白銀花，李曉，劉婧，張立實(shí)

（四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院，四川成都610041）

蘆薈銀杏復(fù)合制劑為蘆薈凝膠凍干粉與銀杏葉提取物復(fù)合制劑。蘆薈（Aloe）是百合科多年生常綠肉質(zhì)草本植物，富含多糖、有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸以及多種礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和多酚類還原性物質(zhì)，被譽(yù)為“21世紀(jì)最佳保健食品”和純天然抗氧化劑，在食品、化工、醫(yī)藥等領(lǐng)域應(yīng)用十分廣泛[1]。銀杏Ginkgo biloba L.又稱白果樹、公孫樹，屬銀杏科銀杏屬裸子植物，主產(chǎn)中國(guó)[2]。其葉、果和外種皮等皆具有藥用價(jià)值，被稱為“全身都是寶的活化石”[3]。國(guó)內(nèi)外的一些研究表明，銀杏葉所含的黃酮化合物具有明顯抗氧化活性和抗自由基活性[4-6]?，F(xiàn)擬用大劑量乙醇造小鼠氧化損傷模型，研究蘆薈銀杏復(fù)合制劑的抗氧化作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘆薈銀杏復(fù)合制劑：XX生物科技有限公司；清潔級(jí)雄性昆明種小鼠（50只，體質(zhì)量25 g～30 g，8周齡）：成都達(dá)碩生物科技有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（川）2008-24。

50%乙醇（分析純）：寶信生物科技有限公司；GSH試劑盒、T-SOD試劑盒、GSH-Px試劑盒、MDA試劑盒、蛋白質(zhì)羰基含量試劑盒：南京建成生物工程研究所；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-2800型紫外-可見分光光度計(jì)：尤尼柯（上海）儀器有限公司；BIO-RAD680酶標(biāo)儀：上海普林斯頓生物科技發(fā)展有限公司；AU400生化分析儀：奧林巴斯中國(guó)有限公司；DY89-IDI電動(dòng)玻璃勻漿器：寧波新芝科技有限公司；Thermo ST16低溫高速離心機(jī)Thermo Scientific；Xiang Yi-L530高速臺(tái)式離心機(jī)：長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器公司；HHSYZL-Ni電熱恒溫水浴箱北京長(zhǎng)風(fēng)儀器公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組

實(shí)驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)溫度為18℃～22℃，濕度為55%～75%，自然光照，自由采食和飲水。實(shí)驗(yàn)前將50只小鼠在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下給予基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，按體質(zhì)量隨機(jī)分成5組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、蘆薈銀杏復(fù)合制劑配方二低、中、高劑量組。

1.3.2 造模及給藥方法

低、中、高 3個(gè)劑量組分別按 500、1 000、2 000 mg/（kg·bw·d）的劑量灌胃給予不同濃度受試樣品，溶劑對(duì)照組和模型對(duì)照組給予同體積雙蒸水，連續(xù)灌胃30d，末次灌胃后，模型對(duì)照組和3個(gè)劑量組禁食16 h（過夜），然后1次性灌胃給予50%乙醇12mL/（kg·bw），正常對(duì)照組不作處理。

1.3.3 測(cè)試樣品的制備和檢測(cè)

模型對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)劑量組灌胃乙醇6 h后，股動(dòng)脈取血致死，1.5mLEP管收集血液，3000r/min離心10min，取上清液備用。解剖小鼠，取肝臟，稱取0.4 g～0.5 g和0.1 g～0.2 g肝臟組織，分別加入9倍體積的生理鹽水（用于測(cè)肝臟GSH、T-SOD、GSH-Px和MDA含量）和蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)試盒試劑一（用于測(cè)肝臟蛋白質(zhì)羰基含量），于勻漿器中制成10%的組織勻漿液，2 500 r/min離心10 min，取上清液備用。

采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒檢測(cè)血清和肝組織抗氧化物質(zhì)GSH含量、抗氧化酶TSOD和GSH-Px活力、脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA含量以及蛋白質(zhì)羰基含量；采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定肝組織蛋白含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠一般情況的影響

蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠一般情況的影響見表1。

表1 蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠體重的影響（±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

表1 蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠體重的影響（±s）Table 1 Aloe gingko compound preparation effect on body weight in mice（±s）

組別 劑量/（g/kg·bw）動(dòng)物數(shù)/只 0 d體重/g 15 d體重/g 30 d體重/g正常對(duì)照 0.00 10 27.70±1.42 39.00±3.16 45.50±2.55模型對(duì)照 0.00 10 28.30±1.83 42.30±3.30 46.10±2.96低劑量 0.19 10 28.60±1.37 42.00±2.63 47.00±2.54中劑量 0.38 10 28.70±2.54 39.50±2.91 46.90±1.73高劑量 0.76 10 28.70±1.61 40.60±3.31 47.00±1.83

