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        緊密連接蛋白claudin在食管癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究

        2014-08-05 03:13:00姬明禮
        護(hù)理實(shí)踐與研究 2014年9期
        關(guān)鍵詞:食管癌沖洗分化

        李 巖 姬明禮 李 兵

        李巖:女,碩士,講師

        緊密連接是細(xì)胞連接結(jié)構(gòu)中位于上皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞最頂端的蛋白復(fù)合體,由閉鎖蛋白(occludin)、claudins 和連接黏附分子(JAMs)等膜蛋白以及緊密黏連蛋白等胞漿蛋白組成,呈連續(xù)串珠狀連接相鄰的細(xì)胞,而起主要連接作用的是前二者,尤以claudins 的功能最為重要,它是構(gòu)成緊密連接的主要骨架蛋白。目前普遍認(rèn)為,細(xì)胞間黏附力喪失可導(dǎo)致細(xì)胞連接的破壞,與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有關(guān)。近年研究報(bào)道,claudin 蛋白的異常表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)[1]。食管癌是消化道常見(jiàn)惡性腫瘤之一,分子生物學(xué)研究表明,腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多階段、多基因參與、多種轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的過(guò)程,涉及一系列病理生理反應(yīng),包括細(xì)胞的異常增殖、黏附、運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞外基質(zhì)降解、血管生成等[2]。我們檢測(cè)了食管癌組織及健康食管組織中claudin-3、claudin-4、claudin-7、claudin-10 的表達(dá),以探討其對(duì)食管癌浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的影響?,F(xiàn)報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料 選擇2011~2013年在某院食管癌術(shù)后病理標(biāo)本共62例,男41例,女21例。年齡28~76 歲,中位年齡59 歲。均為鱗狀細(xì)胞癌。均經(jīng)病理檢查確診,術(shù)前均未進(jìn)行過(guò)放化療及其他生物學(xué)治療。另取20例經(jīng)病理檢測(cè)為非食管癌的食管組織作為對(duì)照組。

        1.2 方法 claudin-3、claudin-4、claudin-7、claudin-10兔多克隆抗體、DAB 試劑盒、免疫組化檢測(cè)試劑、其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。所有標(biāo)本經(jīng)10%的中性甲醛固定24 h,常規(guī)脫蠟后,在檸檬酸鹽緩沖液中抗原高溫修復(fù)20 min。用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗5 min 1 次,連續(xù)3 次;3% H2O2室溫下孵育10 min,用PBS 沖洗2 min 1 次;連續(xù)3 次,然后分別加入claudin-3、claudin-4、claudin-7、claudin-10 抗體4 ℃放置8 h 以上。用PBS 沖洗2 min 1 次,連續(xù)3 次,滴加pv-9000試劑(聚合物輔助劑)20 min 后,用PBS 沖洗(2 min ×3 次),滴加pv-9000 試劑二(辣根酶標(biāo)記山羊抗兔/小鼠IgG 多聚體)20 min后用PBS 沖洗2 min 1 次,連續(xù)3 次,滴加DAB 液染色5 min,蒸溜水沖洗,蘇木素復(fù)染5 min,鹽酸乙醇脫色2 s,氨水中返藍(lán)1 min,常規(guī)脫水,中性樹(shù)膠封片。

        1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) claudin-3、claudin-4、claudin-7、claudin-10 以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。以陽(yáng)性細(xì)胞所占比例(5 個(gè)高倍視野)分級(jí)。(-)為陰性表達(dá);(+)為陽(yáng)性表達(dá)。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)數(shù)資料采用兩獨(dú)立樣本的χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

        2 結(jié) 果

        2.1 兩組病理標(biāo)本claudin-3、claudin-4、claudin-7、claudin-10 陽(yáng)性表達(dá)率比較(表1,表2)

        表1 兩組病理標(biāo)本claudin-3、claudin-4、claudin-7、claudin-10 的陽(yáng)性表達(dá)率比較例(%)

        2.2 食管癌患者claudin-3、claudin-4、claudin-7、claudin-10的表達(dá)與臨床病理特征(表2)

        表2 食管癌患者claudin-3、claudin-4、claudin-7、claudin-10 的表達(dá)與臨床病理特征(例)

