十個小時，而且與質(zhì)子化氨基處于平衡狀態(tài)的游離α-氨基的存在導(dǎo)致偶合物的形成，使得必須增加額外的純化過程。

4.3巰基(-SH)定點(diǎn)修飾 巰基修飾即與半胱氨酸中游離的-SH發(fā)生反應(yīng)，清蛋白結(jié)構(gòu)中存在一個游離的-SH，未形成二硫鍵，可作為另一個特異的修飾位點(diǎn)。最常用的修飾劑為mPEG-mal，馬來酰亞胺環(huán)雙鍵與巰基反應(yīng)形成硫醚鍵，但馬來酰亞胺環(huán)的不穩(wěn)定性，傾向于開環(huán)形成不具有反應(yīng)活性的衍生物。另外，此反應(yīng)的pH必須嚴(yán)格控制，因在堿性條件下(pH>8)清蛋白中的-NH2也能與馬來酰亞胺反應(yīng)。Zhao等[6]用mPEG-mal修飾HSA，通過兩步法——封閉-SH和PEG化確定其修飾位點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，封閉-SH后，HSA無法被mPEG-mal修飾。

然而，清蛋白中存在含Tyr84的環(huán)[23]，由于Tyr84的-OH和Cys34的硫間形成氫鍵，兩個環(huán)(Tyr84環(huán)和Cys34環(huán))的束縛導(dǎo)致Cys34不易被接近[23]。同時，清蛋白的結(jié)晶學(xué)研究顯示Cys34被埋在淺的縫隙中(9.5 ?)[23]，故可能導(dǎo)致修飾率低，也解釋了Cys34-SH的修飾在優(yōu)化的工藝條件下僅約50%[6]。但Octaaf等[24]研究顯示，在pH>8時，清蛋白的結(jié)構(gòu)會發(fā)生轉(zhuǎn)變，由N(中性)變?yōu)锽(堿性)形式，整個蛋白結(jié)構(gòu)會有松動，Cys34縫隙打開，巰基從一個被抑制的環(huán)境中移動到不受阻礙的環(huán)境中，從而使其反應(yīng)活性增強(qiáng)。然而，如前所述，pH>8時，可能存在與-NH2的反應(yīng)，使其特異性受到影響。如何提高修飾率且不影響其特異性仍然有待于更進(jìn)一步研究。

另外，順便提一下清蛋白的其他修飾。除清蛋白的PEG化修飾外，根據(jù)病變部位的特點(diǎn)，針對性的對清蛋白進(jìn)行修飾以提高其主動靶向性也是近年來備受關(guān)注的方向之一。其一，在某些腫瘤部位葉酸受體、表皮生長因子受體、整聯(lián)蛋白αvβ3受體等過表達(dá)，利用配體-受體的高度特異性，將葉酸、表皮生長因子或RGD與清蛋白偶聯(lián)，可以明顯提高腫瘤部位的靶向性[25-27]；其二，由于血-腦屏障(BBB)的特殊結(jié)構(gòu)，藥物透過BBB到達(dá)腦病變部位非常困難，對清蛋白進(jìn)行修飾以透過BBB，目前研究較多的主要有陽離子的吸附介導(dǎo)，載脂蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白的受體介導(dǎo)等。將清蛋白陽離子化促進(jìn)其與內(nèi)皮細(xì)胞腔一側(cè)負(fù)電荷的結(jié)合，不僅使藥物在腦部積累量增加，而且不影響B(tài)BB的完整性[28]。清蛋白與載脂蛋白結(jié)合后，通過低密度脂蛋白受體(LDLR)介導(dǎo)的內(nèi)吞和穿細(xì)胞作用促進(jìn)納米粒的腦攝取，研究顯示，將Apo-E結(jié)合到清蛋白納米粒表面作為靶向劑，一定時間后在腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中僅檢測到共價結(jié)合Apo-E的清蛋白納米粒，而不能檢測到未結(jié)合Apo-E的清蛋白納米粒[29]，而且藥效試驗(yàn)結(jié)果顯示，僅有用Apo修飾的載藥HSA納米粒達(dá)到明顯的鎮(zhèn)痛效果[30]。同樣，將HSA納米粒共價結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體(OX26或R17-217)用于洛哌丁胺(自身不能透過BBB)的腦傳遞，結(jié)果顯示共價結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白受體單克隆抗體(OX26或R17-217)的洛哌丁胺HSA-NPs靜脈注射后具有明顯的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[31]。

5 展望

清蛋白作為一種理想的藥物載體，其功能化修飾更是備受關(guān)注，其中PEG化修飾作為延長體內(nèi)半衰期最常用的方式，迄今為止已有較多的認(rèn)識，并在不斷提高。例如，PEG修飾劑本身的純度和質(zhì)量都有了很大提高，種類不斷增加，包括單鏈、多鏈，以及PEG末端經(jīng)過不同的活化等；清蛋白的PEG化修飾由最初的隨機(jī)修飾模式逐漸向特異性修飾發(fā)展，滿足不同需要；另外，清蛋白的PEG化產(chǎn)物分離純化技術(shù)、分析方法等也都在不斷改善。清蛋白的PEG化修飾已經(jīng)是一種應(yīng)用普遍的技術(shù)，但仍然存在許多未解決的問題，使其很難達(dá)到PEG修飾劑利用率高、清蛋白或其制劑修飾率高以及產(chǎn)物純度高等。而且，經(jīng)PEG化修飾后，對納米?；蛭⑶螂娢弧⒎€(wěn)定性、載藥量等的影響，也將進(jìn)一步影響其作為藥物載體的廣泛應(yīng)用，因此需要更深入的研究，清楚地認(rèn)識其中的缺點(diǎn)并得出相應(yīng)的解決方法。雖然仍存在上述諸多問題，但根據(jù)目前的認(rèn)識及研究現(xiàn)狀，對于提出新的解決方法奠定了可靠的基礎(chǔ)?；谇宓鞍譖EG化修飾的必要性，以及已有的研究基礎(chǔ)，深入研究清蛋白及其制劑的PEG化，以及不斷解決存在的問題將具有很大的研究價值，經(jīng)PEG化修飾的清蛋白及其制劑也將具有可觀的應(yīng)用前景。

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