表1表明，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，模型對(duì)照組和各受試配方組與正常對(duì)照組比較體重均略有增加但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過程中活動(dòng)正常，無異常表現(xiàn)，表明各配方對(duì)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育和一般健康情況無不良影響。

2.2 蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠血清抗氧化能力的影響

蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠血清抗氧化能力的影響，見表2。

表2 蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠血清GSH、SOD、GSH-Px和MDA的影響（±S，N=10）Table 2 Aloe gingko compound preparation in mice serum GSH ，SOD，GSH-Px and MDA（±S，N=10）

表2 蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠血清GSH、SOD、GSH-Px和MDA的影響（±S，N=10）Table 2 Aloe gingko compound preparation in mice serum GSH ，SOD，GSH-Px and MDA（±S，N=10）

△：*表示與正常對(duì)照組比較P＜0.05；**表示與正常對(duì)照組比較P＜0.01；○表示與模型對(duì)照組比較P＜0.05；○○表示與模型對(duì)照組比較P＜0.01。

組別GSH/（mg/L）SOD/（U/mL）GSH-Px/（U/mL）MDA/（nmol/mL）正常對(duì)照 12.781±2.385 167.855±25.678 951.429±174.876 11.000±6.416模型對(duì)照 6.829±1.490** 95.056±25.277** 782.143±153.031* 39.500±10.659**低劑量 10.839±2.211○○ 143.836±43.387○○ 746.786±178.003 20.000±7.071○○中劑量 14.034±4.393○○ 150.791±35.146○○ 768.214±169.261 17.500±10.607○○高劑量 19.485±3.076○○ 154.501±27.365○○ 981.429±131.533○○ 8.500±4.116○○

表2表明，給予大劑量乙醇造模，模型對(duì)照組與溶劑對(duì)照組比較，小鼠血清GSH、SOD水平下降（P＜0.01），GSH-Px水平降低（P＜0.05），MDA 水平升高（P＜0.01）。說明乙醇氧化損傷模型造模成功。

給予不同劑量的蘆薈銀杏復(fù)合制劑30天后，經(jīng)大劑量乙醇造模，各實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組比較，小鼠血清GSH、SOD水平隨蘆薈銀杏復(fù)合制劑濃度增加升高（P＜0.01）；高劑量組 GSH-Px水平升高（P＜0.05）；MDA水平隨蘆薈銀杏復(fù)合制劑濃度增加降低（P＜0.01）。說明蘆薈銀杏復(fù)合制劑能夠使乙醇氧化損傷模型小鼠血清抗氧化物質(zhì)GSH含量增加，抗氧化酶SOD和GSH-Px活力升高，脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA含量降低。

2.3 蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠肝組織抗氧化能力的影響

蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠肝組織抗氧化能力的影響，見表3。

表3 蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠肝組織GSH、SOD、GSH-Px、MDA和蛋白質(zhì)羰基的影響（±S，N=10）Table 3 Aloe gingko compound preparation in mice liver tissue GSH，SOD，GSH-Px，MDA and the effects of protein carbonyl（±S，N=10）

表3 蘆薈銀杏復(fù)合制劑對(duì)小鼠肝組織GSH、SOD、GSH-Px、MDA和蛋白質(zhì)羰基的影響（±S，N=10）Table 3 Aloe gingko compound preparation in mice liver tissue GSH，SOD，GSH-Px，MDA and the effects of protein carbonyl（±S，N=10）

△：*表示與正常對(duì)照組比較P＜0.05；**表示與正常對(duì)照組比較P＜0.01；○表示與模型對(duì)照組比較P＜0.05；○○表示與模型對(duì)照組比較P＜0.01。

組別GSH/（mg/gprot）SOD/（U/mgprot）GSH-Px/（U/mgprot）溶劑對(duì)照 6.808±1.467 195.843±21.325 365.721±65.858模型對(duì)照 5.497±0.809* 166.743±9.030** 311.444±47.389*低劑量 10.275±1.260○○ 180.218±13.822 353.854±38.931中劑量 15.274±1.752○○ 228.315±20.561○○ 541.652±72.063○○高劑量 19.378±1.733○○ 218.276±14.876○○ 471.245±49.828○○MDA/（nmol/mgprot）0.950±0.325 2.462±0.278**0.751±0.348○○0.738±0.114○○0.543±0.263○○蛋白質(zhì)羰基/（nmol/mgpro）3.554±0.965 6.352±1.031**4.550±0.913○○2.552±0.918○○2.220±0.607○○

