潘 華 王博文

(東北林業(yè)大學(xué)，哈爾濱，150040) (黑龍江省森林總隊(duì))

喜樹不同器官次生代謝產(chǎn)物高效液相圖譜的比較

潘 華 王博文

(東北林業(yè)大學(xué)，哈爾濱，150040) (黑龍江省森林總隊(duì))

對(duì)喜樹種子、喜樹幼苗根、莖和葉片次生代謝產(chǎn)物的高效液相圖譜進(jìn)行了分析比較，共檢測(cè)出24種次生代謝產(chǎn)物：其中5種為種子、根、莖和葉片的共有成分，2種為根、莖和葉片的共有成分，3種為根和莖共有的，2種為種子和莖共有的；但這些成分在喜樹各部位的相對(duì)值均不同。喜樹幼苗莖的高效液相圖譜與喜樹種子的相似度最高，喜樹種子和喜樹幼苗葉片的相似度最小。

喜樹；次生代謝產(chǎn)物；高效液相圖譜

喜樹(Camptothecaacuminata)是我國特有的多年生亞熱帶落葉闊葉樹種，因其次生代謝產(chǎn)物喜樹堿(CPT)具有良好的抗腫瘤活性而受到廣泛關(guān)注[1]。目前針對(duì)喜樹體內(nèi)次生代謝產(chǎn)物的研究僅集中于喜樹堿和10-羥基喜樹堿[2-9]，對(duì)其不同器官次生代謝產(chǎn)物差異的研究較少[10]。筆者應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)，借鑒了指紋圖譜思想，檢測(cè)了喜樹不同器官中的次生代謝產(chǎn)物，整體分析了各器官次生代謝產(chǎn)物的差異。

1 材料與方法

購自四川省金堂縣的喜樹種子經(jīng)處理后，于2004年3月中旬播種獲得實(shí)生苗，在溫室中用花盆(盆底內(nèi)徑為10 cm)培育，2005年1月份采收根、莖和葉片。用于分析的種子和采集的幼苗根、莖和葉片于烘箱中80 ℃烘干后粉碎、備用。

美國Waters高效液相色譜儀(2996型二極管陣列檢測(cè)器)、AB104型電子天平(瑞士)、DS-300A型超聲清冼機(jī)(寧波市海曙達(dá)盛超聲儀器廠)。色譜分析用甲醇為色譜純(Burdick & Jackson公司)，水為超純水；其它試劑均為分析純。喜樹堿標(biāo)品自制，純度為99.0%。

精密稱取喜樹堿標(biāo)準(zhǔn)品2.0 mg，以甲醇為溶劑超聲溶解并定容至10 mL，搖勻備用。精密稱取0.25 g樣品于5 mL容量瓶中，加入甲醇，室溫超聲提取30 min，定容，過濾后進(jìn)樣。

色譜柱為英國Hypersil GOLD C18柱(250 mm×4.6 mm)，流速1 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，檢測(cè)波長210～400 nm；梯度洗脫程序：分4個(gè)階段線性提高甲醇—2%乙酸體系中的甲醇比例，最初30 min，甲醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)由5%增至30%，至70、80、85 min時(shí)分別達(dá)到50%、80%、100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 喜樹不同器官次生代謝產(chǎn)物高效液相圖譜的分析

按前述樣品提取方法和色譜分析條件提取、測(cè)定，分別得到喜樹種子、喜樹幼苗根、莖和葉片的次生代謝產(chǎn)物高效液相色譜圖(圖1)。根據(jù)各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間和紫外光譜圖，區(qū)分不同部位次生代謝產(chǎn)物的異同，并統(tǒng)一編號(hào)，以16號(hào)(喜樹堿)作為參照，標(biāo)記為s，色譜峰分析見表1。喜樹種子、根、莖和葉片中共檢出24種化合物，其中第2、11、16(s)、18、24號(hào)化合物是種子、根、莖和葉片的共有組分，但這些成分在各部位的相對(duì)值不同。除共有成分外，各部位亦含有其獨(dú)特的成分，其中，第1、5、6、19、20號(hào)化合物為種子所特有，第12號(hào)化合物只在根中存在，第9和17號(hào)化合物為莖特有的，葉片中的特有成分是第13、14、22和23號(hào)化合物。此外，第3和21號(hào)化合物為根、莖和葉片的共有成分，根和莖中都含有第4、8和15號(hào)化合物，第7和10號(hào)化合物為種子和莖共有的。此方法提取得到的4個(gè)部位中次生代謝產(chǎn)物的數(shù)量基本相同，但種子和莖中次生代謝產(chǎn)物的相對(duì)值較高，而葉片中相對(duì)值則較低。