        表1,表2可以看出,claudin-3、claudin-7、claudin-10在食管癌組織中陽(yáng)性率高,正常食管上皮組織陽(yáng)性率低。食管癌陽(yáng)性率較正常食管上皮明顯升高;且癌組織中claudin-3、claudin-7、claudin-10 的表達(dá)均與其分化程度相關(guān),并隨分化程度升高,陽(yáng)性率明顯升高。而在食管癌組織中伴有claudin-4 的表達(dá)下調(diào),低分化組中claudin-4 的表達(dá)明顯低于中- 高分化組。同時(shí)可以分析出,食管癌組織中claudin-3、claudin-7、claudin-10 的陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān);而claudin-3、claudin-7、claudin-10 的表達(dá)均與claudin-4 呈負(fù)相關(guān)。

        3 討 論

        正常分化組織的細(xì)胞組成是高度有序的,癌組織則通常缺乏這種特性,腫瘤細(xì)胞常常是分化變差、細(xì)胞極性消失及胞間緊密連接功能失常。緊密連接完整性的破壞可能是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)因子及其他因子擴(kuò)散的原因。食管鱗癌的發(fā)生通常經(jīng)歷從正常食管上皮-食管炎-異型增生-食管癌的系列演變過(guò)程[2]。緊密連接是維持上皮細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的重要結(jié)構(gòu),claudin 蛋白是緊密連接結(jié)構(gòu)與功能的重要組成成分。癌組織形成的主要特征是緊密連接的破壞、黏附性消失、細(xì)胞獲得侵襲性和正常分化的缺失。不同的claudin成員以多種組合方式參與構(gòu)成緊密連接,增加了緊密連接的結(jié)構(gòu)和功能的多樣性,為不同組織類型屏障功能的多樣性提供了分子基礎(chǔ)。claudin 在多種上皮來(lái)源的腫瘤中表達(dá)異常,推測(cè)其在這些腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮一定的作用[1]。

        本研究發(fā)現(xiàn)claudin-3、claudin-7、claudin-10 在食管癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為分別為90.3%、95.5%、82.3%,較正常食管組織表達(dá)顯著增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05),提示claudin-3、claudin-7、claudin-10 蛋白過(guò)表達(dá)可能是食管癌發(fā)生的早期表現(xiàn),可能與食管癌的發(fā)生有關(guān),而且其表達(dá)程度與食管癌的分化程度呈正相關(guān),因此又可以作為食管癌發(fā)展情況的分析指標(biāo)。而claudin-4 與claudin-3、claudin-7、claudin-10 在正常組織和食管癌組織中均呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P <0.05)。另有研究表明隨著claudin-4的表達(dá)減低,腫瘤的侵襲性不斷增強(qiáng)。伴有claudin-4表達(dá)陰性患者的5年生存率明顯低于表達(dá)陽(yáng)性患者[3-4]。因此可以結(jié)合以上任一兩組claudin 的表達(dá)情況,為臨床診斷提供參考。

        Claudin 蛋白及其他緊密連接蛋白的表達(dá)異常目前已被認(rèn)為是細(xì)胞間黏附性丟失的機(jī)制和腫瘤細(xì)胞發(fā)生及轉(zhuǎn)移的重要步驟,而這些步驟又可能在癌細(xì)胞的凝聚力降低、分化變差及侵襲性增加的過(guò)程中發(fā)揮了重要作用[5]。本研究結(jié)論提示深入開(kāi)展這方面的研究有可能為食管鱗癌的抗轉(zhuǎn)移治療開(kāi)辟一條新的途徑。

        [1] 徐 冬.Claudin 蛋白與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J].實(shí)用臨床醫(yī)學(xué),2010,11(9):130-133.

        [2] Ding L,Lu Z,Lu Q,et al.The claudin family of proteins in human malignancy:a clinical perspective[J].Cancer Manag Res,2013(5):367-375.

        [3] Lee KW,Lee NK,Kim JH,et al.Twist1 causes the transcriptional repression of claudin-4 with prognostic significance in esophageal cancer[J].Biochem Biophys Res Commun,2012,423 (3):454-460.

        [4] Xiang RL,Su YC,Pei XQ.Progress in functions of tight junction protein claudin-4[J].Sheng Li ke Xue Jin Zhan,2012,43(4):310-314.

        [5] Sung CO,Han SY,Kim SH.Low expression of claudin-4 is associated with poor prognosis in esophageal squamous cell carcinoma[J].Ann Surg Oncol,2011,18(1):273-281.

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