表3表明，給予大劑量乙醇造模，模型對(duì)照組與溶劑對(duì)照組比較，小鼠肝組織GSH和GSH-Px水平下降（P＜0.05），SOD 水平下降（P＜0.01），MDA 和蛋白質(zhì)羰基水平升高（P＜0.01）。說明乙醇氧化損傷模型造模成功。

給予不同劑量的蘆薈銀杏復(fù)合制劑30天后，經(jīng)大劑量乙醇造模，各實(shí)驗(yàn)組與模型對(duì)照組比較，小鼠肝組織GSH水平隨蘆薈銀杏復(fù)合制劑濃度增加升高（P＜0.01）；蘆薈銀杏復(fù)合制劑中、高劑量組SOD和GSH-Px水平升高（P＜0.01）；MDA和蛋白質(zhì)羰基水平隨蘆薈銀杏復(fù)合制劑濃度增加降低（P＜0.01）。說明隨蘆薈銀杏復(fù)合制劑能夠使乙醇氧化損傷模型小鼠肝組織抗氧化物質(zhì)GSH含量增加，抗氧化酶SOD和GSH-Px活力升高，脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA含量降低，蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物蛋白質(zhì)羰基含量降低。

3 結(jié)論

乙醇大量攝入，可激活氧分子產(chǎn)生自由基，導(dǎo)致組織細(xì)胞過氧化效應(yīng)及體內(nèi)還原性谷胱甘肽的耗竭[7]。灌胃大劑量乙醇是目前最新的衰老造模法。灌胃大劑量乙醇后，SOD活性下降，MDA含量升高[8-9]。本實(shí)驗(yàn)中，給予50%乙醇12 mL/（kg·bw）造模，模型對(duì)照組與溶劑對(duì)照組比較，小鼠血清和肝組織GSH、SOD、GSHPx水平均降低，MDA和蛋白質(zhì)羰基水平均升高。說明乙醇氧化損傷模型造模成功。

機(jī)體防御體系的抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度存在著密切聯(lián)系[10-11]。GSH的主要生理作用是清除體內(nèi)的自由基，做為體內(nèi)一種重要的抗氧化劑，保護(hù)蛋白質(zhì)和酶等分子中的巰基。GSH-Px和SOD是機(jī)體內(nèi)兩種重要的抗氧化酶。GSH-Px能催化過氧化氫的分解，SOD能夠清除超氧陰離子自由基，這兩種酶活力的變化能反映機(jī)體氧化損傷的程度；MDA和蛋白質(zhì)羰基分別是脂質(zhì)和蛋白質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，它們的變化可以反映細(xì)胞損傷的程度[12-13]。大量研究表明，當(dāng)機(jī)體遭受自由基攻擊而被氧化時(shí)，抗氧化劑的注入和使用，使抗氧化物質(zhì)GSH含量增加，血清和肝組織中抗氧化酶類SOD和GSH-Px活性等酶活性提高，MDA和蛋白質(zhì)羰基含量下降，從而使機(jī)體的抗氧化能力增強(qiáng)[14-15]。

本實(shí)驗(yàn)中，給予不同劑量的蘆薈銀杏復(fù)合制劑30天后，經(jīng)大劑量乙醇造模，實(shí)驗(yàn)劑量組與模型對(duì)照組比較，小鼠血清和肝組織GSH、SOD、GSH-Px水平升高，MDA和蛋白質(zhì)羰基水平降低。說明蘆薈銀杏復(fù)合制劑能夠使乙醇氧化損傷模型小鼠血清和肝組織抗氧化物質(zhì)GSH含量增加，抗氧化酶SOD和GSH-Px活力升高，脂質(zhì)氧化產(chǎn)物MDA含量降低，蛋白質(zhì)氧化產(chǎn)物蛋白質(zhì)羰基含量降低。

由于蘆薈凝膠中的多糖、酚類化合物和銀杏葉中的黃酮類化合物可以捕捉和清除 O2-·、·OH、H2O2、烷類自由基和脂類自由基等，通過對(duì)這些自由基起一種氫原子供體的作用而終止自由基連鎖反應(yīng)鏈，從而阻止和抑制氧自由基反應(yīng)和脂質(zhì)、蛋白質(zhì)過氧化反應(yīng)，抑制LPO及其代謝產(chǎn)物丙二醛、共軛二烯等活性毒副物質(zhì)的生成，抑制蛋白質(zhì)羰基生成[4-6]。同時(shí)，酚類、黃酮類化合物還可參與調(diào)節(jié)和提高SOD、GSH-PX等抗氧化酶的活性[16-17]，從而發(fā)揮抗氧化功效。

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