圖1 喜樹不同部位次生代謝產(chǎn)物的色譜圖(λ=254 nm)

序號(hào)相對(duì)保留時(shí)間吸收波長/nm相對(duì)峰面積種子根莖葉片10．289257、38642151720．342237、32611865923452576714304753102522130．408245、36961651894753665195275340．43124245827348007950．590263、377115483760．645244、386243585370．700243、270、3664981568176665380．709244、289、328141750350858990．739256、35215934100．773249394079197978110．787250、3641221467189644768543163864120．803244、328408296130．844250、369173737140．90725281339150．965248、327259036129885416(s)1．000254、293、3684512964218958630468511676590171．085265、32734488181．130265、327、38014460623456541163861693191．141258、365340791201．179252、366，386830223211．185251、369576408319614334202221．229250、369186210267687231．283250、369128694241．335247106550615131041596904105877

2.2 喜樹次生代謝產(chǎn)物高效液相圖譜的相似度分析

指紋圖譜表征的是樣品整體特征，可以用來描述樣品間的親疏程度。相似度可以量化地描述各指紋圖譜間的相似性，常用方法有相關(guān)系數(shù)法和夾角余弦法[11]。喜樹種子、根、莖和葉片次生代謝產(chǎn)物高效液相圖譜間的相似度分析結(jié)果顯示(表2)，種子與莖的圖譜相似度最高，葉片與根的次之，然后是根與莖的，而莖與葉片的高于種子與根的，種子和葉片的相似度最小。

表2 喜樹不同部位色譜圖間的相似度分析

3 結(jié)論

本研究測(cè)定得到了喜樹種子、喜樹幼苗根、莖和葉片的高效液相圖譜。圖譜中共檢測(cè)出24種次生代謝產(chǎn)物，其中5種為種子、根、莖和葉片的共有成分，2種為根、莖和葉片的共有成分，3種為根和莖共有的，2種為種子和莖共有的。用本方法檢測(cè)出的喜樹種子、根、莖和葉片中的次生代謝產(chǎn)物的數(shù)量基本相同，相對(duì)值有所差異。喜樹幼苗莖的高效液相圖譜與喜樹種子的相似度最高，喜樹種子和喜樹幼苗葉片的相似度最小。將中藥指紋圖譜分析方法應(yīng)用于植物次生代謝產(chǎn)物的研究中，可解決單獨(dú)考查一個(gè)或幾個(gè)有效成分所得研究結(jié)果的局限性，二者的有機(jī)結(jié)合可獲得更為全面的植物次生代謝產(chǎn)物的分布、變化信息。

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High Performance Liquid Chromatograms of Secondary Metabolites in Different Organs ofCamptothecaacuminata

/Pan Hua(Northeast Forestry University, Harbin 150040, P. R. China); Wang Bowen(Heilongjiang Forest Corps)//

Journal of Northeast Forestry University.-2014,42(6).-126～128

The experiment was conducted to analyzed the high performance liquid chromatograms (HPLC) of the secondary metabolites in seeds, roots, stems and leaves ofCamptothecaacuminata. Twenty-four compounds were separated, five in the four organs, two in roots, stems and leaves, three in roots and stems, and two in seeds and stems. The contents are different in different organs. The similarity of chromatograms between seeds and stems is highest, and that between seeds and leaves is lowest.

Camptothecaacuminata; Secondary metabolites; High-performance Liquid Chromatograms (HPLC)

潘華，女，1979年2月生，東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)編輯部，編輯。

，王博文，黑龍江省森林總隊(duì)，干事。E-mail:bobowbw@163.com。

2013年4月2日。

Q946.8；S792.99

1) 中央高?？蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)(2572014BC32)。

責(zé)任編輯：戴芳天。